远志与厚朴不同配比水煎液的HPLC指纹图谱比较研究Δ

傅 勇，肖 武，李 达，王 建，夏厚林，刘莉娜

（成都中医药大学药学院中药教研室，成都 610075）

远志与厚朴不同配比水煎液的HPLC指纹图谱比较研究Δ

傅 勇＊，肖 武，李 达，王 建#，夏厚林，刘莉娜

（成都中医药大学药学院中药教研室，成都 610075）

目的：比较远志与厚朴不同配比水煎液的指纹图谱，从化学角度探讨二者配伍后对物质基础的影响。方法：采用高效液相色谱法，比较远志与厚朴1∶1、1∶2、1∶3配比水煎液的指纹图谱。色谱柱为Phenomenex C18（250 mm×4.6 mm，4μm），流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液（梯度洗脱），检测波长为315 nm，柱温为25℃，流速为1 mL·min－1。结果：随着水煎液中厚朴比例的增大，色谱图中保留时间在2～43 min之间的峰群变化明显。其中保留时间在17、21、24、35、41 min左右的5个峰的峰面积随厚朴比例增加而明显增大，主要为厚朴中的成分。结论：远志与厚朴配伍，随厚朴比例增大而溶出增加的成分群可能是发挥远志缓解胃肠动力障碍的主要物质基础。

远志；厚朴；配伍；物质基础；高效液相色谱法；指纹图谱

远志具有良好的安神益智、祛痰开窍、消散痈肿等功效，是临床常用药。但生远志使用过量或长期应用会呈现较严重的胃肠动力障碍、黏膜损伤等不良反应[1]。厚朴具有行气消积的功效，常用于治疗胃肠积滞、脘腹胀满之证[2]。药理研究表明，厚朴有较明显的胃肠动力促进作用[3，4]。本课题组前期研究显示，厚朴能有效缓解远志所致胃肠动力抑制，并随厚朴配伍比例的增大，该作用更为明显[5]。基于此，本研究从化学角度比较分析了远志与厚朴不同配比水煎液的高效液相色谱（HPLC）指纹图谱，为进一步阐释中药配伍关系提供科学数据和参考。

1 仪器与试药

2695 HPLC仪、Empower化学工作站（美国Waters公司）；BP211D电子分析天平（德国Sartorius公司）；KQ-250D台式数控超声波清洗器（北京奥赛利特科技发展有限公司）。

甲醇、乙腈为色谱纯，水为双蒸水，其他试剂均为分析纯。远志、厚朴均购于西南药都中药材市场，经成都中医药大学卢先明教授鉴定分别为远志科植物远志Polygala tenuifolia Willd.的根和木兰科植物厚朴Magnolia officinalis Rehd.et Wils.的干皮、根皮及枝皮，均属2010年版《中国药典》收载品种，并测得远志中远志酸含量为0.77%、厚朴中厚朴酚与和厚朴酚总量为2.63%，均符合《中国药典》质量标准要求。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Phenomenex C18（250 mm×4.6 mm，4μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸水溶液，梯度洗脱（洗脱条件见表1）；检测波长：315 nm；柱温：25℃；流速：1 mL·min－1；进样量：10μL。

表1 梯度洗脱条件Tab 1 Gradient elution

2.2 样品的制备

2.2.1 水煎液的制备 （1）远志水煎液：取远志（药材粗粉，下同）20 g，置于圆底烧瓶中，200 mL水浸泡30 min后冷凝回流煎煮。先武火至煮沸，沸后文火续煎1 h，滤过，60℃减压浓缩至100 mL，相当于远志原生药量为0.2 g·mL－1。（2）厚朴水煎液：取厚朴20 g，置于圆底烧瓶中，200 mL水浸泡30 min后冷凝回流煎煮。先武火至煮沸，沸后文火续煎15 min，滤过，60℃减压浓缩至100 mL，相当于厚朴原生药量为0.2 g·mL－1。（3）远志厚朴1∶1配伍水煎液：取远志20 g，置于圆底烧瓶中，200 mL水浸泡30 min后冷凝回流煎煮。先武火至煮沸，沸后文火续煎45 min，再加入已浸泡30 min的20 g厚朴（远志沸腾15 min后，以200 mL水开始浸泡厚朴），共煎15 min即可，滤过，60℃减压浓缩至100 mL，相当于含原生药量0.4 g·mL－1。（4）远志厚朴1∶2配伍水煎液：取远志20 g、厚朴40 g，按“2.2.1（3）”项下方法煎煮，滤过，60℃减压浓缩至100 mL，相当于含原生药量0.6 g·mL－1。（5）远志厚朴1∶3配伍水煎液：取远志20 g、厚朴60 g，按“2.2.1（3）”项下方法煎煮，滤过，60℃减压浓缩至100 mL，相当于含原生药量0.8 g·mL－1。

