电针“百会”、“风府”和“阳陵泉”对帕金森病模型大鼠氧化应激反应的影响*

郭春霞，张晓雷，邵水金△，郝 莉，朱 晶

(1.上海中医药大学，上海 201203;2海绿谷制药有限公司，上海 201203)

帕金森病 (Parkinson’s disease，PD)又称震颤麻痹，是一种多发于中老年人的常见的慢性神经系统退行性疾病，临床以静止性震颤、运动迟缓等为主要特征，尚有语言减少和声音低沉单调、吞咽困难、流涎、睡眠障碍、抑郁或痴呆等症状，严重影响患者的运动能力和生活质量。由于PD的病因尚未完全明确，于是提出各种假说，如遗传因素学说、氧化应激学说、环境因素学说、细胞凋亡学说等。而氧化应激学说在PD的发病中仍占主导地位［1－3］。此外，由于 PD是一种慢性进展性疾病，目前尚无根治的方法，治疗以左旋多巴等药物为主，但只能缓解临床症状，且疗效递减性以及副作用 (抑郁、焦虑、幻觉、欣快、精神错乱、轻度躁狂等)一直是困扰人们的难题。近年来，针灸以其自身优势，在改善PD的运动障碍、延缓PD进程、减少左旋多巴的毒副作用、提高患者的生活质量等方面已发挥了重要作用，逐渐受到人们的重视，针灸因此成为治疗帕金森病的方法之一［4］。本研究通过观察电针“百会”、“风府”和“阳陵泉”对帕金森病模型大鼠氧化应激反应的影响，探讨电针对帕金森病可能的作用机制。

1 材料和方法

1.1 动物

SPF级雄性SD大鼠60只，体重180～220g，由上海中医药大学实验动物中心提供，许可证号:SYXK(沪)2004－2005。

1.2 药物、试剂和仪器

药物及试剂:美多芭 (上海罗氏制药公司，批号SH11687)，6－羟基多巴胺 (美国 Sigma公司，批号048k3728)、阿扑吗啡 (美国 Sigma公司，批号100839－200601)、抗坏血酸 (美国Sigma公司，批号063k1082)，庆大霉素 (上海第一制药厂)，丙二醛 (MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH－Px)、谷胱甘肽 (GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒 (南京建成生物工程研究所)，戊巴比妥钠 (上海中西药业股份有限公司，批号WS20090920)，冰醋酸 (国药集团化学试剂有限公司)，等。

仪器:TOW－3A型大鼠脑立体定位仪 (广东汕头市教育医学仪器厂)，XW－80A型旋涡混合器 (上海医科大学仪器厂)，UV754N型紫外分光光度计 (上海精密科学仪器有限公司)，华佗牌针灸针 (苏州医疗用品厂)，KWD－808型全能脉冲电疗仪 (上海电子仪器厂)等。

1.3 PD模型制备方法

采用经典的PD模型［5］。术前按常规进行行为测试，确认无异常旋转行为后，用戊巴比妥钠(3%的戊巴比妥钠，50mg/kg)腹腔注射麻醉。然后将大鼠固定于脑立体定位仪上，头部去毛，苯扎溴铵常规消毒。无菌条件下，沿正中线切开大鼠颅顶皮肤，剥离骨膜，暴露前囟。以前囟为准，根据大鼠脑立体定位图谱［6］，确定右侧黑质二坐标:①前囟后5.2mm，正中线右侧1.0mm，硬膜下9.0mm。②前囟后5.2mm，正中线右侧2.5mm，硬膜下8.5mm。用颅骨钻于手术要求部位小心钻开颅骨，用5μL微量进样器将6－OHDA(溶于含0.02%抗坏血酸的生理盐水中，即秤量药品抗坏血酸0.001g，溶于生理盐水0.5mL中)注入右侧黑质部 (以1.0 mm/min速度缓慢进针)，每孔3μL，注射速度为1μL/min，注射完毕后留针5min，然后以1.0 mm/min速度缓慢退针。手术完成后，用医用明胶海绵填塞颅骨孔，缝合切口皮肤，肌肉注射庆大霉素7d，待动物清醒后放回饲养笼中饲养。正常对照组只固定大鼠，不进行任何处理。

10d后，以腹腔注射APO 0.5mg/kg诱发大鼠向一侧旋转，记录从开始旋转至30min内的旋转圈数，以旋转圈数平均＞7次/min者为合格的PD模型［7］。

1.4 分组及治疗

将成功PD模型大鼠 (31只)随机分为4组:①电针组9只:采用类比法取穴，腧穴定位如下:风府:在大鼠头项部，枕外隆凸直下凹陷处;百会:在大鼠头顶部，两耳尖连线的中点处;阳陵泉:在大鼠小腿外侧，膝关节下外1.5cm处。用0.25×13mm的针灸针，刺0.6～1cm深，稍行提插捻转手法。使用全能脉冲电疗仪，正、负电极输出线分别夹在“百会”、 “风府”和双侧“阳陵泉”穴位上的毫针针柄上。选用断续波型，电针频率为5hz，电流强度为20mA左右，以肌肉出现轻微抽动为准。每次刺激时间为15min，每日1次，每周6次，共治疗4周。②美多芭组8只:灌胃给药，剂量135mg/kg(10mL/kg)，每日1次，每周6次，共给药4周。③电针结合美多芭组8只:方法如电针组治疗结合美多芭组治疗，每日1次，每周6次，共治疗4周。④模型组6只:不做任何处理。正常对照组6只也不做任何处理。各组除干预措施不同外，其余各条件一律相同。

