野葛、粉葛与云南葛中葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素的含量比较Δ

裴香萍，刘亚明，刘计权，李慧峰，李 晶（山西中医学院，太原 030024）

野葛、粉葛与云南葛中葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素的含量比较Δ

裴香萍＊，刘亚明#，刘计权，李慧峰，李 晶（山西中医学院，太原 030024）

目的：比较野葛、粉葛与云南葛中葛根素、大豆苷、大豆苷元和染料木素的含量。方法：样品以30%乙醇回流提取后采用高效液相色谱法测定含量。 色谱柱为Uvis-201（250mm×4.6mm，5μm），流动相为甲醇-水（梯度洗脱），流速为1.0mL·min－1，检测波长为250nm，柱温为室温。结果：葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素的进样量分别在0.68～5.44μg（r＝0.9992）、0.143～1.144μg（r＝0.9993）、0.0245～0.1960μg（r＝0.9992）、0.088～0.704μg（r＝0.9994）范围内与各自峰面积积分值呈良好线性关系；平均加样回收率分别为98.1%、99.5%、101.1%、99.2%，RSD分别为2.17%、2.42%、2.53%、2.65%（n均为6）。葛根素含量高低排序为河南野葛＞云南葛＞山西野葛＞大别山野葛＞广西粉葛；大豆苷含量为云南葛＞河南野葛＞大别山野葛＞山西野葛＞广西粉葛；大豆苷元含量为河南野葛＞云南葛＞山西野葛＞大别山野葛＞广西粉葛；染料木素含量为河南野葛＞云南葛＞山西野葛＞大别山野葛＞广西粉葛。结论：野葛、粉葛与云南葛中葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素含量差别较大，且云南葛为野葛的伪品之一，三者不能同等应用。

野葛；粉葛；云南葛；葛根素；大豆苷；大豆苷元；染料木素；高效液相色谱法；含量；比较

葛根为豆科植物野葛Pueraria lobata（Willd）.Ohwi的干燥根[1]，具有解肌退热、生津透疹、升阳止泻的功效[2]。葛根的主要有效成分为葛根素、大豆苷、大豆苷元等异黄酮类化合物[3]。大豆苷和大豆苷元具有治疗和预防心肌梗死及心律失常，改善脑循环、周围血管及微循环等心脑血管疾病，抗肿瘤及雌激素样作用等多种药理功效[4，5]。目前市场上除了野葛、粉葛（P.Thomsonii Benth.），还常见有云南葛（P.peduncularis Grah.）的根作为葛根在使用。云南葛[2]主要分布于云南、四川地区，又称苦葛。已有文献报道葛根的指纹图谱研究[6～9]、葛根中主要成分葛根素的含量测定、野葛与粉葛的对比研究[10]。为了进一步比较不同品种之间物质基础的区别，进而为临床应用提供参考，本试验采用高效液相色谱（HLPC）法测定并比较了野葛、粉葛、云南葛3个品种中葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素的含量，为不同品种葛根的开发、临床应用与质量控制提供依据。

1 仪器与试药

426系列HPLC仪，含Allchromplus软件（德国Alltech公司）；FA2014型电子分析天平（上海雷韵试验仪器制造有限公司）；KQ3200E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，功率：150W，频率：40kHz）；数显恒温水浴锅（上海申胜生物技术有限公司）。

葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素对照品（成都思华生物技术公司，纯度均＞98.0%）；甲醇为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，其他试剂均为分析纯。试验样品均由同仁堂供货商从不同产地供应并由山西中医学院中药鉴定教研室牛燕珍实验师鉴定分别为野葛（来源分别为河南、山西、大别山）、粉葛（来源为广西）、云南葛（来源为云南）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Uvis-201（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇（A）-水（B），梯度洗脱（洗脱程序见表1）；流速：1.0mL·min－1；柱温：室温；检测波长：250nm。色谱见图1。

表1 梯度洗脱条件Tab 1 Gradient elution conditions

图1 高效液相色谱图A.混合对照品；B.野葛；C.云南葛；D.粉葛；1.葛根素；2.大豆苷；3.大豆苷元；4.染料木素Fig 1 HPLC chromatograms A.mixed control；B.P.lobata；C.P.peduncularis；D.P.thomsonii；1.puerarin；2.daidzin；3.daidzein；4.genistein

