高效液相色谱法测定丹参中丹参酮IIA的含量

何玲玲

（佛山市中医院，广东 佛山 528000）

丹参（Salvia Miltiorrhiza Bunge）为唇形科（Labiatae）鼠尾草属多年生草本植物，传统以根入药。丹参味苦，性微寒，具活血化瘀、凉血消痈、清心除烦之功效。活性成分主要包括脂溶性成分和水溶性成分，丹参酮IIA是其脂溶性代表成分之一，相对含量较高，有扩张冠脉，抗心肌缺血等作用[1]。目前，高效液相色谱法（HPLC）已经成为控制中药质量的最为有效的手段，而且很多资料中记录了对丹参高效液相色谱的研究[2,3]，但对丹参的根、茎、叶中

丹参酮IIA的含量测定鲜有报道，本文通过对丹参各部位中丹参酮IIA含量的测定，以为今后中药丹参的采集、部位选择及加工提供一定的理论参考，现将研究结果报道如下。

1 实验材料

1.1 实验仪器

Waters 700高效液相色谱仪 （美国 Waters公司 ）；Waters 700紫外检测器；色谱柱Hypersil ODSC18柱（ 4.6mm×250mm，5μm ）；BS110S电子天平（北京赛多利斯天平有限公司）；干燥箱（浙江省金坛市正基仪器有限公司，型号CS-202），电热恒温水浴锅（北京长安科学仪器厂，型号：HH S11-2），超声仪（ AUTOSC I ENCE，型号：AS5150A ）。

1.2 实验药品

丹参实验材料来自于丹参酮IIA标准品（中国药品生物制品检定所提供，批号：20101213），甲醇（北京化工科技有限公司，色谱纯），水为超纯水，购于广州致信饮片厂的唇形科植物丹参的干燥根、根茎及叶）。

2 方法和结果

2.1 色谱条件

色谱柱Hypersil ODSC18柱（ 4.6mm×250mm，5μm）；流动相：甲醇∶水=75∶25；流速为1.2mL/min；柱温为30℃；检测波长为268～270nm。进样量：10μL，色谱图结果见图1。

图1 对照品丹参酮IIA高效液相色谱图

2.2 对照品溶液的制备

精密称取标准品丹参酮IIA 5.5mg，置25mL的棕色量瓶中，加甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀后定溶，后精密量取2.5mL，置10mL棕色量瓶中，继续采用甲醇稀释至刻度，摇匀后定溶，放置于4摄氏度的冰箱中储存，备用。

2.3 供试品溶液的制备

精密称量丹参根、茎、叶粉末约6.0mg，放置于25mL 烧瓶中，准确加入甲醇5mL后，称重，同时进行超声提取30min，冷却至室温，再称重，用甲醇补足减失的质量，摇匀，取适量用0.22 μm微孔滤膜滤过，将药液溶解于25mL容量瓶中，甲醇定溶至刻度，即得供试品溶液。放置于4摄氏度的冰箱中贮存备用。

2.4 标准曲线的测定

精密吸取上述对照品溶液0. 25mL、0. 50mL、1.00mL、1.25mL、1.50mL 分别置于20mL的棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，按照2.1色谱条件，分别进样3次，每次10μL，记录色谱图（见图1），以峰面积为纵坐标，相应浓度为横坐标，绘制回归方程Y=7.4071×103X +0.0628×103（r =0. 9997），结果丹参酮IIA 在1.25～21.45μg/mL浓度范围之间线性良好。

2.5 精密度测定

精密吸取丹参（6个月根）供试品溶液10.0μL，按照高萧液相色谱测定方法，重复进样6次，进行含量的测定，结果显示丹参酮IIA峰面积的RSD为1.6%。

2.6 稳定性实验

对丹参（6个月根）供试品溶液，分别在第1、2、3、4、5、6h时分别进样，每样重复3次，结果进行考察，丹参酮IIA峰面积的RSD为2.01 %（n=6）。

2.7 重复性实验

精密称量丹参（6个月根）粉末约100mg，共计称定6份，按“2.3”项操作制备供试品溶液，进行测定，丹参酮IIA含量的RSD为2.07%。

2.8 加样回收率测定

精密称量丹参（6个月根）粉末约6.0mg，共6份，按“2.3”项操作制备供试品溶液后，取1.0mL供试品，每份分别准确加入丹参酮IIA对照品储备液1.0mL，进行测定。丹参酮IIA的平均加样回收率为99.83%；RSD为2.04%（n=6），结果见表1。

表1 丹参酮IIA的加样回收率测定结果

2.9 样品的测定

按“2.3”项下操作制备供试品溶液，进样10.0 μL进行检测，测定结果显示丹参的叶和根茎中并未检出丹参酮IIA的含量；4～12月份根中丹参酮IIA含量分别1.87、2.04、2.96、3.01、2.27、1.97、1.41、1.11、1.22 μg/mL。

3 结 论

资料中的方法显示，目前对于丹参及其制剂中有效成分的测定主要有薄层扫描法[4]、分光光度法[5]、毛细管电泳法[6]以及高效液相法。对于丹参中不同部位的成分的测定报道较少。本文通过采用反相高效液相色谱法对中药丹参中不同部位的丹参酮IIA成分进行分析，结果显示，本方法测定中药丹参不同部位中丹参酮IIA，操作方法简单，结果快速准确，重现性较好，乙醇∶水=75∶25；流速为1.2mL/min，进行测定，样品中丹参酮IIA色谱峰与杂质峰可以完全的进行分离，出峰的时间较短，峰形较好。因此，通过实验过程筛选合适的色谱条件，可以作为测定丹参中有效成分丹参酮IIA的含量，从而为中药丹参的选材、鉴定提供有效的理论参考。

[1]宋振玉.中草药现代研究与应用[M].北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社,1996:481-491.

[2]李娴,金传山,吴德玲,等.HPLC同时测定丹参中丹参酮IIA与丹酚酸B的含量[J].安徽中医学院学报,2007,26(3):47-49.

[3]李向平,杨双杰,满书文.高效液相色谱法测定宁神补心片中丹参酮IIA含量[J].中国医院药学杂志,2007,25(5):448-450.

[4]卢平,万民,陈洪燕.四产地丹参主要成分的含量测定与分析[J].中国药业,2007,14(10):33.

[5]唐晓清,王康才,陈暄,等.丹参四个栽培类型的脂溶性成分的聚类分析[J].天然产物研究与开发,2007,19(5):748.

[6]李翔,赵亮,张国庆,等.毛细血管电泳法测定丹参中丹酚酸B的含量[J].药物分析杂志,2006,24(4):439.