骨髓增生异常综合征患者ABO血型鉴定

蒿广德，刘 敏，齐文玲，蒲丽蓉

（广元市第一人民医院 输血科，四川 广元628017）

骨髓增生异常综合征（MDS）是血液系统的恶性疾病，常常伴有血液系统细胞不同程度的贫血而需要输血。国内外均有报导骨髓增生异常综合征疾病在发生发展过程中，患者的血型抗原可能减弱或丢失或抗体效价降低的情况［1，2］，故血型的正确鉴定是确保患者安全输血的前提。

1 材料与方法

1.1 样本 收集2009年2月～2011年3月在本院住院诊断为骨髓增生异常综合征患者28例，其中男性17人，女性11人，年龄35～62岁。患者住院时收集第一次标本检测ABO血型（O型血检测H抗原），及血清中ABO抗体。经入院治疗病情好转后1个月后复查。

1.2 样本收集 收集患者住院首次采集EDTA抗凝全血1ml，采用正反定型检测ABO血型。检测ABO血型后提取DNA用50μl的ddH2O溶解，储存在﹣20℃待用基因分型方法检测。

1.3 血型血清学检测 抗－A，B（效价128）抗－A（效价256）、抗－B（效价128）是长春博德生物技术有限公司试剂。抗－H（效价32）检测红细胞上H抗原含量。吸收放散试剂和反定型试剂用上海血液生物医药有限责任公司生产A、B、O红细胞。ABO正反定型技术参照中国输血技术操作规程［3］。

1.4 ABO血型基因检测 使用G ＆ T公司ABO基因检测试剂对28例标本对其ABO血型进行定型，入院和经一月治疗后同血清学检测同步进行，共作2次基因检测。根据说明书操作，每份DNA标本检测A101、A201、B和O共4个基因，PCR反应体积10μl。按94℃，3min；94℃，30s、60℃，30s、72℃，90s；30个循环后72℃，5min；4℃循环参数扩增。扩增结束PCR产物在2%的琼脂糖内电泳30min，结束电泳，凝胶成像记录结果。内对照产物长度207bp。A101血型基因定型产物长75bp，A201血型基因定型产物长117bp，B血型基因定型产物长90bp，O血型基因定型产物长129bp。

1.5 正常对照 采用效价为8和256的抗A、抗B与效价为32的抗H检查10名健康供血者ABO血型。

2 结果

2.1 正常对照组ABO血型检测 10例献血者标本分别用效价为4的抗A、抗B、抗H的血清检测其血型，结果同用效价为256的抗A、抗B和效价为32的抗H血清检测ABO血型结果一致。A型血5例，B型血3例，AB型血1例，O型血1例。

2.2 患者组ABO血型检测 患者28例标本入院及住院治疗后经正反定型检测和吸收放散试验检测，血型最后检测结果A型血13例，B型血10例，O型血4例，AB型血2例。其中11例患者存在抗原减弱或丢失，入院时检测血型结果，1例正反定型不符（正定型为A，反定型为AB），吸收放散试验检测为AB。另1例正反定型为O型，一月后检测为A型血。11例抗原减弱或消失患者在入院时抗原效价和一月后经治疗病情好转后的效价见表1。

表1 11例MSO患者ABO抗原减弱情况

2.3 分子生物学检测结果 28例骨髓增生异常综合征患者入院时的基因检测结果A型血13例，B型血10例，O型血4例，AB型血2例。其中正反定型不符的1例血清学检测，（正定型为A型，反定型为AB型，表1中11号标本），基因检测为AB血型（图1基因检测结果），吸收放散试验检测证实存在B抗原。患者经治疗1月后再经基因检测，结果仍为AB血型，血清学检测正反定型一致为AB型。另1例患者入院时正反定型为O型，吸收放散试验未证明存在A、B抗原（表1中6号标本），基因检测为A型（图2基因检测结果），一月后血清学检测为A型。血型基因检测结果见电泳图1和图2。

图1 基因检测结果为AB血型

图2 基因检测结果为A血型

3 讨论

MDS是一种常见的造血系统恶性疾病，放射线、化学药物、病毒等均可引起。贫血是明显的临床表现，是老年人MDS就诊的主要原因，而临床输血也是这个疾病的一个重要治疗手段［3］。本实验中28例骨髓异常增生患者中有11例患者存在抗原减弱或消失，经1月治疗后效价均较入院时提高。正反定型不符患者在入院时血型正定型方法检测漏检B抗原，经治疗B抗原恢复。11例患者血型抗原在疾病发展时存在变化，其中9例血型抗原出现减弱，2例患者抗原出现丢失。除2例抗原丢失患者，其余患者正反定型结果一致，本实验中经一月治疗患者血型抗原效价增高，证明此疾病可以导致血型抗原的减弱。2例抗原出现丢失的患者，1例正反定型不符，经吸收放散检测和基因检测均证实了B抗原的存在。1例由于患者真正血型为A型，由于A抗原的丢失没有在检测中表现出正反定型的不符，而吸收放散检测在入院时也出现了漏检，基因检测准确对其定型。一月后患者病情好转血型恢复也证实了基因检测的准确性。正是由于基因由遗传决定［4］，不受疾病发生发展等影响，为临床疑难血型定型及配血提供了技术保证和输血安全保障。

由于骨髓异常增生综合征患者存在血型抗原减弱或消失的可能，所以对患者血型的正确定型非常重要。常规的血型正反定型不能够类似骨髓异常增生患者检测血型时正确的定型，所以对这样的患者应该辅以吸收放散检测和分子生物学的方法。吸收放散检测可以在一定程度上证实弱抗原的存在。但吸收放散试验对丢失的抗原也不一定全部都能防止抗原的漏检，所以本实验采用分子生物学的方法对标本进行血型基因的检测。实验结果表明，血型基因检测不受疾病发生发展或经治疗好转的影响，结果可靠。骨髓异常增生患者疾病初期血型抗原可能存在变化，血清学检测不能百分之百对其准确定型，所以临床医生应注意辅以吸收放散试验和分子生物学方法正确定型后在进行输血治疗［5］。

［1］兰炯采，胡利亚.骨髓增生异常综合征血型变异及其临床意义［J］.中华血液学杂志，1988，9：709.

［2］Chester M A，Olsson M L.The ABO blood group gene.A locus of considerable qenetic diversiey［J］.Transfusion Medicine Reviews，2001，15：177.

［3］Tricot G.The role of aggressive chemotherapy in the treatment of the myelodysplastic syndromes［J］.Br Hematol，1986，63：477.

［4］Yamamoto F.Molecular genetics of ABO［J］.Vox Sang，2000，78：91.

［5］Hosoi E.Genetis analyses of the ABO blood groups and application of the clinical laboratories［J］.Rinsho Byori，1997，45（2）：148.