1.5 标本采集

治疗结束后，立即断头取脑，小心分离黑质，制备脑黑质匀浆液。操作方法:取脑黑质，在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，放入10 mL的匀浆管内;在匀浆管中加冷的0.86%盐水0.65mL，用眼科剪尽快剪碎脑黑质块;再加入冷的0.86%生理盐水0.3mL进行充分匀浆。将匀浆液以4000r/min离心15min，将上清液置－20℃冰箱中备用［8］。

1.6 检测指标及方法

氧自由基检测方法:取适量上清液进行MDA，GSH，GSH－Px和SOD的检测，具体方法按南京建成生物工程研究所试剂盒说明书步骤进行测试。

1.7 统计学方法

实验数据用 (mean±s)表示，两组间各参数比较采用SPSS 13.0统计软件，t检验方法进行统计学分析，其中P＜0.05说明两组之间差异有统计学意义，P＜0.01说明两组之间差异有统计学意义。

2 实验结果

动物造模成功率57.41%.与正常对照组比较，模型组SOD活性降低，MDA含量升高，GSH含量降低，GSH－PX活性降低，差异均有统计学意义 (P＜0.05)。与模型组比较，电针组、美多芭组、电针+美多芭组均能提高SOD、GSH－Px活性，提高GSH含量和降低MDA含量，差异均有统计学意义 (P＜0.05)。而美多芭组，电针组和电针+美多芭组黑质中SOD、MDA、GSH和GSH－Px含量测定结果比较，差异均无统计学意义 (P＞0.05)。(见表1)

3 讨论

《资生经》曰: “百会”又名天满，属督脉，为督脉与足太阳、手足少阳和足厥阴五条经脉之所会，故有“三阳五会”之称， 《针灸大成》中称“主心烦闷，惊悸健忘，忘前失后，心神恍惚”，具开窍醒神之功，针刺“百会”可以激发头部和诸经经气，治疗脑病和十四经病，调一身之阴阳气血，补脑益髓。风府穴出自《素问》，“头重，身痛，恶寒，治在风府”，《备急千金要方》风府主治“舌缓，不能言”，这些临床症状似属于帕金森病症状范畴;针刺风府穴可以振奋督脉阳气，宣散风邪，调理气血，使经脉气血疏通，临床帕金森病治疗有较多应用。阳陵泉穴始出自《灵枢·邪气脏腑病形》篇，是足少阳胆经合穴，又是八会穴之一的“筋会”，位于小腿外侧当腓骨头前下方凹陷处，是临床的常用穴;具有强健腰膝、通络止痛等功效;近年来，阳陵泉穴单穴或处方配穴应用治疗多种疾病，如肩周炎、膝关节炎、面肌痉挛、偏瘫、坐骨神经痛、扭挫伤等病证;临床研究认为针刺阳陵泉，对调整脑血流量有一定影响，对急性缺血性中风患者，通过针刺治疗取得良好疗效［9］。基于上述原因及其临床在治疗帕金森病的应用，本实验针对性的选择“百会”、 “风府”和“阳陵泉”三穴，并考察电针该三穴位对帕金森病模型大鼠氧化应激反应的影响，探讨电针对帕金森病可能的作用机制。

本实验结果表明，模型组与正常对照组比较，SOD活性降低，MDA含量升高，GSH含量降低，GSH－PX活性降低，提示帕金森病大鼠的氧化反应被激活，处于氧化应激状态;同时说明机体清除氧自由基的能力低，细胞膜结构和功能的完整性受损，机体细胞受自由基攻击的程度加重。与模型组比较，美多芭组、电针组、电针结合美多芭组均能提高SOD活性，提高GSH－Px活性，提高GSH含量和降低MDA含量，说明三种治疗方法均能使机体清除氧自由基的能力提高，机体细胞受自由基攻击的程度减轻，对细胞膜结构和功能的完整性起到保护的作用。而美多芭组，电针组和电针结合美多芭组组间测定结果比较，差异多无统计学意义，说明此三种治疗方法谁更略胜一筹，尚无定论。通过本实验可以推测，电针治疗清除过氧化脂质及自由基，提高机体抗氧化能力的作用机制，可能与其对机体的多方面调节作用有关，电针通过局部治疗与整体调节作用，达到了对自由基的清除作用，从而使机体免受自由基的损害。

［1］Di Monte DA.The environment and Parkinson's disease:is the nigrostriatal system preferentially targeted by neurotoxins［J］.Lancet Neurol，2003(2):531－538.

［2］Vila M，Przedborski S.Genetic clues to the pathogenesis of Parkinson's disease［J］.Nat Med，2004(10 suppl):S58－S62.

［3］Jenner P.Oxidative stress in Parkinson S disease ［J］.Ann Neurol，2003，53(suppl 3):S26 －S38.

［4］贾军，李博，孙作厘，等.电针防治帕金森病的实验研究.科技导报 ［J］，2007，25(23):74－80.

［5］Ungerstedt U，Arbthnott GW.Quantitative recording of rotational behavior in rats after 6－OHDA lesions the nigrostriatal dopamine system ［J］.Brian Res，1970，24:485－493.

［6］包新民，舒思.大鼠脑立体定位图谱［M］.北京:人民卫生出版社，1991:53.

［7］Carman LS，Gage GH，Shuhs CW.Partail lesion of the substantia nigra:relation.between extent of lesion and rotational behavior［J］.Brian Res.1991，553:275 －83.

［8］何建成，袁灿兴.6－羟基多巴胺帕金森病模型大鼠氧化应激反应［J］.中国组织工程研究与临床康复，2007，25(11):4920－4922.

［9］贾玉勤，张伦忠，冯乐燕，等.帕金森病的中医药治疗概况 ［J］.中国中医药科技，2010，15(2):183－184.