注射用头孢硫脒细菌内毒素检查方法探讨

陈小珍 谢冬梅 王群

注射用头孢硫脒细菌内毒素检查方法探讨

陈小珍 谢冬梅 王群

目的 对注射用头孢硫脒进行鲎试剂检查法实验，以替代热原检查，建立注射用头孢硫脒细菌内毒素检查。方法 参照《中国药典》2010版(二)部附录细菌内毒素检查法及其指导原则进行试验。结果 注射用头孢硫脒稀释至2.5 g/L及以下时可消除对鲎试剂与内毒素凝集反应的干扰。结论

注射用头孢硫脒可以通过细菌内毒素检查法来控制细菌内毒素的含量。

注射用头孢硫脒;细菌内毒素检查法;鲎试剂;干扰试验

注射用头孢硫脒(cefathiamidine for injection)是第一代头孢菌素类药物，本品作用机制为抑制敏感菌的细胞壁合成而产生杀菌作用，对革兰氏阳性菌及部分阴性菌有抗菌活性，对革兰氏阳性菌的作用较强，一般应用于敏感菌所引起呼吸系统、肝胆系统、五官、尿路感染及心内膜炎、败血症。

笔者通过计算机检索系统发现目前尚无有注射用头孢硫脒细菌内毒素检查法的报道，参照《中国药典》2010版(二)部附录XIE细菌内毒素检查法［1］应用鲎试剂方法对该制剂进行了研究，为该品种细菌内毒素检测方法的建立提供依据，现报告如下。

1 仪器与试药

1.1 试药

注射用头孢硫脒，广州白云山天心制药股份有限责任公司，批号：110923，111029，120118 规格2.0 g/支。

1.2 试剂

鲎试剂：批号 110330，规格：0.1 ml，λ=0.25 EU/ml，湛江安度斯生物有限公司;批号：101217，规格：0.1 ml，λ=0.125 EU/ml湛江博康海洋生物有限公司。细菌内毒素工作标准品：批号：2010-3，效价120EU，规格：1 ml/支，中国药品生物制品检定所;细菌内毒素检查用水，以下简称(BET)，批号：1107150，规格：5 ml/支，湛江安度斯生物有限公司，其余实验材料均经250℃烘烤30 min。

1.3 仪器

XW_80A旋涡混旋器，上海医科大学仪器厂;HH.214电热恒温水浴锅，江苏医疗器械厂。

2 方法与结果

2.1 鲎试剂灵敏度复核

按2010版《中国药典》(二部)细菌内毒素检查法进行鲎试剂灵敏度复核试验，结果所用鲎试剂灵敏度均符合规定，结果见表1。

表1 鲎试剂灵敏度复核试验结果

2.2 供试品细菌内毒素限制L确定

根据公式L=K/M计算L值，其中K为按规定的给药途径，人用每公斤体重每小时可接受的内毒素最大剂量，注射液的K为5 EU/(kg·h)。M为人每公斤体重每小时给药的最大剂量，临床注射用头孢硫脒使用的最大剂量是2000 mg所以M为2000 mg·60 kg/h。通过计算得到L为0.15 EU/mg。综合考虑本品临床用药特点，为了达到临床用药的安全性，将细菌内毒素限值确定为0.1 EU/mg。

2.3 供试品最小有效稀释浓度C的确定

选用灵敏度是0.25 EU/ml和0.125 EU/ml鲎试剂，最小有效稀释浓度依照C=λ/L计算，鲎试剂灵敏度是0.125 EU/ml的最小有效稀释浓度时1.25 g/L，鲎试剂灵敏度是0.25 EU/ml的最小有效稀释浓度时2.5 g/L。

