穴位埋线对衰老模型大鼠慢性应激下丘脑-垂体-肾上腺轴的调节作用

边心会 张 宏 徐朝霞 (广州市番禺区中医院，广东 广州 511400)

下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴作为机体神经内分泌免疫网络的枢纽，在维持机体内环境稳定和衰老调节中起着非常重要的作用。应激则是机体受到强烈刺激后出现的一系列神经内分泌免疫反应，以及由此引起的各种功能和代谢的改变。研究发现长期的慢性应激可引起神经内分泌免疫功能紊乱，加速机体的衰老进程〔1～3〕。本文重在观察慢性应激对衰老机体HPA轴的影响以及穴位埋线的调节作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物与分组 健康3月龄SD雄性大鼠48只，SPF级，体重200～250 g，由广州中医药大学实验动物中心提供。大鼠按体重随机分为四组：空白对照组(A组)、模型组(B组)、模型+应激组(C组)、模型+应激+埋线组(D组)每组12只。大鼠均饲养于SPF级动物实验室，分笼饲养，每笼4只，饲养温度21℃ ～24℃，光照时间为12 h左右，国家标准固体混合饲料喂养，自由饮食。

1.2 主要试剂与仪器 D-半乳糖厦门兴隆达化学试剂有限公司提供;制动应激器为有机玻璃制成，由河南省新乡县实验动物设备厂提供;医用羊肠线为可吸收性外科缝线3-0铬制，上海浦东金环医疗用品有限公司生产;放免测量仪由上海日环仪器一厂生产(型号TSN-695B);低温离心机为德国Allergra公司生产(型号X-22R);皮质醇(Cor)检测药盒由北京科美东雅生物有限公司提供(批号060825);促肾上腺皮质激素(ACTH)检测药盒由北京北方生物技术研究所提供(批号060809);促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)检测药盒由中国第二军医大学提供(批号060801)。

1.3 模型制备 本实验过程共8 w。B组、C组与D组连续8 w给予腹腔注射5%D-半乳糖溶液(生理盐水配制，120 mg·kg－1·d－1)，每天1次，A 组每天给予腹腔注射等量生理盐水;C组与D组从第5周开始给予制动应激，应激工具为由大鼠固定仪改制而成的限制活动筒。将造模大鼠置于应激装置中，应激装置以完全限制大鼠活动为度，应激每天1次，连续应激4 w，并通过循序延长制动时间增加应激强度。应激时间分别为d1～d4：60 min/d;d5～d8：90 min/d;d9～d12：120 min/d;d13 ～ d16：150 min/d;d17 ～ d20：180 min/d;d21 ～d24：210 min/d;d25 ～d28：240 min/d。每天应激时间安排在上午9：00 ～12：00。

1.4 埋线取穴与方法 D组从第1周开始给予穴位埋线，选取“肾俞双”、“肝俞双”、“百会”、“内关双”作为穴位埋线处方。“肾俞”和“百会一组，”“肝俞”和“内关”一 组，两组交替埋线。穴位定位参照《实验针灸学》。将大鼠在清醒状态下俯卧固定于大鼠固定架上，将医用羊肠线剪成0.4～0.6 cm数小段，用镊子将其传入7号注射针针头中，然后将预先剪去针尖的2寸针灸针作为针芯缓慢插入注射针头管中，组成一套。埋线时，穴位皮肤局部消毒后，将注射针头刺入穴位，抵住毫针针尾，缓慢将针头内羊肠线推入穴位内，待觉指下有空虚感后方可出针，并确认羊肠线已埋入穴位内，然后用消毒干棉球按压针孔1 min。穴位埋线每周1次，共埋线8次。

1.5 标本采集与制备 各组大鼠于第8周实验结束后上午8：00～12：00进行称重取材。所有大鼠腹腔注射麻醉(6%水合氯醛0.3 ml/100 g)，快速眼球取血，将4 ml全血导入预先准备的试管中，于 4℃中静置 1 h后离心。离心条件：4℃，3 000 r/min，15 min。离心后取上清液，于－30℃中保存，待测血清Cor和血浆ACTH。取血后迅速断头，于冰盘中迅速开颅取下丘脑，并称重。然后下丘脑于冰浴中用玻璃匀浆器匀浆，低温离心(4℃，4 000 r/min，20 min)，取上清液保存于 －30℃中，待测下丘脑CRH。用放射免疫法分别测定三种激素的含量，检测步骤分别依据试剂盒说明书进行。