2.2.2 供试品溶液的制备 分别取“2.2.1”项下5种水煎液各10 mL，60℃减压蒸干，甲醇超声（频率：40 kHz，功率：250 W）溶解并定容至10 mL。摇匀后取2 mL，10 000 r·min－1离心5 min后取上清液，过0.45µm微孔滤膜，取续滤液，即得相应供试品溶液。

2.3 内参比峰的选择

由于缺乏对照品，且本方法得到的色谱峰较多，难以插入内标物，因而根据色谱图的结果，选择保留时间在43 min左右、对称较好的色谱峰作为内参比峰（S）。

2.4 方法学考察

2.4.1 精密度试验 按“2.2.1（3）”项下方法制备一份远志厚朴1∶1配伍水煎液，再按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按拟定方法连续进样5次，计算37个主要共有峰相对保留时间和相对峰面积（面积归一化法，单峰面积＞5%，下同）的RSD，结果均＜3%，表明本方法精密度良好，能满足指纹图谱技术要求[6]。

2.4.2 稳定性试验 按“2.2.1（3）”项下方法制备一份远志厚朴1∶1配伍水煎液，再按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，分别于0、4、8、12、24 h进样，计算各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD，结果均＜3%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.4.3 重复性试验 按“2.2.1（3）”项下方法制备6份远志厚朴1∶1配伍水煎液，再分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按拟定方法进样，计算共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD，结果均＜3%，表明本方法重复性良好。

2.5 远志厚朴1∶1配伍水煎液HPLC指纹图谱的建立

按“2.2.1（3）”项下方法制备10份远志厚朴1∶1配伍水煎液，再分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按拟定方法进样，获得色谱图。利用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A版）》进行相似度评价。与系统生成的对照指纹图谱相比，10批供试品溶液的相似度依次为0.998、0.995、0.998、0.996、0.997、0.997、0.998、0.993、0.999、0.997，RSD＝0.176%（n＝10）。10批远志厚朴1∶1配伍水煎液的共有模式见图1。

2.6 各供试品溶液的HPLC指纹图谱比较

按“2.2”项下方法分别制备远志、厚朴、远志厚朴1∶2配伍、远志厚朴1∶3配伍水煎液各一份，再分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按拟定方法进样，将所得图谱与远志厚朴1∶1配伍水煎液的共有模式进行比较，结果分别见图2～图4。

由上述各图可得，远志的指纹峰大多出现在2～83 min时段，主要在43～83 min之间；而厚朴在2～43 min之间有较多的指纹峰出现。各配伍组图谱中，随着厚朴配比的增大，保留时间在2～13 min之间的峰群，峰面积有一定的增加；而保留时间在17、21、24、36、41 min左右的5个峰，峰面积分别增加32%～189%不等，且峰面积增加百分比与厚朴药材增量间呈现良好的相关性（r＞0.82）。保留时间在43 min以后的峰，无论是峰形还是保留时间均无明显差异。

3 讨论

本课题组前期实验发现，厚朴能明显缓解远志所致的胃肠动力障碍。在此基础上，笔者对远志与厚朴配伍的提取工艺和配伍比例进行了筛选。在提取工艺试验中，利用挥发油提取器提取厚朴中挥发油，记为挥发性成分，剩余部分为非挥发性成分；比较考察了远志与厚朴同煎60 min、远志与厚朴挥发性成分混合、远志与厚朴挥发性及非挥发性成分混合对小鼠胃肠动力的影响，结果只有最后一组能明显缓解远志所致的胃肠动力抑制，其余各组无显著影响。提示厚朴中的挥发性及非挥发性成分可能同时参与了对远志所致胃肠动力抑制的调节。为了使厚朴的挥发性成分尽可能地保留在水煎液中，同时又更贴近临床用药，本课题组采用厚朴后下的煎煮方法，结果发现，厚朴后下与远志同煎15 min时，远志的胃肠动力抑制作用得到较明显缓解。基于该提取条件，考察了远志与厚朴不同配比水煎液对小鼠胃肠运动的影响，结果显示，厚朴能缓解远志的胃肠动力抑制，且随厚朴配比的增大，作用更明显[5]。

为了进一步证明提取工艺和配伍对物质基础的影响，本课题组采用薄层色谱法对比考察了厚朴后下与远志同煎15 min水煎液、厚朴与远志同煎60 min水煎液中远志酸、厚朴酚、和厚朴酚、挥发油等成分的变化。结果发现，前者能检测到挥发油及其他相关成分，而后者没有检测到挥发油。提示随着煎煮时间的延长，厚朴中的挥发性成分可能会丢失。HPLC法测定远志与厚朴配伍前后相关物质含量变化的结果显示，随着厚朴配比的增大，厚朴酚、和厚朴酚的含量依次递增[7]。