2.2 对照品溶液的制备

精密称取大豆苷、大豆苷元、染料木素对照品分别为5.72、0.98、3.52mg，分别加甲醇溶解并定容至10mL量瓶中，即得大豆苷、大豆苷元、染料木素的对照品溶液。精密称取葛根素对照品2.72mg，置5mL量瓶中，精密加入大豆苷、大豆苷元、染料木素的对照品溶液各1mL，加甲醇溶解并定容，即得葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素的混合对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

精密称取野葛、云南葛各0.2g，粉葛1.8g，精密加入30%乙醇50mL，称重，加热回流提取30min，放冷，再称重，用30%乙醇补足失重，取续滤液作为供试品溶液。经0.45μm微孔滤膜滤过，备用。

2.4 线性关系考察

分别精密吸取混合对照品溶液0.25、0.50、0.75、1.00、1.50、2.00mL，置2mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，得到葛根素浓度为0.068、0.136、0.204、0.272、0.408、0.544mg·mL－1，大豆苷浓度为 0.0143、0.0286、0.0429、0.0572、0.0858、0.1144mg·mL－1，大豆苷元浓度为0.00245、0.00490、0.00735、0.00980、0.01470、0.01960mg·mL－1，染料木素浓度为0.0088、0.0176、0.0264、0.0352、0.0528、0.0704mg·mL－1的系列混合对照品溶液，经0.45μm微孔滤膜滤过，进样10μL，按“2.1”项下色谱条件进行测定，记录葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素的峰面积积分值。以进样量（X）为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，得各成分的回归方程和相关系数（r），详见表2。结果表明，葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素的进样 量 分 别 在 0.68～5.44、0.143～1.144、0.0245～0.1960、0.088～0.704μg范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系。

表2 线性关系考察结果（n＝6）Tab 2Result of linear relationship（n＝6）

2.5 精密度试验

取同一混合对照品溶液（葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素的浓度分别为0.204、0.0429、0.00735、0.0264mg·mL－1）10μL，连续进样6次，按“2.1”项下色谱条件测定，记录峰面积。结果，葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素峰面积的RSD分别为1.85%、2.33%、2.12%、1.67%（n均为6），表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

取同一供试品溶液（河南产野葛）适量，分别于0、2、4、8、12h测定峰面积。结果，RSD＝0.936%（n＝5），表明供试品溶液在12h内稳定性良好。

2.7 重复性试验

取同一样品（河南产野葛）适量，按“2.3”项下方法平行制备6份供试品溶液，分别进样10μL，按“2.1”项下色谱条件测定，记录各成分峰面积，以外标法计算样品中各成分的含量。结果，样品中葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素的平均含量分别为 42.41、6.63、1.32、1.13mg·g－1，RSD 分别为 2.33%、2.41%、2.22%、2.36%（n均为6），表明本方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验

精密称取已知葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素含量的样品（河南产野葛）粉末0.1g，共6份，分别精密加入葛根素（0.46mg·mL－1）、大豆苷（0.72mg·mL－1）、大豆苷元（0.14mg·mL－1）对照品溶液10mL，染料木素（0.12mg·mL－1）对照品溶液1mL，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别进样10μL，按“2.1”项下色谱条件测定，记录各成分的峰面积，计算加样回收率，结果见表3。

表3 加样回收率试验结果（n＝6）Tab 3Result of recovery test（n＝6）

2.9 样品含量测定

取不同品种及不同产地的样品，分别按“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别进样10μL，按“2.1”项下色谱条件测定，记录各成分的峰面积，以外标法计算样品中各成分的含量，结果见表4。

表4 样品含量测定结果（mg·g－1）Tab 4Results of content determination of sample（mg·g－1）

3 讨论

从表4可知，广西产粉葛各成分含量均低于其他2个品种，但由于其栽培产量高、药材外形美观，在市场份额上占有较大的比例，用量较大，在临床应用时有时代替野葛使用。

试验结果表明，河南产野葛的葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素含量均比山西、大别山产野葛的含量更高，说明不同产地的环境、气候、土壤、降水等条件对药材有效成分的影响较大。故以后还将进一步对不同地区、不同气候条件的药材进行研究。

