HPLC法同时测定复方儿茶酊中儿茶素与原儿茶素的含量

龙潇鸿，范卫东，郑娇妮

（1.重庆医科大学附属第二医院，重庆400010；2.重庆市第四人民医院药剂科，重庆400014）

HPLC法同时测定复方儿茶酊中儿茶素与原儿茶素的含量

龙潇鸿1＊，范卫东1#，郑娇妮2

（1.重庆医科大学附属第二医院，重庆400010；2.重庆市第四人民医院药剂科，重庆400014）

目的：建立同时测定复方儿茶酊中儿茶素与原儿茶素含量的方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为YMC ODS（250 mm×4.6 mm，5μm），流动相为0.04 mol·L－1枸橼酸溶液-N，N-二甲基甲酰胺-四氢呋喃（45∶8∶2，V/V/V），流速为1.0 mL·min－1，检测波长为280 nm，柱温为35℃。结果：儿茶素与原儿茶素的检测浓度分别在0.051 8～0.259 0、0.010 1～0.203 0 mg·mL－1（r均为0.999 9）范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系；平均加样回收率分别为101.63%和100.49%，RSD分别为1.27%和1.12%（n均为9）。结论：本方法简便、准确、稳定，能有效控制复方儿茶酊的质量。

高效液相色谱法；复方儿茶酊；儿茶素；原儿茶素；含量测定

复方儿茶酊主要由儿茶、黄柏、冰片等常用中药组成，具有收湿敛疮、清热解毒的作用，同时对烧伤具有抗菌消肿、活血止痛、促进创面愈合的功效，临床主要用于治疗各种原因引起的烧烫伤[1]，至今约有30余年的临床应用历史。本方君药儿茶味苦、性寒，功能收湿生肌敛疮，《本草正》曰：“用治湿烂诸疮”。因此，对本方儿茶中主要有效成分儿茶素、原儿茶素的含量进行有效控制尤为必要。笔者采用高效液相色谱（HPLC）法对本方中儿茶素、原儿茶素的含量进行了测定，以为该制剂的质量控制提供依据。

1 仪器与试药

LC-20AT型HPLC仪、AW-200型电子天平（日本岛津公司）；KQ-250B型超声仪（巩义市予华仪器有限责任公司，功率：250 W，频率：40 kHz）。

儿茶素、原儿茶素对照品（中国食品药品检定研究院，批号分别为877-200001、879-200203）；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯；复方儿茶酊（批号：20100920-1、20100920-2、20100920-3）及缺儿茶的阴性样品均由重庆医科大学药物分析实验室制备。

2 方法与结果[2～5]

2.1 色谱条件

色谱柱：YMC ODS（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：0.04 mol·L－1枸橼酸溶液-N，N-二甲基甲酰胺-四氢呋喃（45∶8∶2，V/V/V）；流速：1.0 mL·min－1；检测波长：280 nm；柱温：35℃。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 精密称定儿茶素对照品0.002 59 g，置于10 mL量瓶中，以50%甲醇定容，制得每1 mL含0.259 mg的儿茶素对照品溶液；精密称定原儿茶素0.002 03 g，置于10 mL量瓶中，以50%甲醇定容，制得每1 mL含0.203 mg的原儿茶素对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液 精密移取样品1 mL，置于100 mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照溶液 取缺儿茶的阴性样品0.5 g，按“2.2.2”项下方法制备阴性对照溶液，即得。

2.3 系统适用性试验

分别取阴性对照溶液、儿茶素对照品溶液、原儿茶素对照品溶液、供试品溶液各适量，按上述色谱条件进样测定，对系统适用性参数进行考察。结果，儿茶素和原儿茶素的理论板数分别为5 689、7 526；分离度为5.36。供试品溶液中儿茶素和表儿茶素的峰与其他峰能达到基线分离，且阴性对照无干扰。色谱见图1。

2.4 线性关系考察

分别取儿茶素对照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL，加50%甲醇溶解并定容至10 mL量瓶中，得一系列儿茶素对照品溶液。精密吸取上述儿茶素对照品溶液各10μL，分别注入液相色谱仪，按上述色谱条件进样测定。以儿茶素峰面积积分值（X）为横坐标，进样浓度（Y，mg·mL－1）为纵坐标，绘制标准曲线，得儿茶素的回归方程为Y＝0.000 172X+2.255 312（r＝0.999 9，n＝5）。结果表明，儿茶素进样浓度在0.051 8～0.259 0 mg·mL－1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

图1 高效液相色谱图A.儿茶素对照品；B.原儿茶素对照品；C.供试品；D.阴性对照Fig 1 HPLC chromatogramsA.catechin control；B.epicatechin control；C.test samples；D.negative control

分别取原儿茶素对照品溶液 0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL，加50%甲醇溶解并定容至10 mL量瓶中，得一系列原儿茶素对照品溶液。精密吸取上述原儿茶素对照品溶液各10 μL，分别注入液相色谱仪，按上述色谱条件进样测定。以原儿茶素峰面积积分值（X）为横坐标，进样浓度（Y，mg·mL－1）为纵坐标，绘制标准曲线，得原儿茶素的回归方程为Y＝0.000 176X+0.159 399（r＝0.999 9，n＝7）。结果表明，原儿茶素进样浓度在0.010 1～0.203 0 mg·mL－1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

