血清与血浆定量检测丙型肝炎病毒的对照研究

杜琼，胡萍，曾家伟，龙姗姗，马文娅

(四川省医学科学院·四川省人民医院检验科，四川成都610072)

血清与血浆定量检测丙型肝炎病毒的对照研究

杜琼，胡萍，曾家伟，龙姗姗，马文娅

(四川省医学科学院·四川省人民医院检验科，四川成都610072)

目的探讨采用血清和血浆两种标本同时检测丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)感染者HCV病毒含量的差异性。方法同时收集256例HCV感染者血清和血浆标本，采用PCR-荧光探针法(RT-PCR)进行HCV-RNA的定量检测。结果血清HCV-RNA检出率为69.92%(179/256)，血浆的检出率为85.16%(218/256)，差异有统计学意义(χ2=5.25，P＜0.05)。同时对两种标本检测大于103IU/ml的定量结果进行统计分析，差异有统计学意义(P=0.032)。结论采用血浆标本测定HCV-RNA检出率明显高于血清标本，并且分离标本快速，避免溶血和RNaes的影响，值得推广应用。

血清;血浆;丙型肝炎病毒核糖核酸;丙型肝炎病毒;PCR-荧光探针法

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)是一种全球性传染、给人类健康带来极大威胁的病原体，全世界HCV感染率约为3%，即全世界有1.7～2.0亿人曾感染过HCV［1］。近年来经吸毒和性传播HCV的危险性在不断增加，其导致的公共卫生问题直接影响着一般人群的健康［2］。因此，国内外许多学者都在该人群中开展HCV感染检测方面的研究。目前HCV-RNA被认为是诊断HCV病毒血症的金标准［3］，荧光PCR检测HCV-RNA可以直接反映体内HCV的复制程度，可用于对丙型肝炎的诊断和抗病毒药物治疗中的疗效观察指标，但其检测标本是血清、血浆尚未明确，两者的比较未见报道。本文就HCV感染者血清标本和血浆标本检测HCV-RNA含量进行了初步探讨。

1 材料与方法

1.1 材料标本来自2010年2月至2011年6月四川省医学科学院·四川省人民医院门诊及住院的HCV感染者256例，所有标本均经过丙肝抗原或丙肝抗体检测阳性筛查，医生建议进一步检测HCVRNA含量。同时采集其静脉凝集血2 ml和EDTA抗凝血2 ml分离血清、血浆备用。

1.2 检测方法PCR-荧光探针法(RT-PCR)测定HCV-RNA含量，具体操作步骤及定量结果判断均严格按照SOP文件进行。该方法的线性范围:103～107IU/ml。质量控制:设置阴性对照、试剂空白对照、室内质控的临界阳性、中、高值。HCV核酸定量检测(PCR-荧光探针法)试剂由上海科华生物工程股份有限公司提供;仪器为美国ABI 7500实时荧光PCR分析仪。

1.3 统计学方法数据采用SPSS 12.0软件包进行处理。采用t检验和χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

血清HCV-RNA检出率为69.92%(179/256)，血浆为85.16%(218/256)，差异有统计学意义(χ2=5.25，P＜0.05)，见表1。同时对两种标本检测大于103IU/ml的定量结果进行统计分析，差异有统计学意义(P=0.032)。血清小于检测下限的4例标本中，分析发现其中的有2例血清标本发生了中度溶血。

表1 血浆、血清HCV-RNA检出率比较

3 讨论

丙型肝炎是由HCV感染引起的一种隐匿性、传染性、持续性疾病，不及时治疗，肝炎会转为慢性而最终导致肝硬化乃至演变为肝细胞癌，而目前HCV还没有疫苗可预防，早期诊断和治疗非常重要，HCV感染的实验室诊断是丙型肝炎诊断的重要依据和手段［4］，HCV-RNA检测对丙肝的早期诊断具有重要意义，并且可以直接反映体内HCV复制程度，同时是对丙型肝炎抗病毒药物治疗中的疗效观察的重要指标。