本试验采用二极管阵列检测器对检测波长在190～400 nm范围内的图谱进行了考察，分别记录远志厚朴1∶1配伍水煎液在210、254、300、315、350 nm波长处的色谱图，结果发现远志厚朴1∶1配伍水煎液在315 nm波长处有较好的紫外吸收。同时，对比考察了直接水煎液进样和其减压蒸干后再用不同比例甲醇溶解后进样的色谱图，结果显示，水煎液蒸干后再用甲醇溶解与水煎液直接进样，色谱峰保留时间和峰形基本类似。由于甲醇溶解后样品更加稳定，因而采取了文中的处理方法。

HPLC指纹图谱的考察结果显示，远志与厚朴配伍并未产生新的色谱峰。因远志用量在各配比组中保持一致，且远志对应的峰在各配比组中变化不明显，仅有保留时间为43 min左右的内参比峰略有增加趋势，提示与厚朴配伍，对远志中的主体成分影响较小，或仅影响其成分构成比；而远志与厚朴不同配比组则随厚朴配比的增加，有5个峰的峰面积明显增大，表明随厚朴配比增加而峰面积增大的成分群，应属于厚朴所含物质。

结合前期实验，笔者推测厚朴改善远志所致的小鼠胃肠动力抑制作用，可能主要与其所含的挥发油、厚朴酚、和厚朴酚以及部分未知的非挥发性成分的共同参与有关，且随厚朴配比的增加，这些物质在水煎液中的相对含量也增大，缓解作用更加明显。

综上表明，合理的中药配伍方式，的确能达到降低毒副效应的目的，也能体现中药“相畏相杀”的配伍理论；而药物所含的物质基础，是影响配伍变化的关键因素之一。

[1] 王 建，郭 娟，刘贤武，等.生远志及与甘草不同配伍比例对小鼠胃肠运动的影响[J].中药药理与临床，2002，18（5）：28.

[2] 高学敏.中药学[M].北京：中国中医药出版社，2002：238-239.

[3] 张永太，吴 皓.厚朴药理学研究进展[J].中国中医药信息杂志，2005，12（5）：96.

[4] 张永太，吴 皓.厚朴姜炙前后对胃肠运动功能影响的实验研究[J].时珍国医国药，2007，18（11）：2 617.

[5] 江 娟，王 建，李 达，等.远志与厚朴不同煎煮时间及不同配比对小鼠胃肠运动的影响[J].西安交通大学学报（医学版），2009，30（3）：380.

[6] 国家药品监督管理局.中药注射剂指纹图谱研究的技术要求（暂行）[S].2001.

[7] 李 达.远志与厚朴配伍前后化学成分对比及解毒机理初步研究[D].成都：成都中医药大学，2009.

Comparison of HPLC Fingerprints of the Decoctions of Polygala tenuifolia and Magnolia officinalis at Different Ratio

FU Yong，XIAO Wu，LI Da，WANG Jian，XIA Hou-lin，LIU Li-na
（Dept.of Chinese Materia Medica，College of Pharmacy，Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，Chengdu 610075，China）

OBJECTIVE：To explore the changes of material basis by comparing the fingerprints of the decoctions of Polygala tenuifolia and Magnolia officinalis at different ratio.METHODS：HPLC method was adopted to compare the fingerprints of the decoctions of P.tenuifolia and M.officinalis at the ratio of 1∶1，1∶2 and 1∶3.The determination was performed on Phenomenex C18（250 mm×4.6 mm，4μm）column with mobile phase consisted of acetonitrile-0.1%phosphoric acid solution（gradient elution）at the flow rate of 1 mL·min－1.The detection wavelength was set at 315 nm and the column temperature was 25℃.RESULTS：With the increase of the ratio of M.officinalis in the decoction，those peaks the retention time of which rank from 2 min to 43 min had a obvious change，particularly，Those 5 peaks the retention time of which time were about 17 min，21 min，24 min，35 min and 41 min all had a significant increase in its peak area，which mainly came from M.officinalis.CONCLUSION：Those components，which have increased with M.officinalis in the decoctions，probably are the main material basis which lead to the alleviation of the inhibition of gastrointestinal motility caused by the use of P.tenuifolia.

Polygala tenuifolia；Magnolia officinalis；Compatibility；Material basis；HPLC；Fingerprint

R283.661；R927

A

1001-0408（2012）43-4072-03

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2012.43.16

2011-11-13

2012-01-30）