FGFR2基因多态性与乳腺癌相关性研究

徐维华 王守彪

1.山东省蓬莱市人民医院普外科，山东蓬莱 265600；2.青岛大学解剖教研室，山东青岛 266021

FGFR2基因多态性与乳腺癌相关性研究

徐维华1王守彪2▲

1.山东省蓬莱市人民医院普外科，山东蓬莱 265600；2.青岛大学解剖教研室，山东青岛 266021

目的 研究成纤维细胞生长因子受体2（FGFR2）基因单核苷酸多态性（SNP）与乳腺癌发生相关性。方法 实验组为280例乳腺癌患者，对照组为280名健康女性，运用等位基因扩增-聚合酶链反应（ASA-PCR）方法，对其FGFR2基因3个位点 （rs2912778、rs2981578、rs2981582）进行检测，并对扩增产物进行测序，分析其中2个位点（rs2912778、rs3135718）单核苷酸多态性与乳腺癌风险关系。结果 两个位点（rs2912778、rs3135718）基因型分布及等位基因频率在乳腺癌组和对照组差异具有高度统计学意义 （P＜0.01）。 结论 FGFR2基因两个位点（rs2912778、rs3135718）单核苷酸多态性可能与乳腺癌的发生有关。

单核苷酸多态性；成纤维细胞生长因子受体2；乳腺癌；相关性

乳腺癌是女性主要死亡原因之一，发达国家及发展中达国家均出现增长趋势。成纤维细胞生长因子受体2（FGFR2）参与胚胎形成、维持人体内稳态及癌变过程。国外研究表明，FGFR2可能与乳腺癌发生相关，可能成为雌激素受体阳性乳腺癌治疗的靶点[1]。本文运用等位基因扩增-聚合酶链反应（ASA－PCR）结合基因测序，分析FGFR2基因单核苷酸多态性与乳腺癌发生的关系。现报道如下:

1 资料与方法

1.1 一般资料

乳腺癌组280例，为青岛大学医学院附属医院2009年10月～2010年4月普外科确诊的女性乳腺癌患者，均行乳腺癌改良根治术，年龄24～71岁，中位年龄45岁。对照组280例，为青岛大学医学院附属医院体检健康的女性，年龄28～69岁，中位年龄47岁。两组年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 实验方法

抽取实验对象外周静脉血5 mL置于抗凝管中于-80℃保存备用。

1.2.1 提取DNA采用TIANGEN试剂盒提取DNA。

1.2.2 设计、合成引物 采用Primer Premier 5软件设计引物，由上海桑尼生物科技有限公司合成引物。3个位点的引物序列、目的条带长度见表1。

表1 3个位点的ASA引物序列

1.2.3 PCR扩增 配置ASA-PCR反应混合物，反应物均为：DNA 模板 0.8 μL、上游引物 0.8 μL、下游引物 0.8 μL、TaqMIX 0.5 μL，用超纯水补至 10 μL。rs2912778 反应条件：94 ℃预变性 5 min，94℃变性 30 s，60℃退火 30 s，72℃延伸30 s，30 个循环后，72℃延伸7min。rs3135718反应条件：94℃预变性5 min，94℃变性 30 s，60℃退火 30 s，72℃延伸 30 s，30 个循环后，72℃延伸 7 min。

1.2.4 扩增条带分析 以marker2000作为参照，将扩增产物进行凝胶电泳，拍照记录，并将目的条带进行基因测序检验。

1.3 统计学方法

应用SPSS 17.0版统计建立数据库，进行χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义，P＜0.01为差异有高度统计学意义。

2 结果

2.1 ASA-PCR结果

PCR产物电泳结果、测序结果见图1～4。

2.2 基因型及等位基因频率在乳腺癌组与对照组之间的分布

经检测，对照组符合Hardy-Weinberg定律。rs2912778、rs3135718基因型、等位基因频率分布在乳腺癌组与对照组之间均有高度统计学意义（P＜0.01）。见表1、2。

3 讨论

传统的乳腺癌治疗方法主要有手术、化疗、放疗、内分泌治疗等综合治疗，尽管使乳腺癌患者因此获益，但仍不能彻底消灭肿瘤细胞。癌变根本问题在于基因，即癌基因激活或是抑癌基因失活，因此，要想从根本上解决癌症问题，必须从基因着手。

表1 rs2912778位点基因型与等位基因频率分布统计[n（%）]