2.5 精密度试验

取儿茶素对照品溶液与原儿茶素对照品溶液各适量，重复进样6次，记录峰面积。结果，儿茶素、原儿茶素峰面积的RSD分别为2.3%、2.1%（n均为6），表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

精密移取同一供试品溶液（批号：20100920-1）适量，分别于0、4、8、12、18、24 h进样10μL，记录峰面积。结果，儿茶素、原儿茶素峰面积的RSD分别为0.56%、0.98%（n均为6），表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.7 重复性试验

精密移取同一批（批号：20100920-1）样品适量，按“2.2.2”项下方法平行制备6份供试品溶液，计算各组分含量。结果，儿茶素和原儿茶素含量的RSD分别为0.15%、1.52%（n均为6），表明本方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验

精密移取0.1 mL儿茶素含量为9.04 g·L－1的样品（批号：20100920-1），置于10 mL量瓶中，平行9份，每3份分别加入儿茶素对照品溶液2.5、3.0、3.5 mL，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按上述色谱条件测定，计算儿茶素的加样回收率，结果见表1。

精密移取0.1 mL原儿茶素含量为1.32 g·L－1的样品（批号：20100920-1），置于10 mL量瓶中，平行9份，每3份分别加入原儿茶素对照品溶液1.5、2、2.5 mL，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按上述色谱条件测定，计算原儿茶素的加样回收率，结果见表2。

表1 儿茶素的加样回收率试验结果（n＝9）Tab 1 Results of recovery test of catechin（n＝9）

表2 原儿茶素的加样回收率试验结果（n＝9）Tab 2 Resultsof recovery test of epicatechin（n＝9）

2.9 样品含量测定

取3批样品，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，各进样10μL，照上述方法测定3批复方儿茶酊中儿茶素、原儿茶素的峰面积，按标准曲线法计算含量，结果见表3。

3 讨论

表3 样品含量测定结果（n＝3）Tab 3 Results of content determination of samples（n＝3）

复方儿茶酊用药后在创面形成一层药膜，可立即解除烧灼感，使患者获得清凉感而止痛；可以减少渗出和体液蒸发，减少补液和抗生素的应用；该药收敛迅速形成痂皮，使创面与该药接触处呈湿润状态，对烧伤后间生态组织有保护作用，促使上皮组织再生修复，因此在临床应用多年，口碑较好。

本方法简便、稳定、专属性强、灵敏度高，能有效控制复方儿茶酊的质量；并对于含儿茶的制剂，本法同样适用于其中儿茶素与原儿茶素含量的测定，从而为此类品种的质量控制提供了一种有效方法。

[1] 王权龙.复方儿茶酊治疗烧伤35例[J].陕西中医，2010，31（10）：1 365．

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：9.

[3] 曲银锋，李松武，刘乃强，等.HPLC法测定小儿泻速停颗粒中儿茶素和表儿茶素的含量[J].食品与药品，2009，11（5）：39．

[4] 高剑锋，易以木，邱 娟，等.HPLC法测定复方儿茶软膏中儿茶素和表儿茶素含量[J].药物分析杂志，2007，27（7）：1 105．

[5] 王 勤，侯铁军.HPLC法测定锁阳中原儿茶酸的含量[J].中国药房，2007，18（15）：1 170．

Content Determination of Catechin and Epicatechin in Compound Catechu Tinctureby HPLC

LONG Xiao-hong，FAN Wei-dong
（The Second Affiliated Hospital of Chongqing Medical University，Chongqing 400010，China）
ZHENG Jiao-ni
（Dept.of Pharmacy，Chongqing Fourth People’s Hospital，Chongqing 400014，China）

OBJECTIVE：To establish the method for the content determination of catechin and epicatechin in Compound catechu tincture.METHODS：HPLC method was adopted.The determination was performed on YMC ODS（250 mm×4.6 mm，5μm）column with mobile phase consisted of 0.04 mol·L－1citric acid solution-N，N-dimethylformamide-tetrahydrofuran（45∶8∶2，V/V/V）at the flow rate of 1.0 mL·min－1.The detection wavelength was 280 nm and column temperature was 35℃.RESULTS：The linear range of catechin and epicatechin were 0.051 8～0.259 0 mg·mL－1（r＝0.999 9）and 0.010 1～0.203 0 mg·mL－1（r＝0.999 9）.The average recoveries were 101.63%（RSD＝1.27%，n＝9）and 100.49%（RSD＝1.12%，n＝9）.CONCLUSION：The method is simple，accurate and stable for quality control of Compound catechu tincture.

HPLC；Compound catechu tincture；Catechin；Epicatechin；Content determination

R283.662；R927.2

A

1001-0408（2012）43-4093-03

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2012.43.24

2012-01-30

2012-09-14）