草菇菌种不同保藏方法的效果比较*

陈志宏 郑 铃 刘新锐 谢宝贵

(福建农林大学生命科学学院菌物研究中心,福州 350002)

草菇 (Volvariella volvaeea),又名苞脚菇、麻菇、贡菇、秆菇等,在欧美国家被称为稻草蘑菇、中国蘑菇[1]。草菇喜温、喜湿,因自然发生于稻草上而得名[2]。

生产实践表明,与其他食用菌相比,草菇菌种最容易发生变异。遗传和变异是生物的基本特性,是一对矛盾,育种工作者希望获得大量的变异个体,才能从中筛选出优良品种,而良种繁育则不希望菌种发生变异。食用菌科技工作者耗费了大量人力、物力和财力培育出来的优良品种,保持品种的优良特性、避免变异,是良种保藏繁育的主要目标和任务。菌种保藏不仅要保持菌种不死亡、不被杂菌污染,而且要保持菌种遗传性状不发生或尽少发生变异。

现有的菌种保藏常采用控制温度、水活度、氧气和营养等方法,让菌种处于休眠状态,降低或抑制食用菌的生长代谢,减少发生变异,达到菌种保藏的目的[2]。大多数食用菌菌种可以通过低温来保藏,但草菇是一种高温型食用菌[3],在低温 (4℃以下)下存放会死亡,而在较高的温度下保藏,又常发生变异。本研究进行包括超低温液氮保藏在内的4种保藏方法的试验,以期筛选出草菇菌种保藏的适用技术。

1 材料与方法

1.1 菌种来源 试验所用的草菇菌种V0049、PYd15和H1521均由福建农林大学菌物研究中心提供。

1.2 传代保藏 供试菌株在PDA斜面培养基上培养,菌丝长满斜面后放于30℃下保藏2个月。

1.3 无菌水保藏 菌落刚长满培养皿时,用直径0.5 cm打孔器在以接种块为中心,半径3 cm的圆弧线上打取接种块,放入冻存管,每管5块,注入无菌水 (蒸馏水),密封冻存管管盖,30℃下保藏2个月。

1.4 矿油保藏 菌落刚长满培养皿时,用直径为0.5 cm打孔器在以接种块为中心,半径3 cm的圆弧线上打取接种块,放入冻存管,每管5块,注入矿油,密封冻存管管盖,30℃下保藏2个月。

1.5 液氮保藏 与矿油保藏方法相似,在冻存管内注入经灭菌的10%甘油作为保护剂,密封冻存管管盖,随后作降温处理。降温程序为：从25℃至4℃,降温速率为9℃/min;4℃至-40℃,降温速率为 1℃/min;而后直接垂直降温至-196℃,放入液氮中冻存2个月。解冻方法为35℃处理5 min。

1.6 菌种保藏效果检测 经过2个月的保藏,菌种块在接种之前先用无菌滤纸吸干保护剂 (无菌水、矿油或甘油,传代培养则直接接种),然后接种于PDA平板培养基中央,在35℃下培养,记录菌丝萌发时间、菌丝生长速度,并计算菌丝生长的平均速度。

2 结果与分析

试验菌株V0049、PYd15和H1521采用4种不同方法保藏2个月后,解冻活化培养的结果表明：4种保藏方法菌种萌发率都达到100%,萌发时间略有差异,但不是很明显。菌丝生长速度和长势以液氮超低温保藏较好,其次为蒸馏水和矿油,传代保藏效果较差 (表1,图1)。

表1 不同保藏方法的菌丝生长情况

3 讨论与结论

食用菌种质资源保藏方法虽多,但基本原理都是使菌丝处于代谢微弱、生长受抑制的环境中。低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力下降的重要措施[4]。液氮超低温保藏是将菌种保藏在-196℃的液态氮中,使菌种的生命代谢停止。因此,自1968年Hwang首先应用液氮保藏食用菌以来,液氮保藏因其突出的优点而被广泛应用。该方法可长期保存菌种,已被认为是最有效、安全的保藏方法[5,6],但是与超低温液氮保藏方法相比,矿油和无菌水的保藏方法具有成本低、操作方便等优点,更适合广大菇农使用。

本试验结果表明,液氮菌种保藏具有一定优势,但是为进一步优化草菇液氮保藏条件,液氮保藏的降温程序、有效温度范围等尚需进一步研究。

本试验中液氮保藏效果最好,但费用昂贵,不仅需要购置液氮罐,而且在菌种保藏过程中每个月都要注1～2次液氮。矿油或无菌水保藏的性价比较高,无需添置设备,试剂低廉,建议推广使用。

图1 菌株H1521不同保藏方法菌丝生长情况

[1]黄 毅.食用菌栽培学(第三版)[M].高等教育出版社.2008,7.

[2]张瑞颖,胡丹丹,左雪梅.食用茵菌种保藏技术研究进展[D].食用菌学报.2010.17(4)：84～88.

[3]李 刚.草菇分子标记辅助育种研究[D].福州：福建农林大学,2008.

[4]MORTEN c,SANJEEB B.SHIVA D.et a1.Collection and use of wild ediblefungi[M].Nepal：EconomicBotanybySpringer New York.2008：12.23.

[5]黄 河,徐大雅.液氮保存疫霉属菌种存活期检测[J].真菌学报,1993,12(1)：48-53.

[6]刘新锐,叶 夏,王玉青,宋秀高,陈传明,谢宝贵.香菇菌种液氮保藏技术研究 [J].热带作物学报,2011,32(7)：1360-1363.