表2 rs3135718位点基因型与等位基因频率分布统计表[n（%）]

FGFR2基因编码跨膜酪氨酸激酶，在细胞生长、侵袭和血管生成等方面起作用。细胞系的功能研究提示，FGFR2通过选择性剪接在C-末端结构域，在肿瘤形成过程中发挥作用[2]。FGFR2与多种肿瘤有关，如乳腺癌、肾癌等[3-4]。FGFR2在乳腺肿瘤中出现扩增或过度表达[5-6]，一些关于人类和大鼠的实验证明，FGFR2是乳腺癌致病基因[7-11]。乳腺癌变小鼠模型的建立表明FGF信号通路是乳腺肿瘤形成的一个主要因素[4]，在乳腺上皮细胞，FGFR2特异性激活途径可能是依赖于此基因的不同剪接形式的平衡[12]。众所周知，FGFR2在人类乳腺癌的ER阳性肿瘤中表达增高，然而，FGFR2基因作为乳腺癌风险因子的机制尚未明了。

本文对乳腺癌组与对照组 rs2912778、rs3135718基因型、等位基因频率分布进行了统计分析，其中，rs2912778位点A/A基因型、A/G基因型在乳腺癌组和正常组中分别为8例（2.86%）、196 例（70.00%）和 60 例（21.43%）、151 例（53.93%），rs3135718位点T/T基因型、T/C基因型在乳腺癌组和正常组中分别为 26例（9.29%）、238例（85.00%）和 105例（37.50%）、144例（51.43%）。 结果表明，rs2912778、rs3135718基因型、等位基因频率分布在乳腺癌组与对照组之间均有高度统计学意义（P＜0.01）。同时，笔者对乳腺癌患者FGFR2基因两个SNP位点rs2912778、rs2981578进行检测，表明这两个位点突变可能是乳腺癌发生的风险因子。西伯利亚人口研究中，FGFR2基因的rs2912778增加了乳腺癌的患病风险[13]。Katoh M等[3]研究表明，FGFR2rs2981578位点与乳腺癌发生相关，本文结果与此较一致。乳腺癌是多因素综合作用的结果，因此，仍需更大量的样本进行进一步研究。

在肿瘤形成方面，FGFR2具有双重作用，可以是癌基因，也可以是抑癌基因。FGFR2基因突变的确定使我们进一步了解了肿瘤的病因学，通过对FGFR2基因一系列的生殖细胞系或体细胞系的突变研究，进一步扩展了FGFR2基因相关疾病的范围。针对FGFR2突变导致恶性肿瘤，抑制FGFR2突变或将突变的基因进行修复，有针对性地进行个体化治疗，可为FGFR2基因突变相关恶性肿瘤提供一个合理的、可能有效的新途径，具有重要的研究价值和应用前景。

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Relative research of FGFR2 gene SNPs and breast neoplasm

XU Weihua1WANG Shoubiao2▲
1.General Surgery Department,the People's Hospital of Penglai City in Shandong Province,Penglai 265600,China;2.Anatomy Department,Medical College of Qingdao University,Qingdao 266021,China

Objective To study the relationship of the single nucleotide polymorphisms(SNP)in the fibroblast growth factor receptor 2 gene(FGFR2)and the development of breast neoplasm.Methods Two hundred and eighty patients with breast neoplasm and 280 healthy women were randomly selected.Allele amplification-polymerase chain reaction(ASA-PCR)method was used to detect the FGFR2 gene three loci(rs2912778,rs2981578,rs2981582),and the amplified products were sequenced.The risk relationship between the two sites(rs2912778,rs3135718)single nucleotide polymorphisms and breast cancer were analyzed.Results There were significant differences in the genotype frequency and allele frequency between the two groups(P＜0.01).Conclusion The SNP of rs2912778 and rs3135718 in the FGFR2 is probably connected with the development of breast neoplasm.

Single nucleotide polymorphism;FibrobIast growth factor receptor 2;Breast neoplasm;Correlation

R737.9

A

1674-4721（2012）11（c）-0017-03

徐维华（1973-），男，青岛大学2008级在读硕士研究生，主治医师，主要从事胃肠、乳腺、甲状腺等方面疾病的诊治工作。

▲通讯作者：王守彪，青岛大学解剖教研室，教授。

2012-10-17 本文编辑：陈 俊）