复方红景天制剂提高小鼠运动耐力的实验研究

徐 荣，葛 华，王永新 （. 空军总医院药学部，北京 004；. 空军航空医学研究所，北京 004）

红景天为景天科红景天属多年生草本植物，是我国藏民族著名的传统药材之一，具有扶正固本、理气养血、健脑益智和滋补强身的功效[1]。近年来研究表明，红景天能增强人体对不利环境的抵抗力，具有抗疲劳、抗寒冷、抗衰老等多种生理活性，具有明显增强机体抗逆性和适应性作用[2]；刺五加具有抗疲劳、抗衰老、提高机体免疫力等药理活性[3]；黄芪具有显著的抗疲劳作用，且具有一定的剂量依赖性[4]。我们根据中药的配伍原则，将红景天与刺五加、黄芪相配伍研制成复方红景天制剂，并以小鼠为对象进行药效学研究，观察该产品提高运动耐力的效果。

1 材料与方法

1.1 仪器

CHE360全自动生化分析仪（上海宝特生命科学发展有限公司）；YSI1500乳酸盐分析仪（上海益联科教设备有限公司）；721分光光度计（南京艾赛特科技发展有限公司）；HT电子天平（上海信衡电子有限公司）。

1.2 药品与试剂

复方红景天制剂（北京长城制药厂，0.25 g/粒，批号20100701）；乳酸仪酶膜、破膜液、5 mmol·L-1乳酸标准液、缓冲液（上海博蕴生物科技有限公司）；肌糖原及肝糖原测定试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号20101125）。

1.3 实验动物

成年健康昆明种雌性小鼠（SPF级）由军事医学科学院实验动物中心提供，体重19 ～ 21 g，实验动物许可证号：SCXK-（军）2007-004。实验室温度为20 ～ 24 ℃，相对湿度为40% ～ 70%RH，群笼饲养，10只/笼。

1.4 剂量设计及药液配置

按推荐日摄入量（25 mg·kg-1）的1、10、30倍即25、250、750 mg·kg-1为三个剂量组，同时设阴性对照组，按0.1 mL/10 g灌胃给予复方红景天制剂，每天1次，连续35 d。阴性对照组给予去离子水。

精密称取复方红景天制剂7.5 g，加去离子水至100 mL，即为高剂量组（750 mg·kg-1），将高剂量组用去离子水稀释3倍为中剂量组（250 mg·kg-1），将中剂量组用去离子水稀释10倍为低剂量组（25 mg·kg-11）。

1.5 小鼠负重游泳实验

取小鼠40只，按体重随机分为4组，每组10只，低、中、高剂量组和阴性对照组。末次给药30 min后，置于游泳箱中游泳，水深约30 cm，水温（25±0.5） ℃，小鼠尾根部负荷5%体重的铅皮。记录小鼠自游泳开始至死亡的时间，作为小鼠负重游泳时间。

1.6 血清尿素测定

取小鼠40只，分组同“1.5”项下，末次给药30 min后，在30 ℃的水中游泳90 min，休息60 min后立即内眦采血0.5 mL。于4 ℃静置3 h后3000 r·min-1离心15 min，取血清，用全自动生化分析仪测定血清尿素值。

1.7 肝糖原测定

取小鼠40只，分组同“1.5”项下，末次给药30 min后，立即处死，取肝脏经0.9%氯化钠注射液漂洗后用滤纸吸干，精确称取肝脏100 mg，用肌糖原及肝糖原测定试剂盒测定肝糖原含量。

1.8 血乳酸测定

取小鼠40只，分组同“1.5”项下，末次给药30 min后，采血20 μL加入40 μL破膜液中，振荡均匀。然后让小鼠在温度为30 ℃的水中游泳10 min后取出立即采血20 μL，加入40 μL破膜液中，振荡均匀。休息20 min后，再采血20 μL，加入40 μL破膜液中，振荡均匀。用乳酸盐分析仪测定上述3个时间点的血乳酸含量，所得值乘3即为血乳酸值。血乳酸变化值 = 1/2×（游泳前血乳酸值+游泳后的血乳酸值）×10 + 1/2×（游泳后的血乳酸值+休息20 min后的血乳酸值）×20。

1.9 数据处理

采用SPSS11.0统计软件进行统计学分析，各组数据分别以（±s）表示。P＜0.05表示差异有统计学意义，P＜0.01表示差异极显著。根据卫生部《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版），负重游泳试验结果阳性，且血乳酸、血清尿素、肝糖原3项生化指标中任2项指标阳性，即可判定该受试物具有缓解体力疲劳的作用。

2 结果

2.1 复方红景天制剂对小鼠负重游泳时间的影响

按实验方案灌胃给药35 d，进行负重游泳实验，统计与方差分析结果见表1。结果表明，复方红景天制剂中剂量组负重游泳时间明显长于阴性对照组，且差异显著（P ＜ 0.05）。

表1 复方红景天制剂对小鼠负重游泳时间的影响. n = 10, ±sTab 1 Effect of Rhodiola Compound on the swimming time of mice bearing a load. n = 10, ±s

表1 复方红景天制剂对小鼠负重游泳时间的影响. n = 10, ±sTab 1 Effect of Rhodiola Compound on the swimming time of mice bearing a load. n = 10, ±s

注：与阴性对照组比较，*P＜0.05Note: compared with the control group, *P＜0.05

组别 剂量/mg·kg-1 负重游泳时间/min阴性对照组 0 47.58±7.95低剂量组 25 46.83±9.42中剂量组 250 61.43±11.24*高剂量组 750 48.01±16.91

