离心时间对凝血常规测定结果的影响

李玉芹，赵欣

(1.四川省医学科学院·四川省人民医院检验科，四川成都610072;2.成都市血液中心检验科，四川成都610041)

离心时间对凝血常规测定结果的影响

李玉芹1，赵欣2

(1.四川省医学科学院·四川省人民医院检验科，四川成都610072;2.成都市血液中心检验科，四川成都610041)

目的分析不同时间离心全血所得的血浆测定凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)和纤维蛋白原浓度(FIB)的结果差异性，确定最适合实际工作的离心时间。方法将100例门诊患者的抗凝全血(每例两管)分为A组和B组，在相同条件下，分别离心10 min和5 min，用CA-7000型全自动血凝仪进行血凝常规检测，并且应用XE-2100全自动血细胞分析仪测定血小板计数。结果各项测定结果在离心5和10 min两组间差异无统计学意义(P＞0.05);血浆血小板计数A组(离心10 min)和B组(离心5 min)的测定结果范围分别为(1～8)×109/L和(3～10)×109/L，均达到了乏血小板血浆的标准［＜(10～20)×109/L］［1］。结论凝血常规标本可以3000 r/min离心5 min后进行测定。

离心时间;凝血酶原时间;活化部分凝血活酶时间;纤维蛋白原浓度;凝血酶时间

凝血常规包括凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)和纤维蛋白原浓度(FIB)，其作为凝血功能异常的筛查试验，在出血性疾病诊断、抗凝治疗监测、术前检查中具有重要作用。凝血四项的标本需要离心，离心时间的长短决定了能否获得乏血小板血浆，凝血标本一般要求3000 r/min离心10 min后分离血浆［2］。但在实际工作中由于生化、免疫等标本都是离心5 min，而凝血标本离心时间与它们不一致，带来很多不便。还有当遇到急诊标本时，为了提高工作效率(特别是对于危重患者)，我们想了解缩短标本的离心时间是否可能导致假性异常结果。本研究将两组抗凝全血分别离心5和10 min，在相同条件下测定结果，然后分析两组结果差异有无统计学意义，以确定最适合实际工作的离心时间。

1 资料与方法

1.1 一般资料随机采集2010年8月13～21日在四川省人民医院就诊的100例门诊患者的抗凝全血，每例患者抽血两管，分为A、B两组，A组离心10 min，B组离心5 min。

1.2 方法相同条件下(每天上午8～10点同一患者同时抽两管抗凝全血)，用规格为21 g×1″的BDTM回血采血针采取患者的静脉血1.8 ml(无溶血、脂血、黄疸和血凝块，如有上述情况的标本弃之)，于0.109 mol/L枸橼酸钠为抗凝剂(血液与抗凝剂之比为9︰1)的蓝头真空采血管中(每例两管)，轻轻颠倒5～8次使之充分混匀，并在管上做好标记。两组血液以3000 r/min的转速分别离心10和5 min，立刻按照操作手册上机(SysmexCA-7000型全自动血凝仪)进行血凝常规(PT、APTT、FIB、TT)检测。用Sysmex XE-2100全血细胞分析仪对两组标本血浆进行血小板测定，然后用改良牛鲍计数板手工复查。SysmexCA-7000型全自动血凝仪所用试剂及质控品均为德国Dade Behring Marburg公司生产的凝血试剂;Sysmex XE-2100血液分析仪所用试剂为日本Sysmex公司生产的仪器配套试剂。

1.3 室内质控每天测定标本前分别用与相应仪器配套的同一批号的高中两种值的质控品对Sysmex CA-7000型全自动血凝仪和Sysmex XE-2100全血细胞分析仪进行室内质控，各项目均处于在控状态。各项目重复性实验测定的变异系数(CV)均＜5%。

1.4 统计学方法采用SPSS 10.0专业版统计分析软件进行分析。检测结果以均数±标准差表示，用配对t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同离心时间凝血各项指标测定结果见表1。

表1 不同离心时间凝血各项指标测定结果的比较

2.2 不同离心时间血浆血小板计数A组和B组的测定结果范围分别为(3～12)×109/L和(1～8)×109/L，均达到了乏血小板血浆的标准［＜(10～20)×109/L］［1］。

3 讨论

在血栓和止血检验的全过程中，实验结果受到受血者状态、标本采集后放置时间与处理、抗凝剂与试剂、仪器设备等多方面因素的影响［3］。鉴于此，我们设计的实验是将100例门诊患者的静脉全血分两组，在相同条件下分别离心10和5 min，立即用CA-7000型全自动血凝仪测定结果，最大限度地保证了对比实验单变量的原则。

