不同MH琼脂对于替加环素对鲍曼不动杆菌药敏结果的影响

崔俊昌，宋秀杰（解放军总医院呼吸科，北京 100853）

多重耐药鲍曼不动杆菌（MDR-AB）是院内获得性感染的重要病原菌，虽然这些菌株对目前临床常用的所有抗生素几乎都表现为耐药，但对替加环素仍非常敏感[1-2]。目前美国临床实验室标准化研究所（CLSI）还没有关于替加环素对鲍曼不动杆菌的标准药敏测定方法和药敏判读标准。E-test法、纸片扩散法和微量肉汤稀释法的结果差别较大[3-4]。E-test法、纸片扩散法药敏研究结果表明，不同厂家生产的MH琼脂（MHA）对结果存在明显的影响[5-6]。不同厂家的MHA对琼脂稀释法药敏结果是否有影响，目前尚不清楚。本研究观察了不同厂家生产的MHA对于替加环素对鲍曼不动杆菌琼脂稀释法药敏结果的影响，为琼脂稀释法药敏测定中MHA的选择和结果的解释提供参考。

1 材料与方法

1.1 细菌

金黄色葡萄球菌ATCC29213和大肠埃希菌ATCC25922，购自中国药品生物制品检定所。50株鲍曼不动杆菌临床分离菌，来自解放军总医院、北京协和医院和北京医院临床标本。所有菌株均经VITEK微生物分析仪鉴定。

1.2 培养基

Mueller-Hinton（MH）琼脂分别为美国BD公司的Difco MHA、英国Oxoid公司的Oxoid MHA、中国北京三药科技开发公司生产的美坛MHA和北京奥博星生物技术责任有限公司的奥博星MHA。

1.3 抗菌药物

替加环素，购自辉瑞制药有限公司。

1.4 最低抑菌浓度（MIC）测定

采用琼脂稀释法，分别取不同厂家生产的MHA，加入双蒸水，高温高压灭菌后，新鲜琼脂分别配制不同替加环素浓度的平皿，琼脂平皿配好后，12 h内用于药敏测定。菌液的配制及测定方法按CLSI推荐的方法进行，以ATCC25922和ATCC29213为质控菌。结果判读标准参照美国FDA制定的替加环素对肠杆菌的判读标准：≤2 μg·mL-1为敏感，4 μg·mL-1为中介，≥ 8 μg·mL-1为耐药。

1.5 数据处理

根据MIC结果，计算MIC90、敏感率、中介率和耐药率。

2 结果

2.1 替加环素对质控菌的MIC值

应用不同的M H A时，替加环素对质控菌ATCC25922和ATCC29213的MIC值存在明显差别。具体结果见表1。

表1 采用不同MH琼脂时替加环素对质控菌的MIC值. μg·mL-1Tab 1 MIC of tigecycline for quality control strains with different MHAs. μg·mL-1

2.2 替加环素对临床分离鲍曼不动杆菌菌株的MIC值

应用不同的MHA进行琼脂稀释法药敏测定，替加环素对50株鲍曼不动杆菌的MIC值分布及敏感率有着明显的差别。具体见表2和表3。采用Difco MHA、Oxoid MHA、美坛MHA和奥博星MHA时，替加环素的MIC90分别为2、4、4、16 μg·mL-1。替加环素的敏感率分别为100%、6% 、6%和0。

表2 应用不同MH琼脂时替加环素对鲍曼不动杆菌的MIC值分布Tab 2 Distribution of MICs of tigecycline for Acinetobacter baumannii with different MHAs

表3 应用不同MH琼脂时替加环素对鲍曼不动杆菌药敏结果的影响Tab 3 Effect of different MHAs on tigecycline susceptibility for Acinetobacter baumannii

3 讨论

TEST（tigecycline evaluation and surveillance trial）结果表明，采用微量肉汤稀释法，替加环素耐药不动杆菌的比例为2.4%[6]。Navon-Venezial等[7]报道在以色列替加环素对鲍曼不动杆菌的耐药率高达66%，这引起了人们关于不同试验方法学和所采用的琼脂或肉汤对替加环素药敏结果影响的研究。目前认为，采用不同厂家生产的MHA，对E-test法和纸片扩散法的结果有很大影响，并发现采用Oxoid MHA比应用Difco MHA时敏感率明显降低[8-9]。而不同厂家的MHA对于琼脂稀释法的结果是否有影响，目前尚未见明确报道。但从孙谦等[10]报道的结果看，多重耐药鲍曼不动杆菌对替加环素的耐药率高达78.9%，这一结果明显高于国内外其他文献的报道；虽然作者按CLSI的操作规程进行琼脂稀释法药敏试验，但应用的是Oxoid MHA，这一结果也提示，应用不同厂家的MHA可能对琼脂稀释法药敏结果有明显的影响。

CLSI中替加环素对质控菌ATCC29213的质控范围为0.03 ～ 0.25 μg·mL-1，ATCC25922的质控范围为0.03 ～ 0.25 μg·mL-1。从本文结果可以看出，应用奥博星MHA时，结果明显超出其质控范围。应用Difco、Oxoid和美坛MHA时，虽然MIC值均在质控范围内，但仍有一定差别。

从对临床菌株测定的结果看，应用不同的MHA进行琼脂稀释法药敏测定时，MIC分布存在明显的差别。应用Difco MHA时，MIC值主要集中在1 μg·mL-1；应用Oxoid和美坛的MHA时MIC值主要集中在4 μg·mL-1；而应用奥博星MHA时，MIC值主要集中在16 μg·mL-1。

应用不同的MHA进行琼脂稀释法药敏测定时，替加环素对鲍曼不动杆菌的敏感率有着明显的差别。应用Difco MHA，替加环素的敏感率为100%；而应用Oxoid、美坛和奥博星MHA时敏感率明显降低。产生这一差别的原因可能与不同厂家生产的MHA中镁离子浓度不同有关[8]。

采用琼脂稀释法测定替加环素对鲍曼不动杆菌的MIC时，选用不同厂家生产的MHA对结果会有明显的影响。因此，在解释药敏试验结果时，应注意所选用的MHA。尤其是对于应用Difco MHA时MIC≥1 μg·mL-1的菌株，采用其他厂家的MHA时，其药敏结果可能会判断为中介或耐药，这样就会影响或误导临床医生对药物的选择。