丹参对急性胰腺炎大鼠肠黏膜屏障功能和免疫功能的影响

高允海

（辽宁中医药大学第一附属医院普外科，辽宁 沈阳 110032）

急性胰腺炎（acute pancreatitis，AP）是临床常见急腹症，进来研究认为AP并非细菌感染所致，但在临床上死亡的病例中80%是由胰腺继发感染所致，而继发感染的机制主要为肠黏膜屏障功能受损、肠道细菌移位，使肠道内细菌和毒素侵入系统循环，同时AP使肠道免疫功能处于严重抑制状态，使机体抗感染能力下降，病情恶性循环最终出现全身炎性反应，甚至出现MODS，最终死亡。因此保护肠道黏膜屏障功能，并提高肠道免疫功能是治疗和改善AP预后的关键措施之一。中药丹参在这方面有着良好的作用，丹参治疗AP的临床报道较多，但就丹参对AP肠黏膜屏障和免疫功能的实验研究报道较少。本研究通过制作大鼠AP模型，动态观察大鼠外周血 D-乳酸（D-Lac）、二胺氧化酶（DAO）和肠组织的分泌型免疫球蛋白A（sIgA）的变化，以判定丹参对AP肠黏膜屏障和免疫功能的治疗作用，为临床应用提供一定的理论和实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物及分组

健康 SD大鼠 90只，雌雄不限，10～12周龄，体质量250～300g，由辽宁中医药大学动物实验中心提供，实验前标准颗粒混和饲料喂养1周。随机分为9组，分别为假手术（F）1、3、5天组（F1d、F3d、F5d组）；胰腺炎（AP）对照1、3、5天组（AP1d、AP3d、AP5d组）；丹参治疗（SM）1、3、5天组（SM1d、SM3d、SM5d组），每组10只。

1.2 试剂

牛磺胆酸钠购自美国Sigma公司。二胺氧化酶（DAO）试剂盒：北京 304 医院创伤研究所提供。丹参注射液：由哈药集团中药二厂生产，批号：Z10970093。

1.3 模型制备

参照 Aho等[1]的方法并加以改进，采用胆胰管内注射5%牛磺胆酸钠溶液的方法制备AP模型。丹参治疗组关腹后立即尾静脉注射丹参注射液，注射量为10ml/kg，每12h给药一次，连续给药5天。假手术组、胰腺炎组均在相应的时间段用等量生理盐水尾静脉注射，各组均在相应时间点取材。

1.4 观察指标及方法

F1d、AP1d、SM1d组在术后第1d；F3d、AP3d、SM3d组在术后第3d，F5d、AP5d、SM5d组在术后第5d分批抽静脉血处死大鼠，用改良的酶学分光光度法[2]测定D-乳酸、二胺氧化酶，在空肠上段截取3cm长肠组织标本，用免疫放射分析法测定sIgA含量。每组每个时间点10只。

1.5 统计方法

2 结 果

2.1 试验指标

2.1.1 血清二胺氧化酶（DAO）

假手术组术后5天DAO值无明显变化（P＞0.05），AP1d组较F1d组升高（q=6.7844，P＜0.01），AP3d与AP5d无差异（q=0.0214，P＞0.05），但均较AP1d进一步升高（P＜0.05），与F3d、F5d比较均显著升高（P＜0.01），说明胰腺炎模型大鼠造模后1天DAO开始升高，随着时间延长DAO值升高并保持在一定水平；经丹参治疗1天后DAO值较F组升高（q=6.7844，P＜0.01），与AP1d无差异（P＞0.05），丹参治疗3天后DAO较SM1d组下降（q=4.3001，P＜0.01），较AP3d明显下降（q=11.2495，P＜0.01），但仍高于F3d组（q=3.709，P＜0.05），丹参治疗5天后DAO较SM3d组进一步下降（q=4.3748，P＜0.01），明显低于AP5d（q=15.0318，P＜0.01），与F5d组无明显差异（q=1.0226，P＞0.05），说明丹参治疗1天DAO值无变化，随着治疗时间延长DAO逐步下降，到第5天DAO值下降至正常水平（表1）。

表1 各组大鼠的血清二胺氧化酶（DAO）（ku/L）

2.1.2 循环D-乳酸（D-Lac）

术后各时间点检测F各组D-Lac值无明显变化（P＞0.05），造模后1天D-Lac 值就较F1d组升高（q=6.7603，P＜0.01），第3天、第5天较第1天进一步升高，差异显著（P＜0.01），与F3d、F5d比较升高更为明显（P＜0.01），AP3d与AP5d无明显差异（q=2.0843，P＞0.05），说明胰腺炎大鼠循环D-Lac随时间逐渐升高，并保持在一定水平；经丹参治疗后第1天较F1d组升高（q=6.1688，P＜0.01），与AP1d无差异（q=0.5915，P＞0.05），SM3d组较SM1d组下降（q=3.，4216，P＜0.05），较AP3d明显下降（q=12.7719，P＜0.01），与F3d组无差异（q=0.1888，P＞0.05），SM5d组与SM3d组无差异（q=0.3575，P＞0.05），明显低于AP5d（q=10.9156，P＜0.01），与F5d组无明显差异（q=0.1299，P＞0.05），说明丹参治疗1天循环D-Lac无变化，治疗3天后D-Lac已降至正常组水平，并保持在这一水平至第5天（表2）。

