变应性鼻炎中血红素氧合酶1与嗜酸性粒细胞的关系

周立勇，罗德生，刘 阳

(1.武汉大学医学部，湖北武汉430072;2.湖北科技学院基础医学院;3.武汉同济医院耳鼻咽喉科)

气道炎性细胞产生的大量细胞因子和炎症蛋白参与了变态反应疾病的形成。血红素氧合酶(HO)是一种血红素降解的催化酶。已发现HO有3 种同工酶，分别为 HO－1、HO－2 及 HO－3。HO－1为诱导型，HO－2和HO－3为结构型，它们是不同基因编码的产物。现已证实HO－1是一种应激蛋白，HO－1适量表达可以减轻细胞损伤、蛋白质氧化及脂质过氧化［1］。但是HO－1在变态反应性疾病中还鲜有研究，本文旨在探讨HO－1在变应性鼻炎患者鼻黏膜中与嗜酸性粒细胞的关系。

1 材料与方法

1.1 标本来源及试剂

变应性鼻炎组:为2009年7月至2009年12月在同济医院接受鼻内镜下鼻中隔偏曲矫正术的常年性、持续性，中、重度变应性鼻炎患者。共12例，男5例，女7例;年龄17～55岁，平均40岁。患者不合并哮喘及阿司匹林耐受不良。依照2009年武夷山会议制定的诊断标准确诊［2］。对照组:为同一时期在我院接受鼻内镜手术的单纯性鼻中隔偏曲患者。共11例，男8例，女3例;年龄16～57岁，平均36岁。所有患者1个月内未进行激素和抗组胺药物治疗。术中取下鼻甲黏膜行PCR。引物由上海生物工程公司合成。

1.2 方法

1.2.1 HE染色

组织经脱水、透明后，进行石蜡包埋、切片，按常规苏木精－伊红染色。

1.2.2 PCR鼻窦黏膜总RNA提取及HO－1 mRNA半定量检测

采用 RT－PCR方法测定HO－1的表达，以甘油醛－3－磷酸脱氢酶(GAPDH)作为内参照。HO－1上游引物:5＇－CGG GCC AGC AAC AAA GTG－3＇，下游引物 5＇－AGT GTA AGG ACC CAT CGG AGA A－3＇;GAPDH 上游引物 5＇－ACCCAGAAGACTGTGGATGG－3＇，下 游 引 物:5＇－TTCTAGACGGCAGGTCAGGT－3＇。计算 HO－1 相对表达量。

1.2.3 定量分析

采用HMIAS2－1000高清晰度医学图文分析系统(武汉千屏医学影像技术公司)进行定量组织病理学分析;鼻黏膜固有层内嗜酸性粒细胞浸润以每平方毫米黏膜固有层细胞个数表示(个/mm2)。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 HO－1 mRNA 表达水平

变应性鼻炎患者鼻黏膜HO－1 mRNA表达水平增高。实时定量RT－PCR检测显示变应性鼻炎患者鼻黏膜中HO－1mRNA相对表达水平(8±1)显著高于对照组(2±0.5)，两组有显著性统计学差异(P＜0.01)(见图1)。

图1 正常对照组和变应性鼻炎组的HO－1 mRNA相对表达水平比较

2.2 嗜酸性粒细胞数目

变应性鼻炎患者鼻黏膜中嗜酸性粒细胞数目增多。计数结果显示，变应性鼻炎患者鼻黏膜中嗜酸性粒细胞数量(40±3.11个/mm2)显著高于对照组(1±0.3个/mm2)，统计有显著性差异(P＜0.001)(见表1)。

表1 正常对照组和变应性鼻炎组嗜酸性粒细胞数比较

2.3 相关性分析

相关性分析表明，变应性鼻炎患者鼻黏膜固有层HO－1mRNA水平与鼻黏膜中嗜酸性粒细胞数目(40±3.1)成明显负相关(r=－0.647，P＜0.01)。

3 讨论

变应性鼻炎是严重影响患者生活质量，加重社会经济负担的全球性问题。美国变应性鼻炎最新调查报告显示14%患者曾被诊断患有变应性鼻炎［2］。我国11个城市中变应性鼻炎自报患病率达8% ～21.4%［3］。目前认为变应性鼻炎是鼻黏膜组织的一种非感染性炎症，它的发生系由外界变应原与位于鼻黏膜的特殊炎症性或免疫防御性细胞发生特异性反应。目前认为变应性鼻炎是由大量的炎性细胞和细胞因子介导的，由变应原引起的炎性反应。它们参与了变应性鼻炎患者鼻黏膜上皮的杯状细胞的增生，黏膜的重塑等病理过程。

HO是一种血红素降解的催化酶。已发现HO 有 3 种同工酶，分别为 HO－1、HO－2 及 HO－3。HO－1 为诱导型，HO－2 和 HO－3 为结构型，它们是不同基因编码的产物。现已证实HO－1是一种应激蛋白，HO－1适量表达可以减轻细胞损伤、蛋白质氧化及脂质过氧化［1］。

在呼吸道疾病中，既往研究主要集中在哮喘和慢性阻塞性肺疾病中，研究表明在肺组织中HO－1具有抑制疾病发生和发展的作用［1］。而HO－1在变应性鼻炎中还没有研究，本研究通过PCR方法显示在变态反应性鼻炎患者鼻黏膜中HO－1 mRNA水平显著增高，提示HO－1可能在变应性鼻炎中起重要作用。Lee IT等［4］研究表明HO－1可能通过下调TNFR1介导的氧化应激来调控呼吸道的炎症反应。Xia ZW等［5］通过研究小鼠的呼吸道变态反应性炎症表明HO－1可能通过上调调节性T细胞的水平来抑制呼吸道的炎症反应，但具体的分子和细胞机制还不清楚。我们通过相关性分析发现鼻黏膜中HO－1水平与鼻黏膜中浸润的嗜酸性粒细胞数目成明显负相关，表明HO－1可能抑制以嗜酸性粒细胞浸润为主的变态反应性疾病的炎症。

综上所述，HO－1可能抑制变应性鼻炎发病的发展，它可能是通过嗜酸性粒细胞来起作用的，但其具体的作用机制还需要进一步探讨。

［1］Tsoumakidou M，Tzanakis N，Chrysofakis G，et al.Nitrosative stress，heme oxygenase－1 expression and airway inflammation during severe exacerbations of COPD［J］.Chest，2005，127(6):1911

［2］中华耳鼻咽喉头颈外科杂志编辑委员会，中华医学会耳鼻咽喉科学分会.变应性鼻炎的诊治原则和推荐方案(2009年，武夷山)［J］.中华耳鼻咽喉头颈外科杂志，2009，40(3):947

［3］韩德民，张罗，黄丹，等.我国11个城市变应性鼻炎自报患病率调查［J］.中华耳鼻咽喉头颈外科杂志，2006，42:378

［4］Lee IT，Luo SF，Lee CW，et al.Overexpression of HO－1 protects against TNF－alpha－mediated airway inflammation by down－regulation of TNFR1－dependent oxidative stress［J］.Am J Pathol，2009，175(2):519

［5］Xia ZW，Zhong WW，Xu LQ，et al.Heme oxygenase－1－mediated CD4+CD25high regulatory T cells suppress allergic airway inflammation［J］.J Jmmund，2006，177(9):5936