高效液相法测定清肝利胆口服液中绿原酸含量

张 健，梁 艳

(1．开封市食品药品检验所，河南开封 475002;2．河南省医药学校，河南开封 475001)

清肝利胆口服液由茵陈、山银花、栀子、厚朴4味中药组成，有清利肝胆湿热之功效，主治纳呆、胁痛、疲倦乏力、尿黄、苔腻、脉弦、肝郁气滞、肝胆湿热未清等症。山银花中含有绿原酸［1］，绿原酸具有抗菌、消炎、解毒、利胆、降压和升高白细胞及显著增加胃肠蠕动和促进胃液分泌等药理作用［2］。现用质量标准为《中国药典》2010版一部［3］，质量标准中无绿原酸含量测定项。本文采用高效液相色谱(HPLC)法，对口服液中绿原酸进行含量的测定。实验结果表明，本法简便、快速、准确，可用于含量的测定。

1 药品、试剂与仪器

清肝利胆口服液，10 mL/支，河南信心药业有限公司产品，批号100509，100607，101108。绿原酸对照品，中国药品生物制品检定所产品，批号110753-200413;乙腈、甲醇为色谱纯，磷酸为分析纯，水为纯化水。Waters 2695/2998型高效液相色谱仪，UVIKON-XL紫外分光光度计，CP-225D电子天平。

2 方法与结果

2．1 色谱条件与系统适用性试验［4-5］

参照文献［4-5］。色谱柱为Agela C18(250 mm×4．6 mm，5 μm)，流动相为乙腈—0．5 g/L 磷酸溶液［5］(10∶90)，检测波长327 nm，体积流量0．8 mL/min，柱温30．0℃，进样量10 μL。理论塔板数按绿原酸峰计算应不低于4 000。

2．2 溶液的制备

2．2．1 对照品溶液

精密称取经五氧化二磷减压干燥24 h的绿原酸对照品12．25 mg，置25 mL量瓶中，加500 g/L甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。

2．2．2 供试品溶液

精密量取供试品5 mL，置50 mL量瓶中，加500 g/L甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2．3 线性关系考察

精密量取对照品储备液5 mL，置于50 mL量瓶中，加500 g/L甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别取5，10，20，30，40 μL 进样，记录色谱图，以对照品进样量(μg)对峰面积Y作线性回归。结果回归方程(n=5)为：Y=106 377X+273 843(r=0．999)。线性范围为 0．245 ～1．960 μg。

2．4 精密度试验

取对照品溶液，按2．1色谱条件进样10 μL，连续进样6针，以绿原酸峰面积积分值计算RSD为0．4%。

2．5 重现性试验

取同一批号样品(批号100509)，按2．2．2制得供试品溶液5份，测定含量，绿原酸的平均含量为0．48 g/L，RSD 为 0．05%。

2．6 稳定性试验

配制一份供试品溶液，室温下在 0，1，2，4，6，8，12，24 h 分别进样10 μL，测得峰面积 RSD=0．52%(n=8)。结果表明，本品的供试品溶液在室温24 h内稳定性较好。

2．7 加样回收率试验

精密量取对照品储备液(0．49 g/L)和已知含量样品(批号100509，0．48 g/L)各1 mL，置25 mL 量瓶中，加500 g/L甲醇稀释至刻度，摇匀，作为加样回收供试品溶液。按2．1色谱条件进样20 μL，各测定2次。结果：平均回收率为 98．6%，RSD为0．39%(n=6)。

2．8 样品含量测定

分别精密量取3批样品，按供试品溶液制备方法制备溶液，分别进样10 μL，测定绿原酸含量，色谱图见图1～2，结果见表1。

表1 3批样品测定结果

3 讨论

根据绿原酸性质，比较提取溶剂，以500 g/L甲醇为最佳溶剂［6］。取对照品及供试品溶液，用UVIKON-XL紫外分光光度计在200～400 nm波长范围内扫描，结果在327 nm波长处有最大吸收，故选择327 nm为检测波长。通过对流动相组分及比例的比较，最终确定以乙腈—0．5 g/L磷酸溶液(10∶90)为流动相，样品中绿原酸与其他杂质峰能基线分离，理论塔板数为16 200。

［1］柴兴云，窦静，贺清辉，等．山银花中酚酸类成分研究［J］．中国天然药物，2004，2(6)：339-340．

［2］陈为烤，居文政，谈恒山．绿原酸的体内过程及药物相互作用［J］．中药药理与临床，2008，24(3)：118-120．

［3］国家药典委员会．中华人民共和国药典：一部［M］．北京：中国医药科技出版社，2010：1115-1116．

［4］陈叶青．高效液相法测定妇科止痒胶囊中绿原酸含量［J］．中国药业，2011，20(6)：32-33．

［5］丁家欣，张秋海，张智．高效液相色谱法测定牛蒡根中绿原酸的含量［J］．中国实验方剂学杂志，2008，1(14)：13-14．

［6］陈钢，侯世祥，胡平，等．金银花提取物中绿原酸的稳定性研究［J］．中国中药杂志，2003，28(3)：223-225．