1.6 统计学方法 数据用SPSS11.5软件处理，数据均以s表示，多组间资料统计采用方差分析进行比较。

2 结果

见表1。B组、C组的血清Cor含量明显高于A组(P＜0.05，P＜0.01);而C组血清 Cor的含量比 B组升高更明显(P＜0.05);而D组血清Cor含量明显降低，与C组相比有显著性差异(P＜0.05)。与A组相比，B组血浆ACTH、下丘脑CRH含量有所升高，但差异无显著性(P＞0.05);C组两种激素含量升高明显，与A组相比有显著性差异(P＜0.05);D组两种激素含量明显降低，与C组相比差异有显著性(P＜0.05)。

表1 各组大鼠血清Cor、血浆ACTH和下丘脑CRH的含量( s，n=12)

表1 各组大鼠血清Cor、血浆ACTH和下丘脑CRH的含量( s，n=12)

与A组比较：1)P＜0.05;2)P＜0.01;与C组比较;3)P＜0.05

组别 血清Cor(pg/ml)血浆ACTH(pg/ml)下丘脑CRH(pg/mg)A组21.58±3.26 34.02±5.22 73.18±35.23 B组 37.93±5.451)3) 51.97±7.53 125.27±53.55 C组 55.04±6.952) 62.79±9.731) 213.20±45.541)D组 37.28±8.233) 35.13±9.13) 84.46±35.673)

3 讨论

HPA轴主要由下丘脑、垂体和肾上腺组成，三者构成一种级别上的相互协调的反馈调节系统。HPA轴作为神经内分泌免疫网络的枢纽，在维持内环境稳定和机体衰老调节中起着非常重要的作用，而机体对外环境的适应能力和对应激耐受能力的下降是衰老的突出特征，因此可以说HPA轴功能的增龄性变化参与了机体的衰老过程，是导致机体应激反应调节能力下降的重要原因。HPA轴功能亢进可引发神经、内分泌和免疫功能的广泛改变，导致内环境紊乱，促进机体衰老。

应激是机体受到强烈刺激后发生的以交感神经-肾上腺髓质和HPA轴功能增强为主要特点的非特异性反应。HPA轴的激活及由此引起的GC分泌增加，是应激反应最重要的特征。当机体感受应激原时，HPA轴兴奋性提高，肾上腺分泌糖皮质激素(GC)水平升高，从而动员储备，适应环境〔4〕。HPA轴在应激时的激活是机体对应激作出的一种适应性反应，在保持机体内环境稳定，调节机体生理功能以应付不良刺激方面有重要的意义。但若机体长期处于应激状态，HPA轴功能持续亢进，使机体长期处于高水平的GC中，则严重影响人类的身心健康，加速机体的正常衰老过程。研究发现，HPA轴应激反应的高位调节中枢是海马，长期持续的应激选择性损伤海马，使海马对HPA轴功能的抑制性调节作用减弱，导致HPA轴功能长期亢进，从而引发神经内分泌功能紊乱，促进机体衰老过程〔5〕。中医理论认为，慢性应激主要通过影响人的心、肝、肾、脑等功能，使机体出现气血流通不畅，脏腑功能紊乱，阴阳失调，加速机体的衰老。本实验选取肾俞、肝俞、内关、百会作穴位埋线治疗。因为肝俞和肾俞为肝肾两脏的背俞穴，是脏腑气血的汇聚地，能补肾疏肝、理气和血、调节阴阳、强腰健骨。内关为手厥阴心包经络穴，有益气养心、安神除烦、宽胸理气等作用。百会为督脉穴位，为三阳五会，与脑髓关系尤为密切，具有协调百脉之功。穴位埋线四穴，可疏通经络、调节平衡、益智复聪，提高抵抗力，改善学习记忆力。穴位埋线疗法，是一种简便易行的，融多种疗法、多种效应于一体的复合治疗方法〔6〕，具有省时方便、作用柔和持久的特点，通过穴位埋线刺激，可改善衰老机体和慢性应激导致的HPA轴功能紊乱，减轻应激损伤，延缓衰老。

1 Seckl JR.Glucocorticoids，ageing and nerve cell damage〔J〕.J Neuroendocrinol，2000;12(8)：709-10.

2 王晓英，包天桐.应激与衰老的实验研究〔J〕.中国自然医学杂志，2001;3(4)：199-202.

3 韩 娟.慢性应激对大鼠下丘脑神经递质的影响及中药的调节作用〔J〕.吉林中医药，2002;22(4)：54-5.

4 McEwen BS.Stress and the aging hippocampus〔J〕.Front Neuroendocrinol，1999;20(1)：49-70.

5 连晓媛，张均田，包天桐.海马与下丘脑-垂体-肾上腺轴功能的调节〔J〕.国外医学·内分泌学分册，1998;18(4)：169.

6 尹改珍，霍新慧.穴位埋线疗法现代临床应用〔J〕.针灸临床杂志，2006;22(10)：58.