元参组方对急性辐射损伤的保护机理研究

曾 婷，郝 丽，金 星，路松毅，谢逸欣，马 丽，刘保昌

(1.广州军区疾病预防控制中心，广州 510507;2.76160部队，广州 510055;3.广东省卫生监督所，广州 510300)

急性骨髓型放射病是机体受到大剂量核辐射后，以骨髓造血功能衰竭、全血细胞减少、免疫功能低下等全身性疾病［1］。在中药抗辐射损伤研究中，中药天然药物复方、单味中药有效成分已有不少文献报道［2～4］。为了探讨中药组方对急性骨髓型放射病的治疗效果，用小鼠作模型，比较系统地观察了元参组方对辐射损伤小鼠外周白细胞、骨髓有核细胞及干、祖细胞(CFU-S、CFU-G)的影响。

1 材料与方法

1.1 元参组方

元参组方由元参、黄芩、二花、漏芦、红花、三棱、吐丝、鸡血藤、土大黄、茜草、甘草11种中药按常规水煮酒提方法灭菌后制成每5g生药制成1ml注射液，养血饮由长白山制药厂生产。

1.2 动物

用日龄50d～60d昆明种小鼠，体重20g～24g，雌雄各半，随机分为试验组、阴性对照组、阳性对照组。

1.3 仪器

FA1104上皿电子天平，上海精密科学仪器有限公司;2300C/D直线加速器，美国Varian公司;贝克曼-库尔特5分类血细胞计数仪，美国 Backman公司;双目光学显微镜(OLYMPUS)，日本生产。

1.4 数据

2 方法

2.1 急性辐射损伤模型的建立

小鼠以X射线全身一次性照射，组织吸收剂量7.0Gy。

2.2 治疗方法

治疗组于照射后一次性注射元参组方提取液0.2ml，阴性小鼠于照射后注射等体积的生理盐水，阳性对照组小鼠于照射后灌喂养血饮0.3ml。

2.3 骨髓有核细胞计数

接受7.0Gy照射的小鼠在照后第10天被断颈处死，无菌条件下取每鼠后肢股骨1根，在2ml 1640培养液冲出其骨髓，并将骨髓单细胞悬液通过4号针头，做有核细胞计数。

2.4 粒系造血祖细胞(CFU-G)测试方法

采用体内扩散盒琼脂培养法。培养体系由199培养液、25%新鲜健马血清、0.3%琼脂和骨髓有核细胞组成。每个单面扩散盒内注入0.2ml(含104有核细胞)，待凝固后埋入在24h前经环磷酰胺注射的(300mg/kg腹腔注射)昆明种小鼠腹腔内。5d后取出扩散盒，在低倍镜下计算细胞集落，50个以上细胞组成的集落为1个CFU-G。

2.5 内源性脾结节的计数

接受7.0Gy照射的小鼠在照后第10天被断颈处死，取出脾脏置于苦味酸饱和溶液(Bouin氏固定液)中固定6h，然后取出以肉眼计数脾凸面的灰白色圆形结节。

3 结果

3.1 元参组方对受照小鼠外周白细胞的作用(见表1)

3.2 元参组方对受照小鼠骨髓有核细胞含量的影响(见表2)

3.3 元参组方对受照小鼠骨髓粒系造血祖细胞的影响(见表3)

表1 元参组方对7.0Gy照射小鼠20天白细胞的影响

表2 元参组方对7.0Gy照射小鼠10d骨髓有核细胞含量的影响

表3 元参组方对7.0Gy照射小鼠10天骨髓粒系造血祖细胞(CFU-G)的影响

3.4 元参组方对内源性脾结结节(CFU-S)的影响(见表4)

表4 元参组方对7.0Gy照射小鼠10d造血干细胞(CFU-S)的影响

3 讨论

在前期的实验中，我们观察了元参组方作用剂量和时间对造血系统影响［5，6］。本实验对照国家卫生部认可的生白药物“养血饮”，研究元参组方对照射后小鼠外周血白细胞的作用。表1、2表明，元参组方有明显的促进恢复作用，并能使受照小鼠骨髓有核细胞数量明显增加，其疗效高于“养血饮”，表明元参组方确有保护骨髓核细胞、减轻放射损伤程度的作用。表3显示，元参组方对受照小鼠的骨髓造血祖细胞有很好的保护作用，其疗效也优于“养血饮”，推测元参组方促使造血干细胞增殖和向粒系祖细胞和T淋巴祖细胞分化［6］。

小鼠全身照射亚致死量7～7.5Gy后，骨髓中部分存活的CFU-S迁移到脾脏形成结节(CFU-S)，这些CFU-S是属于自身的，故称为内源性 CFUS［7］。表4的实验结果表明，小鼠的 CFU-S数量明显高于阴性及阳性对照组，表明元参组方能增加内源性多能造血干细胞向脾脏转移。虽然被亚致死剂量照射小鼠可杀死部分造血干细胞，但残存的干细胞可能会由于元参组方的作用保留和恢复自我复制的能力。

［1］郭力生.防原医学［M］.北京:原子能出版社，2006:55-65.

［2］王昌林，辛海亮，李昱，等.中药天然药物抗辐射损伤的研究进展［J］.新兴医药研究，2007，17(6):705-709.

［3］陈晓萍，徐作武，姜薇.造血细胞发育调控机制的研究进展［J］.浙江工业大学学报，2007，35(1):6-9.

［4］蔡哲，谢阳谷.中药与干细胞生物学［J］.北京中医杂志，2002，21(5):259-261.

［5］刘保昌，虢国泰，马丽，等.元参组方对粒系造血祖细胞的增殖作用［J］.热带医学杂志，2009，12(9):1391-1393.

［6］刘保昌，虢国泰，曾婷，等.元参组方对小鼠造血干细胞的增殖作用［J］.华南国防医学杂志，2009，23(6):28-30.

［7］唐佩弦，等.造血细胞培养技术［M］.西安:陕西科学技术出版社，1985:93-107.