2.2 复方红景天制剂对血清尿素含量的影响

与阴性对照组相比，复方红景天制剂各剂量组不能减少疲劳小鼠血清尿素的产生，差异无显著性（P＞0.05）。复方红景天制剂对血清尿素含量影响的结果见表2。

表2 复方红景天制剂对血清尿素的影响. n = 10, ±sTab 2 Effect of Rhodiola Compound on the serum urea content of the mice. n = 10, ±s

表2 复方红景天制剂对血清尿素的影响. n = 10, ±sTab 2 Effect of Rhodiola Compound on the serum urea content of the mice. n = 10, ±s

组别 剂量/mg·kg-1 血清尿素/mmol · L-1阴性对照组 0 10.65±0.80低剂量组 25 10.74±0.79中剂量组 250 10.63±1.03高剂量组 750 10.49±1.11

2.3 复方红景天制剂对肝糖原含量的影响

按实验方案灌胃给药35 d，末次给药30 min后取肝脏测定肝糖原含量，统计与方差分析结果见表3。结果表明，与阴性对照组相比，复方红景天制剂各剂量组具有提高肝糖原的作用，且差异极显著（P＜0.01）。

表3 复方红景天制剂对肝糖原含量的影响. n = 10，±sTab 3 Effect of Rhodiola Compound on the hepatic glycogen content of the mice. n = 10, ±s

表3 复方红景天制剂对肝糖原含量的影响. n = 10，±sTab 3 Effect of Rhodiola Compound on the hepatic glycogen content of the mice. n = 10, ±s

注：与阴性对照组比较，**P＜0.01Note: compared with the control group, **P＜0.01

组别 剂量/mg·kg-1 肝糖原/mg·g-1阴性对照组 0 53.89 ± 16.26低剂量组 25 72.11 ± 9.66**中剂量组 250 69.16± 11.38**高剂量组 750 83.82 ± 11.81**

2.4 复方红景天制剂对小鼠运动后血乳酸的影响

游泳前，各剂量组小鼠血乳酸水平与对照组相比差异无统计学意义（P ＞ 0.05）；游泳后，各组小鼠血乳酸值与运动前相比都有不同程度的升高，中、高剂量组的血乳酸值明显低于对照组（P＜0.01）。与阴性对照组相比，复方红景天制剂中、高剂量组具有降低疲劳时乳酸含量的作用，且差异极显著（P＜0.01）。

表4 复方红景天制剂对血乳酸的影响. n = 10，±sTab 4 Effect of Rhodiola Compound on the lactic acid of the mice. n = 10, ±s

表4 复方红景天制剂对血乳酸的影响. n = 10，±sTab 4 Effect of Rhodiola Compound on the lactic acid of the mice. n = 10, ±s

注：与阴性对照组比较，**P＜0.01Note: compared with the control group, **P＜0.01

血乳酸变化值/mmol·L-1阴性对照组 0 2.70±0.47 4.79±0.66 2.49±0.69 110.20±12.10低剂量组 25 2.12±0.56 4.85±1.04 2.37±0.88 107.10±19.70中剂量组 250 1.85±0.42 3.11±0.57 1.56±0.37 71.60±10.10**高剂量组 750 2.25±0.56 2.61±0.84 1.89±0.49 69.30±14.40**组别 剂量/mg·kg-1运动前血乳酸值/mmol·L-1运动后血乳酸值/mmol·L-1休息20 min后血乳酸值/mmol·L-1

3 讨论

体力疲劳是指机体生理过程不能将其功能维持在一个特定水平，或各器官不能维持其预定的运动强度。所谓抗疲劳、提高运动耐力就是延缓疲劳的产生或加速疲劳的消除[5]。目前体力疲劳的评价方法主要有两个：运动耐力实验和生化指标的检测。负重游泳时间一直以来被作为反映运动耐力的重要指标[6]。在反映疲劳的生化指标中，血清尿素、肝糖原含量、血乳酸等生化指标的改变最具代表性。血清尿素浓度与机体疲劳程度及机体机能密切相关，随着机体负荷的增加而升高；机体剧烈运动后，糖原被大量消耗，通过测定运动后肝糖原含量，可以评价耐疲劳发生的程度；血乳酸水平可以反映有氧代谢能力、疲劳的产生和消除速度[7]。本研究结果表明，复方红景天制剂可以明显延长小鼠负重游泳时间，增加小鼠肝糖原含量，降低运动后血乳酸值，提示复方红景天制剂具有一定的抗疲劳作用。

复方红景天制剂中的红景天具有扶正固本、补气养血的功效，可用于缓解各种原因引起的疲劳症状。研究[8-9]表明，红景天可以通过预防毛细血管的收缩而加快血液循环，提高机体对低氧环境的适应；红景天还可以使机体更节省地利用糖原和ATP，增加糖原储备，减少运动时肝糖原的消耗，及时消除由于剧烈运动产生的乳酸。乳酸脱氢酶（LDH）活性升高可以加快乳酸的清除，刺五加的主要成分刺五加总苷通过提高代谢条件物质LDH的活力使血乳酸水平降低可能是其提高抗疲劳能力的一个重要途径[10]；黄芪可以加快运动过程中血清和骨骼肌中自由基的清除，从而减少氧自由基对人体的损害，延缓疲劳的发生[11]。刺五加、黄芪均有抗疲劳、抗氧化、增强机体免疫力的功能，与红景天配伍，可以增强其抗疲劳的效果，其机制可能与改善机体物质代谢、提高机体有氧代谢能力有关，但具体机制尚需进一步研究。