近年来荧光定量PCR技术被广泛应用于临床病原体的检测，它不仅灵敏度高、特异性好，并且，由于试剂防污染系统的使用，避免了扩增产物的污染和环境污染，控制了假阳性结果。许多文献报道检测HCV-RNA常选用血清标本，有关用血浆HCVRNA检测的报道并不多见。两者的比较未见报道，本研究用血浆、血清标本检测HCV-RNA，并将结果进行统计学分析，结果表明HCV-RNA检测用血浆标本优于血清标本，具有标本分离快捷、检测率高的特点。

在血清小于检测下限的4例标本中，有2例血清标本发生了中度溶血，可能是由于:①溶血导致RNA酶释放而降解RNA使其结果无扩增;②标本溶血，血红素抑制反应体系中Taq酶的活性，导致假阴性结果［6］。另外2例血浆标本含量处于检测临界值，而血清标本的含量小于检测下限，这可能是由于血液在凝固的过程中，将HCV病毒包裹，使其仅有的HCV病毒在血清中减少，出现假阴性结果。

血浆标本分离迅速、快捷，不易溶血。血浆和血清成分的最大区别是血浆含有纤维蛋白原，从HCV-RNA的提取过程来看，血浆中虽然存在纤维蛋白原，但在提取后已经弃去纤维蛋白原，因此不会影响检测结果。因而血浆标本代替血清标本检测HCV-RNA是可行的。

综述所述，采用血浆标本测定HCV-RNA灵敏度高于血清标本，同时具有分离标本迅速的特点，值得推广应用。

［1］Zeuzem S，Hultcrantz R，Bourliere M，et al.Pegin terferonalfa-2b plusribavirin for treatment of chronic hepatitis Cin previously untreated patients in fectedwith HCV enotypes 2 or 3［J］.J Hepatol，2004，40(6):993-999.

［2］骆俊，夏娴，喻荣彬.静脉注射吸毒人群丙型肝炎病毒感染研究进展［J］.世界华人消化杂志，2007，15(28):2966-2971.

［3］杨东亮.丙型肝炎的病毒学检测指标及其临床意义［J］.中华肝脏病杂志，2004，12(2):104.

［4］魏来，吴晓东.丙型肝炎病毒检测方法的研究进展及其临床意义［J］.中华检验医学杂志，2008，13(7):884-886.

［5］Castelain S，Descamps V，Thibault V，et al.TaqMan amplification system with an internal positive control for HCV-RNA quantitation［J］.J Clin Virol，2004，31:227-234.

Comparison the quantification results of HCV-RNA between serum and plasma samples

DU Qiong，FU Ping，ZENG Jia-wei，LONG Shan-shan，MA Wen-ya(Department of Laboratory，Sichuan Academy of Medical Sciences＆Sichuan Provincial People's Hospital，Chengdu 610072，China)

ObjectiveTo analyze the differences of the quantification results of HCV-RNA in serum and plasma samples from the same patients with chronic hepatitis C.MethodsA total of 256 serum and plasma samples were collected and analyzed of HCVRNA by real-time quantitative PCR.ResultsThe positive rate of HCV-RNA detected in plasma was 85.16%，which was significantly higher than that(69.92%)in serum samples with P＜0.05.There was statistical significance between the two methods when HCVRNA quantification results were over 1×103IU/ml(P=0.032).ConclusionsHCV-RNA quantification detection in plasma is more sensitive than serum.It is worth of further application with the advantage of fast sample separation，avoiding the influence of haemolysis and RNaes.

Serum;Plasma;Hepatitis C virus-RNA;Hepatitis C virus;Reverse transcription-polymerase chain reaction

R373.2;R331.1;R457.15

A

1672-6170(2012)05-0088-02

2012-04-28;

2012-07-13)