紫外分光光度法测定金不换不同部位总黄酮含量

刘广河，丁艳霞，李亚真

（河南大学药学院 中药教研室，河南 开封475004）

金不换别名土大黄（浙江）、绿当归（江西）、大晕药（四川）、血三七、化血莲（江苏）［1］，为蓼科（Polygonaceae）植物钝叶酸模（Rumex obtusifolius L.）的干燥根及根茎。金不换生于山脚或山坡的近水旁，分布于河南、江苏、浙江、江西、湖南、广东、四川［2］，有清热解毒、凉血止血、消瘀止痛的功效。治疗热毒疮疡、无名肿毒、虫蛇咬伤、疥癣，血热妄行之咯血、吐血、衄血等［3］。化学成分研究表明该属植物主含蒽醌和黄酮类化合物［4］，对金不换中总黄酮的含量测定未见报道。本文采用紫外分光光度法对其有效成分黄酮的含量进行了测定，为准确阐明金不换的药用部位提供参考依据，为临床应用提供科学的实验依据。

1 材料与仪器

黄酮标准品芦丁（中国药品生物制品检定所）；所用试剂亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠和乙醇皆为分析纯；所用水为蒸馏水。

FA1004N电子天平（上海精密科学仪器有限责任公司）；循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限责任公司）；UV-1600型紫外可见分光光度仪（北京瑞利分析仪器公司）。

2 方法与结果

2.1 供试品溶液的制备［5］

精密称取药材的根、茎、叶粉末各3.0g，分别置圆底烧瓶中，加体积分数为50%甲醇50mL，水浴加热回流提取2h，抽滤，滤液不澄清，用0.45μm一次性滤膜过滤，置50mL容量瓶中，加体积分数为50%甲醇定容至刻度。振荡摇匀，即得根、茎、叶3种供试品溶液。

2.2 标准溶液制备［6］

精密称取芦丁对照品0.020 9g，置100mL容量瓶中，缓慢加入体积分数为70%乙醇并使其溶解，定容至刻度，振荡摇匀，配制成0.209g／L的标准溶液，备用。

2.3 测定波长选择

精密量取芦丁对照液2mL，置10mL量瓶中，加50g／L NaNO2溶液0.3mL，摇匀，放置6min，加100g／L Al（NO3）3溶液0.3mL，摇匀，放置6min，加40g／L NaOH溶液4mL，再用体积分数为30%乙醇液稀释至刻度，摇匀，放置15min后置比色皿中，在波长400～600nm之间测定吸收谱，确定最大吸收波长为510nm。

2.4 稳定性考察

按测定波长选择项方法于510nm处测定吸光度，然后每隔30min测定吸光度，观察根部供试品溶液吸光度变化情况并记录，计算其RSD值。得RSD为2.35%。

2.5 标准曲线制备

精密吸取芦丁对照液0.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5mL，分别置10mL容量瓶中，加50g／L NaNO2溶液0.3mL，振荡摇匀，放置6min，加100g／L Al（NO3）3溶液0.3mL，振荡摇匀，放置6min，再加40g／L NaOH溶液4mL，振荡摇匀，用体积分数为30%乙醇定容至刻度，振荡摇匀，放置15min后采用紫外分光光度法，置比色皿中在510nm处测定吸光度，以对照品浓度（g／L）为横坐标，吸光度A为纵坐标，回归方程Y＝11.464 X＋0.000 4，r＝0.999 7，芦丁的线性范围为0.031 35～0.073 15g／L（图1）。

图1 芦丁标准曲线

2.6 精密度实验

精密吸取芦丁标准品溶液2.5mL置10mL容量瓶中，加50g／L NaNO2溶液0.3mL，摇匀，放置6min，加100g／L Al（NO3）3溶液0.3mL，摇匀，放置6min，加40g／L NaOH 溶液4mL，再用体积分数为30%乙醇稀释至刻度，摇匀，放置15min后测其吸光度，重复测定5次，得吸光度的平均值为0.599，RSD 为0.16%。

2.7 加样回收率实验

精密量取已知含量的根部样品3g，5份，按照“2.1”项处理样品，得到根部供试品溶液，然后精密加入芦丁对照品0.20mg。加50g／L NaNO2溶液0.3mL，振 荡 摇 匀，放 置 6min，加 100g／L Al（NO3）3溶液0.3mL，振荡摇匀，放置6min，再加40g／L NaOH溶液4mL，振荡摇匀，用体积分数为30%乙醇定容至刻度（10mL），振荡摇匀，放置15min后采用紫外分光光度法，置比色皿中在510nm处测定吸光度，得加样回收率为100.5%，RSD值2.28%。结果见表1。

2.8 样品测定

精密量取金不换根、茎、叶供试品溶液各2mL，分别置10mL容量瓶中，用体积分数为50%甲醇定容至刻度；再分别精密量取2mL置10mL容量瓶中，加50g／L NaNO2溶液0.3mL，振荡摇匀，放置6min，加100g／L Al（NO3）3溶液0.3mL，振荡摇匀，放置6min，再加40g／L NaOH溶液4mL，振荡摇匀，用体积分数为30%乙醇定容至刻度，振荡摇匀。因得到的试液有沉淀，故需过滤后放置15min，在510nm处测其吸光度，每个样品平均测定2次，取平均值，并在标准曲线中计算其总黄酮含量。结果见表2。

表1 金不换加样回收率实验结果

表2 金不换不同部位总黄酮含量

3 讨论

本实验采用紫外分光光度法对地方性药用植物金不换进行总黄酮含量测定。结果表明，地方性药用植物金不换含有较高的黄酮，平均总黄酮含量在2.409 5%～1.489 7% ，其中根的黄酮含量明显高于叶和茎。我们全面系统考查了地方性药用植物金不换各部位总黄酮含量，对其进行了质量评价，从而为地方性药用植物金不换的质量评价及其药用开发提供更可靠的理论依据。

本实验结果表明，该方法的稳定性与精密度均较好，加样回收率在100.5%，RSD为2.28%，说明方法准确、可靠，可用于地方性药用植物金不换中总黄酮的测定。

［1］田代华，谢宗万.实用中药辞典［M］.北京：人民卫生出版社，2002：783－785.

［2］丁宝章，王遂义，高增义.河南植物志：第1册［M］.郑州：河南科学技术出版社，1988：323－324.

［3］何丽一，陈碧珠，肖培根.酸模属中草药的调查鉴定与成分分析［J］.药学学报，1981，16（4）：289－293.

［4］张广庆，赵海鹏，王振月，等.酸模属植物的化学成分与药理活性研究进展［J］.世界科学技术——中医药现代化，2008，10（5）：89－91.

［5］赫锦锦，张木升，李钦，等.分光光度法测定杜仲雄花茶中总黄酮的含量［J］.河南大学学报：医学版，2011，30（1）：11－13.

［6］孙佩霞，叶丽卡，张晓丽.比色法测定淫羊藿胶囊中总黄酮的含量［J］.辽宁药物与临床，1998，1（2）：59－60.