2.4 供试品的干扰预试验

将供试品用细菌内毒素检查用水稀释成浓度是0.625，1.25，2.5，5.00 g/L的系列溶液，记此系列溶液为NPC系列;同时另做加含2λ的内毒素工作标准品平行系列溶液，记此系列溶液为PPC系列，采用相应灵敏度的鲎试剂分别和NPC，PPC两个系列的供试品反应，按照检查法项下试验。结果表明，注射用头孢硫脒的稀释浓度为1.25 g/L时，采用灵敏度是0.125EU/ml的鲎试剂，对试验无干扰作用。结果见表2。

2.5 供试品干扰试验

用细菌内毒素检查用水和注射用头孢硫脒分别将细菌内毒素工作标准品制成含细菌内毒素工作标准品2.0λ，1.0λ，0.5λ，0.25λ 四种浓度的细菌内毒素溶液。用细菌内毒素检查用水和样品制成每一浓度平行做4支，另取细菌内毒素检查用水和注射用头孢硫脒溶液各做2支阴性对照管。灵敏度为0.125 Eu/ml的鲎试剂与上述两个系列的内毒素溶液反应。结果见表3，Es在0.5λ～2.0λ之间，Et在0.5Es～2.0Es之间，说明供试品在0.125 g/L时，对细菌内毒素检查无干扰作用。因此对本品可以用细菌内毒素法代替家兔法。

表3 供试品干扰实验结果

2.5 供试品细菌内毒素检查实验

取3批热原检查合格的注射用头孢硫脒按2010版《中国药典》(二部)要求，考察其细菌内毒素限值，拟定注射用头孢硫脒的内毒素限值为0.1Eu/ml。结果见表4，阴性对照管(NC)均为阴性，供试品阳性管(PPC)和阳性对照管(PC)均为阳性，试验有效;供试品管(NPC)均为阴性，表明供试品中未检出细菌内毒素，3批注射用头孢硫脒的细菌内毒素检出均符合规定。

表4 供试品细菌内毒素检查实验结果

3 讨论

按照2010年版《中国药典》(二部)附录细菌内毒素检查法进行细菌内毒素检查法研究，结果表明注射用头孢硫脒在稀释浓度是0.125 g/L时，采用凝集法，用灵敏度是0.125 Eu/ml鲎试剂可以进行细菌内毒素检查。由于细菌内毒素法具有操作简单，检测周期短，灵敏度高，结果准确等优点，因此可替代家兔法对注射用头孢硫脒进行安全质量检查［2，3］以达到安全用药的目的。本文先通过干扰预试验确定供试品的有效稀释浓度，再由干扰试验进一步验证，从而减少干扰试验的盲目性。

［1］国家药典委员会.中国药典(二部).北京：化学工业出版社，2010：附录 XIE99-102.

［2］谢冬梅.甲钴胺注射液细菌内毒素检查法的研究.中国实用医药，2010，5(2)：69-71.

［3］李薇，刘肃，何华红，等.三磷酸腺苷原料药的细菌内毒素检查法可行性的研究.中国药房，2010，21(17)：1592-4.

On bacterial endotoxin inspection for cefathiamidine injection

CHEN Xiao-zhen，XIE Dong-mei，WANG

Qun.Department of Pharmary，The First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College，Bengbu 233004，China

Objective To establish bacterial endotoxin test method of the extraction of cefathiamidine injection.Methods According to the Chp 2010 Edt，inhibition or enhancement test for bacterial endotoxin test was carried out of oxiractam injection.Results The interference could be eliminated when cefathiamidine injection was diluted by 2.5 g/L.Conclusion Bacterial endotoxin test can be used for the extraction of bonemelon injection.

cefathiamidine injection;Bacterial endotoxin test(BET);Tachypleus amebocyte lysate(TAL);interference test

233004 蚌埠医学院第一附属医院药剂科

表2 供试品的干扰预实验结果

灵敏度EU/ml 系列 稀释浓度g/L 5.0 2.5 1.25 0.625NC PC 0.25 NPC -- -- -- -- --PPC -- -- ++ ++ ++0.125 NPC -- -- -- -- --PPC -- ++ ++ ++ ++