高效液相色谱法测定活血定痛合剂中阿魏酸的含量

李 洋

南京中医药大学基础医学院，江苏 南京 210046

高效液相色谱法测定活血定痛合剂中阿魏酸的含量

李 洋

南京中医药大学基础医学院，江苏 南京 210046

目的:研究活血定痛合剂中阿魏酸的含量测定方法。方法:色谱柱:HangBang C18(200*4.6mm 5μm);流动相:甲醇－0.6%冰醋酸 (45:55);检测波长为UV320nm;流速为0.5ml/min;结果:该方法的线性范围为0.513～2.565μg(r=0.9999)，平均回收率为98.86%。结论:本法简便、准确、可行，灵敏度高，重现性好，可用于活血定痛合剂的成分含量测定。

色谱法;高效液相;活血定痛合剂;阿魏酸;含量

活血定痛合剂由川芎、当归、赤芍、没药、红花、桃仁、莪术、延胡索、续断、青木香等中药组成，具有治疗风湿痹痛、筋骨疼痛、跌打损伤，具有良好的临床效果［1］。为了保证临床用药效果，控制活血定痛合剂的质量，本实验建立了高效液相色谱法测定活血定痛合剂中阿魏酸含量的方法。经方法学考察证实该方法灵敏度高，重现性好，结果满意。

1 仪器与试药

1.1 仪器

高效液相色谱仪系统包括高效液相色谱仪 (Waters 515);P200高压泵;Waters 2487紫外检测器;色谱柱Hanbang C18(200*4.6mm 5μm);数据采集及处理采用HS色谱数据工作站V4.0+(杭州英谱科技)。

1.2 试药

阿魏酸对照品，中国药品生物制品检定所 (批号:0762－200603);活血定痛合剂，常熟市中医院制剂室提供(批号:20100708，20100821，20100923，20101122); 其他试剂均为分析纯。

表1 活血定痛合剂加样回收率试验结果

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验［2］

色谱柱:HangBang C18(200*4.6mm 5μm);流动相:甲醇－0.6%冰醋酸 (45:55);使用前以0.45μM微孔滤膜减压过滤，检测波长为UV320nm;流速为0.5ml/min。此条件下分离度＞2.0，理论塔板数按阿魏酸峰计算应不低于2500。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取阿魏酸对照品10.26mg，置100 mL量瓶中，加流动相超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得0.1026mg/ml对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

精密吸取本品10 mL(约1/20瓶量)置100 mL容量瓶中，加流动相40mL，密塞，摇匀，超声处理 (功率300W，频率100Hz)60分钟，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，用0.45μM微孔滤膜减压过滤，取续滤液作为供试品溶液。

2.4 线性关系

取对照品溶液，分别进样5、10、15、20、25μL，即相当于阿魏酸0.513，1.026，1.539，2.052，2.565μg的对照品溶液，测定峰面积，以阿魏酸质量为横坐标、峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程以及线性范围，分别为:Y=175785.2858X+373.7548，r=0.9999，阿魏酸进样量在0.513～2.565μg范围内峰面积与进样量呈良好线性。

2.5 加样回收率

精密吸取已知含量的样品溶液5份，分别置50mL量瓶中，每份精密加入一定量对照品溶液，然后用流动相稀释到刻度，照含量测定方法操作，计算回收率。结果见表1。

2.6 进样精密度试验

在上述色谱条件下，取阿魏酸对照品溶液重复进样8次20μL，记录峰面积，RSD为1.08%。

2.7 重复性试验

精密称取同一批号的样品 (批号:20100708)按照样品测定的方法重复操作8次，测得阿魏酸平均含量和RSD，结果表明，重复性试验RSD为1.31% ，表明本法重现性很好。

2.8 稳定性试验

取样品 (批号:20100708)新配的供试品溶液分别在0、2、4、8、16h进样20μL，测定其中阿魏酸的峰面积，结果RSD为1.16%，表明供试品溶液在16 h稳定。

2.9 样品测定

取4批样品，按上述供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，依上述色谱条件测定含量，分别进样10μL，记录色谱图，按外标法计算样品中阿魏酸的含量。结果见表2。

表2 HPLC测定活血定痛合剂中阿魏酸的含量结果

3 讨论

3.1 根据所测四批样品的含量结果，活血定痛合剂中阿魏酸的平均含量为28.75mg/瓶，因此可规定活血定痛合剂中阿魏酸 (C19H25O3)不得少于20mg/瓶。

3.2 提取方法的选择 本实验曾用几种方法处理样品，结果以本文拟订的方法结果最好，且操作简便，故选用超声处理 (功率300W，频率100Hz)60分钟。

3.3 检测波长的选择 阿魏酸的分子光谱仅在320nm处有一中等强度的吸收峰，故选择320nm为检测波长。

［1］金凤珠.活血定痛合剂的研制及临床疗效观察［J］.吉林中医药，2001，(2):53.

［2］欧阳强，刘义保，雷茂华.靖巅饮口服液中阿魏酸的含量测定［J］.中国新药与临床药理，1999，10(5):293－294.

R284.1

A

1007－8517(2012)02－0041－01

2011.11.27)

李洋 (1972－)，男，壮族，江苏省南京市人，南京中医药大学基础医学院2007级博士研究生。E－mail:nzyylx@163.com。