老年前列腺癌患者超声检测血流分级与术后组织中基质金属蛋白酶-2、-9表达的关系

袁 泉 詹正民 (武汉市第一医院超声科，湖北 武汉 430022)

前列腺癌发生发展过程中受多种蛋白的调节，其表达不仅与预后相关，而且对其生物学行为有重要调节作用。基质金属蛋白酶(MMP)-2和-9是其家族的重要成员，对肿瘤的进展有重要作用，研究显示MMP-2和-9的表达可能与血管生成密切相关〔1，2〕。超声检测血流分级的基础依赖于肿瘤中的新生血管，同时超声检测作为术前诊断的重要技术，具有无创，操作简单的特点，而且超声在检测中，可以有效地判断血流〔3〕。本文通过超声检测前列腺癌老年患者血流分级，观察其与术后癌组织中MMP-2和-9的表达关系，探讨术前超声检测的价值，以期为临床早期诊断及指导治疗提供帮助。

1 材料与方法

1.1 一般资料 2010年1月至2010年12月在南宁市第一人民医院确诊为前列腺癌并需要进行手术治疗的老年患者共99例，年龄60～87岁，平均70.3岁。纳入均符合WHO的诊断标准，并经病理学主治医师再次确诊。

1.2 超声检测方法 使用ALOKA Prosound F75型超声仪，腔内探头频率6～10 MHz，分析血流分级。具体标准：0级：肿瘤内无血流显示;Ⅰ级：肿瘤内1～2处点状或条状血流显示;Ⅱ级：3～4条彩色血流显示;Ⅲ级：5条以上彩色血流显示〔4〕。

1.3 前列腺癌中MMP-2和-9的检测方法 MMP-2和-9的浓缩液均购自北京中杉金桥生物技术有限公司，依不同配比稀释后进行预实验，选择最适合的稀释比例进行实验的检测。MMP-2和-9的检测应用免疫组织化学技术的SP法。具体步骤：脱蜡后置于自来水中放置10 min，以3%H2O2去离子水进行孵育10 min，待高压锅蒸煮修复后分别滴加MMP-2或-9的一抗，室温37℃孵育1～2 h或过夜，应用PBS缓冲液冲洗，每次5 min，共3次;加入二抗，室温状态孵育20 min，PBS缓冲液冲洗，每次5 min，共3次;加入辣根酶标记链霉卵白素，室温状态孵育约30 min，PBS缓冲液冲洗，每次5 min，共3次;DAB显色后，应用自来水进行冲洗，苏木素复染、脱水、透明、封片。实验均由同一病理科主管技师进行操作，避免人为误差。

1.4 统计学分析 应用SAS6.12进行t检验或χ2检验，多组间定量资料比较采用方差分析，并应用SNK法进行两两比较，同时对数据进行线性相关分析。

2 结果

2.1 前列腺癌中不同血流分级与MMP-2和-9表达阳性率的关系 前列腺癌中MMP-2和-9的表达与不同血流分级相关，即随着术前血流分级的增加，MMP-2和-9表达的阳性率明显增加(P＜0.01)。见表1。

2.2 前列腺癌不同临床病理特征中血流分级与MMP-2和-9表达阳性率的差别 不同Gleason评分、增殖细胞核抗原(PCNA)、Ki67表达的前列腺癌血流分级与MMP-2和-9的表达差别均显著(P＜0.01，P＜0.000 1)。见表2。

2.3 前列腺癌中血流分级与MMP-2和-9表达的相关性 经线性相关分析，血流分级与MMP-2表达的阳性率呈正相关性(r=0.49，P=0.029 3)，血流分级与MMP-9表达的阳性率呈正相关性(r=0.45，P=0.022 6)。

表1 前列腺癌中不同血流分级与MMP-2和-9表达阳性率的比较( s，%)

表1 前列腺癌中不同血流分级与MMP-2和-9表达阳性率的比较( s，%)

血流分级 n MMP-2 F值 P值 MMP-9 F值 P值0级 23 25.08±6.65 11.02 0.003 9 19.48±6.64 10.06 0.009 8Ⅰ级 25 35.43±6.54 34.16±7.46Ⅱ级 26 54.53±10.79 42.64±6.51Ⅲ级25 67.57±10.03 57.65±14.54

表2 前列腺癌不同临床病理特征中血流分级与MMP-2和-9表达阳性率的差别( s，%)

表2 前列腺癌不同临床病理特征中血流分级与MMP-2和-9表达阳性率的差别( s，%)