在实际工作中，因免疫、生化、凝血标本都使用共同离心机离心，而免疫、生化标本离心时间为5 min，若凝血标本离心10 min，常常是先与免疫、生化标一起离心5 min后，又再离心5 min。有些检验人员，在离心5 min后也就未再离心，使得凝血标本的离心时间不一致，因此我们想通过实验，观察凝血标本离心10 min和离心5 min之间各项结果是否会受影响。从表1可以看出，各项凝血指标的测定结果组间的差异均无统计学意义。

虽然各项凝血检验结果的差异无统计学意义，但APTT的P值最小(P=0.052)，说明离心时间的缩短对内源性凝血途径的检测影响最大。究其原因，我们分析认为，血小板在体内凝血过程中发挥重要作用。活化血小板提供的血小板第三因子(PF3)是体内凝血过程重要组成部分。PF3参与内源性凝血途径中复合物FⅨ-FⅧa-Ca-PF3的合成，不仅对因子Ⅹ(FⅩ)有活化作用，而且血小板对FⅧ具有浓缩作用并能促进FⅨ活化［4］。体外检测APTT时就是以脑磷脂代替血小板提供催化表面的。在共同途径中，PF3提供催化表面，促进凝血酶原转变成凝血酶。活化Ⅹ因子(FⅩa)在血小板膜上结合可加速凝血反应，其催化凝血酶原转变成凝血酶的能力，比未结合活化因子Ⅹ促凝快300000倍［5］。研究表明，血小板的磷脂与蛋白成分共同促进了凝血酶原酶与凝血酶的形成，使整个凝血过程加速2×108倍［6］。这样算下来，血小板可使内源性凝血途径提速将近1000倍。如果离心时间不够，血小板没有完全沉降，相应凝血的磷脂催化表面增加，从而使APTT检测时间缩短。因此必须保证3000 r/min及5 min的离心速度和时间，这样既能提高检验速度，又能确保获得乏血小板血浆，以避免影响APTT的结果，从而使免疫、生化、凝血标本离心时间保持一致.

［1］陈宏础，王鸿利等，全国临床检验操作规程［M］.第3版.南京:东南大学出版社，2006:202.

［2］丛玉隆.关于卫生部出凝血时间操作规程《通知》的理解［J］.中华检验医学杂志，2001，24(3):158.

［3］陈林兴，黄华.时间和温度对凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间、凝血酶时间、纤维蛋白原浓度测定结果的影响分析［J］.汕头大学医学院学报，2004，17(1):42-43.

［4］王鸿利，王学锋.血栓病临床新技术［M］.北京:人民军医出版社，2003:20-23.

［5］王振义.血栓与止血基础理论与实践［M］.上海:上海科技出版社，1996:52-60.

［6］Ahmad SS，London FS，Walsh PN.The assembly of the factor X-activating complex on activated human platelets［J］.J Thromb Haemost，2003，1:48-59.

The influence of centrifugal time to results of indexes of coagulation

LI Yu-qin1，ZHAO Xin2(1. Department of Clinical Laboratory，Sichuan Provincial People's Hospital，Chengdu 610072，China;2.Clinical Laboratory Department of Chengdu blood center，Chengdu 610041，China)

ObjectiveTo ascertain the optimum centrifugal time for our work by analysing the differences between the blood plasma specimen's results which include plasma prothrombin time(PT)，activated partial thrombo-plasting time(APTT)，thrombin time(TT)and fibrinogen concentration(FIB)which are centrifuged in different time.Methods100 outpatients vein entire blood samples(two per example)are divided into A group and B group，which is respectively centrifuged 10 minutes and 5 minutes in the same situation.The PT，APTT，TT and FIB results were tested by CA-7000 full-automatic blood coagulation analyzer.The platelet of the blood plasma were measured by Sysmex XE-2100 full-automatic blood cell analyzer.Resultsin centrifugal 10 minutes and 5 minutes has no significant difference(P＞0.05).The range of the results of the platelet in the plasma for A group and the B group is(1～8)×109/L and(3～10)×109/L respectively，both of them are up the standard of the poor platelet plasma［＜(10～20)×109/L］.ConclusionCoagulation specimen can be measured by centrifuged with 3000 r/min speed，5 minutes.

Centrifugal time;Plasma prothrombin time;Activated partial thromboplasting time;Thrombin time;Fibrinogen concentration

R446.111

A

1672-6170(2012)05-0092-02

2012-02-17;

2012-07-18)