云南葛因其味苦，又称苦葛[2]，因其葛根素含量较高，在西南个别地区误作葛根使用，被列为葛根的伪品之一。本试验结果也表明，云南葛中各成分含量相对较高。但因其有毒，只能作为农药、杀虫剂使用，不可作葛根入药。

由于大豆苷元、大豆苷、葛根素、染料木素的极性不同，为保证各色谱峰具有良好的分离度，笔者试用甲醇-水（50∶50，V/V）等度洗脱，发现大豆苷、葛根素的出峰时间过早，保留时间分别为3、2min，分离度也较差；当使用甲醇-水（30∶70，V/V）等度洗脱时，大豆苷元的出峰时间过晚，保留时间达51min；后采用甲醇-水梯度洗脱，4种成分均可达到基线分离，基线漂移幅度较小，峰形良好[11]。

在制备供试品溶液时，笔者分别考察了不同提取时间（20、30、40min）的提取效果。结果表明，4种成分的含量高低依次为提取40min＞30min＞20min，但提取40min的含量与提取30min较接近，故选择30min为提取时间。

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Comparison of Puerarin，Daidzin，Daidzein，Genistein Content of Pueraria lobata，P.thomsonii and P.peduncularis

PEI Xiang-ping，LIU Ya-ming，LIU Ji-quan，LI Hui-feng，LI Jing（Shanxi University of Traditional Chinese Medicine，Taiyuan 030024，China）

OBJECTIVE：To compare the content of puerarin，daidzin，daidzein and genistein from Pueraria lobata，P.thomsonii and P.peduncularis.METHODS：After reflux extraction of 30%ethanol，the sample was determined by HPLC.The determination was performed on Uvis-201（250mm×4.6mm，5μm）column with mobile phase consisted of methanol-water（gradient elution）at the flow rate of 1.0mL·min－1.The detection wavelength was 250nm and column temperature was ambient temperature.RESULTS：The linear range was 0.68～5.44μg for puerarin（r＝0.9992），0.143～1.144μg for daidzin（r＝0.9993），0.0245～0.1960μg for daidzein（r＝0.9992）and 0.088～0.704μg（r＝0.9994）for genistein；average recovery rates were 98.1%，99.5%，101.1%and 99.2%，RSDs were 2.17%，2.42%，2.53%and 2.65%（n＝6）.The content of puerarin was in descending order：P.lobata in Henan＞P.peduncularis＞P.lobata in Shanxi＞P.lobata in Dabieshan＞P.thomsonii in Guangxi；the content of daidzin was in descending order：P.peduncularis＞P.lobata in Henan＞P.lobata in Dabieshan＞P.lobata in Shanxi＞P.thomsonii in Guangxi；the content of daidzein was in descending order：P.lobata in Henan＞P.peduncularis＞P.lobata in Shanxi＞P.lobata in Dabieshan＞P.thomsonii in Guangxi；the content of genistein was in descending order：P.lobata in Henan＞P.peduncularis＞P.lobata in Shanxi＞P.lobata in Dabieshan＞P.thomsonii in Guangxi.CONCLUSION：The contents of puerarin，daidzin，daidzein and genistein in P.lobata，P.thomsonii and P.peduncularis were different greatly，and P.peduncularis is a false one of P.lobata.The use of them should be different.

Pueraria lobata；Pueraria thomsonii；Pueraria peduncularis；Puerarin；Daidzin；Daidzein；Genistein；HPLC；Content；Comparison

R284.1；R927.2

A

1001-0408（2012）47-4462-03

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2012.47.18

Δ国家科技支撑计划项目资助课题（2011BA107B05）

＊副教授，硕士。研究方向：中药鉴定、中药质量标准。E-mail：peixp69@163.com

#通讯作者：教授，硕士。研究方向：中药资源、中药药效基础。电话：0351-2272164。E-mail：liuyaming66@yahoo.com

2012-01-17

2012-03-22）