临床病理特征n 血流分级〔n(%)〕0～Ⅰ级 Ⅱ～Ⅲ级 χ2值 P值 MMP-2 t值 P值 MMP-9 t值 P值Gleason 43.694 7 ＜0.001 15.43 ＜0.000 1 12.32 ＜0.000 1≤6分 55 43(78.18)12(21.82)38.75±11.03 33.42±7.69＞7分 44 5(11.36)39(88.64)53.25±12.54 46.57±9.20 PCNA 13.763 0 0.000 2 10.85 0.002 9 11.29 0.000 2＜25% 47 32(68.09)15(31.91)39.85±8.74 33.02±9.84≥25% 52 16(30.77)36(68.23)49.86±8.93 44.35±7.64 Ki67 6.304 3 0.0120 8.54 0.010 3 9.07 0.008 6＜25% 49 30(61.22)19(38.78)40.32±7.06 33.95±8.73≥25% 50 18(36.00)32(64.00)48.75±7.39 43.53±8.29

3 讨论

超声对肿瘤的血流能较好地反映出来，已经在恶性肿瘤术前诊断中得到应用〔4〕，但是在前列腺癌术前分级中报道较少，而前列腺癌老年人多见，应用超声术前诊断前列腺肿瘤简便、易行，患者无痛苦，易于接受。实体肿瘤细胞的生长分为血管生长前期和血管化的浸润性生长期，在血管前期，其原发肿瘤直径常小于3 mm，中心部位主要靠弥散作用获得营养，因此病变相对静止，肿瘤生长缓慢，当肿瘤生长进入浸润性生长期，此时将新生大量血管，此时影像学检测血流将具有重要价值。当肿瘤细胞增殖时，MMP-2和-9以酶原形式分泌到基质中，不仅能够在细胞表面活化其他促转移的细胞因子，而且其还具有广泛的底物特异性和强大的基质降解功能〔5，6〕。当肿瘤细胞恶变时，肿瘤细胞通过分泌MMP-2和-9来降解构成基底膜的成分，从而破坏了机体防御时肿瘤浸润与转移的自然屏障，促使肿瘤浸润和转移〔7，8〕。近来有研究显示MMP家族对血管生成有重要促进作用〔2〕，因此，超声检测血流分级可能与MMP-2和-9表达有一定的相关性。本结果显示前列腺癌随着血流分级的增加，MMP-2和-9表达的阳性率明显增加，且血流分级、MMP-2和-9的表达与肿瘤的Gleason评分、PCNA、Ki67表达密切相关，由于以上因素均与前列腺癌预后相关，因此术前检测血流分级可能对判断患者的预后有一定价值。超声检测是无创性检测，能有效提供血流图像，而且前列腺癌的癌组织中血管及血流均很丰富，也为超声术前判断肿瘤的生物学行为和指导治疗提供了重要帮助。本实验中显示血流分级与MMP-2和-9的表达呈正相关性，这也直接证实了二者的协同作用，这与MMP-2和-9对血管生成的促进作用的研究结论一致，也为肿瘤血管学的超声声像研究提供了理论依据。综上，术前对前列腺癌患者应用超声检测血流分级，能无创性地判断肿瘤中血管形成情况，同时反映MMP-2和-9的表达特点，对于判断肿瘤预后和指导临床治疗有一定价值。

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2 刘爱东，庞久玲，刘士生.胃癌中基质金属蛋白酶-9和CD105表达关系的研究〔J〕.中国老年学杂志，2009;29(4)：886-7.

3 高 伟，黄 力.二维超声和CT对前列腺癌术前分期的价值〔J〕.暨南大学学报(医学版)，2005;26(6)：798-802.

4 麻继红，赵玉珍，纪小惠，等.肾癌彩色血流平均密度与病理组织学分级及微血管密度的对比研究〔J〕.中华超声影像学杂志，2005;14(9)：682-4.

5 Wang Q，Diao X，Sun J，et al.Regulation of VEGF，MMP-9 and metastasis by CXCR4 in a prostate cancer cell line〔J〕.Cell Biol Int，2011;35(9)：897-904.

6 刘爱东，庞久玲，郭红辉.基质金属蛋白酶-9在胃癌中的表达及意义〔J〕. 现代中西医结合杂志，2011;20(18)：2226-7.

7 Reis ST，Pontes JJ，Antunes AA，et al.MMP-9 overexpression due to TIMP-1 and RECK underexpression is associated with prognosis in prostate cancer〔J〕.Int J Biol Markers，2011;26(4)：255-61.

8 Aalinkeel R，Nair BB，Reynolds JL，et al.Overexpression of MMP-9 contributes to invasiveness of prostate cancer cell line LNCaP〔J〕.Immunol Invest，2011;40(5)：447-64.