表2 各组大鼠的血清D-乳酸（D-Lac）（mg/L）

2.1.3 分泌型免疫球蛋白A（sIgA）

术后各时间点检测F各组sIgA值无明显变化（P＞0.05），造模后1天肠组织中sIgA值就较F1d组下降（q=4.0477，P＜0.05），第3天、第5天较第1天逐步下降，差异显著（P＜0.05），与F3d、F5d比较均显著下降（P＜0.01），说明胰腺炎大鼠肠组织中sIgA含量随病程延长逐渐下降；经丹参治疗后第1天、3天、5天sIgA值均与AP1d无差异（P＞0.05），SM3d组较AP3d升高（q=3.0380，P＜0.05），但仍低于F3d组（q=3.4311，P＜0.05），SM5d组较AP5d组显著升高（q=5.1177，P＜0.01），但仍低于F5d组（q=5.7055，P＜0.01），说明丹参治疗后肠组织中sIgA含量虽较正常组下降，但一直保持在一定的水平，并未出现sIgA含量随病程延长逐渐下降情况（表3）。

表3 各组大鼠肠组织的分泌型免疫球蛋白A（sIgA）（mg/mL）

3 讨 论

目前越来越多的学者认识到AP时肠黏膜屏障功能下降，肠黏膜通透性增加，使肠道内的大量细菌、毒素通过受损肠黏膜进入循环系统，引起继发感染，导致全身炎性反应。因此 认为控制好炎性反应及维护好肠道屏障是治疗AP的关键[3]。同时李云[4]及Curley[5]等大量研究表明AP时机体免疫功能下降，使感染更加难以控制。两者的相互影响恶性循环导致AP的治疗复杂、预后差。

本实验是通过检测血清DAO和D-Lac的变化，反应出肠黏膜损害程度及其通透性的变化，了解肠道屏障功能的改变。实验结果表明，胰腺炎大鼠DAO及D-Lac均升高，并随着病程延长逐渐升高，说明胰腺炎可使肠黏膜屏障功能受损，肠黏膜通透性增加，为肠道细菌移位、毒素吸收入血提供条件。经丹参治疗后第1天DAO和D-Lac变化不明显，经过持续丹参治疗3天后两项指标均出现下降，随着治疗时间延长下降趋势更为明显，至第5天已降至正常水平，DAO和D-Lac两项指标呈现基本一致的变化趋势。说明丹参能修复胰腺炎大鼠受损肠黏膜，改善肠黏膜通透性，保护肠道屏障功能。

sIgA是肠黏膜主要的免疫球蛋白，研究表明[6]，其分泌减少，一方面降低肠道抵御细菌和毒素入侵的能力，易致肠源性感染；另一方面易激活细胞炎性因子，产生过度炎性反应，进一步损害肠黏膜，而引起全身炎性反应综合征。因此，sIgA是观察和评估肠黏膜免疫屏障功能的关键指标。

本实验研究表明急性胰腺炎时肠组织中sIgA含量下降，肠道免疫功能随病程延长下降趋势明显，经丹参治疗后，虽sIgA没有恢复到正常水平，但明显抑制了sIgA含量随病程延长而下降的趋势，说明丹参能够促进胰腺炎大鼠肠黏膜sIgA的合成和分泌，进而增强肠道免疫功能，保护肠黏膜的完整性。

总之，丹参作为一种传统中药，已广泛用于AP的治疗，有效降低AP的死亡率，减少AP的并发症，其疗效显著[7]。本实验研究认为丹参能够明显改善胰腺炎大鼠肠黏膜通透性，保护肠黏膜屏障功能，同时能促进肠黏膜sIgA的合成与分泌，增强肠道免疫功能，由此推断丹参能通过这两方面作用进而有效控制胰腺炎继发感染，避免出现全身炎性反应综合征，这可能就是丹参治疗急性胰腺炎的机制之一。

[1]Aho HJ,Koskensalo SM,Nevalainen TJ.Experimental pancreatitis in the rat.Sodium taurocholate induced acute haemorrhagic pancreatitis[J].Scand J Gastroenterol,1980,15(4):411-416.

[2]黎君友,于燕.分光光度法测定血和小肠组织二胺氧化酶活性[J].氨基酸和生物资源,1996,18(4):28-30.

[3]吕农华.重症急性胰腺炎的内科综合治疗[J].胃肠病学,2005,10(2):125.

[4]李云,钱家勤,秦仁义,等.急性胰腺炎患者的免疫功能变化[J].世界华人消化杂志,2000,8(8):923-925.

[5]Curley P,Nestor M,Collins K,et al.Decreased interleukin-2 production in murine acute pancreatitis:potential for immunomodulation[J].Gastroenterology,1996,110(5):583-588.

[6]Ikeda S,Zaizaur BL,Johnson CD,et al. Total parenteral nutrition supplem entation with glutamine improves survival after gut ischemia reperfusion[J].JPEN J Parenter Enteral Nutr,2002,26(3):169-174 .

[7]阮利群,蔡爱群.丹参注射液治疗重症胰腺炎72例疗效观察[J].浙江预防医学,2003,15(1):78.