犬传染性呼吸道疾病的诊断

翁善钢

犬传染性呼吸道疾病的诊断

翁善钢

犬传染性呼吸道疾病是犬类的常见疾病。至少有9种病原微生物被认为在犬传染性呼吸道疾病发生过程中起着重要作用，它们分别是支气管败血波氏菌、马链球菌兽疫亚种、支原体、犬流感病毒、犬瘟热病毒、犬呼吸道冠状病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒、犬疱疹病毒。本文主要介绍了这些疾病的诊断方法。

尽管已有针对各种疾病的疫苗，犬传染性呼吸道疾病仍是生活在各种环境中的犬类的重要疾病。随着各种诊断技术的发展，犬类多重感染的情况日益受到关注。近些年，有一些病原体成为了犬传染性呼吸道疾病的重要病原。本文将主要讨论引起犬传染性呼吸道疾病的各种病因以及诊断这些传染性疾病的方法。

有时，引起犬传染性呼吸道疾病的各种病原体可以互相促进对宿主的感染。例如，犬瘟热病毒是一种高度淋巴细胞性的病毒，可以引起免疫抑制，诱发其他呼吸道病毒以及细菌感染。支气管败血波氏菌可以引起纤毛停滞、损害巨噬细胞吞噬功能，因此也可以诱发其他呼吸道病毒以及细菌感染。各种病原体有可能发挥协同作用引起致病，因此不少严重的疾病同混合感染有关。有些无症状的动物也可能存在某种病原的单一感染。

一、病原

了解引起犬传染性呼吸道疾病的各种病原非常重要，因为这有助于选择合适的诊断方法，采取准确的治疗以及预防措施。至少有9种病原微生物被认为在犬传染性呼吸道疾病发生过程中起着重要作用。细菌性病原包括支气管败血波氏菌、马链球菌兽疫亚种以及支原体。病毒性病原包括犬流感病毒、犬瘟热病毒、犬呼吸道冠状病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒（尤其是犬腺病毒2型）、犬疱疹病毒。

大部分犬属于自限性感染，不采用抗生素疗法的情况下，一般5~7天后临床表现能够恢复正常。有些犬可能需要进行一段时间的抗生素治疗。也有部分患犬尽管采取了治疗方法，仍有咳嗽发生。建立相关的诊断方法有助于有效地防控疾病，也有助于采取适当的抗生素治疗细菌感染，如支气管败血波氏菌感染。

二、诊断方法

上述的某一病原体感染都是很难仅靠临床症状就能做出诊断的。主要原因在于很多症状有叠加现象，并且不具有特异性。犬传染性呼吸道疾病的诊断方法主要有对细菌或者支原体进行分离培养，血清学方法检测犬流感以及犬瘟热病毒的抗体，PCR方法检测各种DNA、RNA病毒以及细菌。病毒分离费时费力，一般只用于实验研究。很多情况下也可以采取多种诊断方法同时开展进行诊断。采用培养基培养的方法仍是检测支气管败血波氏菌以及支原体的良好方法。不过，支原体的生长速度较为缓慢。采用细菌培养的方法对检测马链球菌兽疫亚种感染非常重要，因为尚无检测该病原的PCR方法。细菌培养的方法也适合对支气管败血波氏菌进行药敏实验。因为部分菌株对抗生素具有较强的抗性。由于很多犬都会接种疫苗，因此血清学实验所获得的抗体水平结果并不能够正确反应犬的实际感染情况。疫苗通常只能用于减轻疾病的严重的程度，而不能完全预防疾病的发生。

世界各地的研究人员已报道了多种检测病毒的PCR方法。这些方法的敏感性和特异性各异，但一般都能较好地用于日常的疾病检测与诊断。PCR方法主要分为常规的PCR和荧光定量PCR。荧光定量PCR方法用于检测更为有效，因为该方法可以大大降低假阳性。引起犬传染性呼吸道疾病的很多病毒是RNA病毒（如犬瘟热、犬副流感、犬流感病毒等），因此PCR方法检测并非是DNA而是RNA，得采用RT-PCR的方法。RNA比DNA更容易降解，很容易导致假阴性出现。对于不同的病原体应该根据实际情况选择合适的检测方法。现在已有很多实验室或者生物诊断试剂公司提供诊断试剂盒，里面包含多种病毒的检测试剂。

三、引起犬传染性呼吸道疾病的各种病原体及其诊断

（一）支气管败血波氏菌

支气管败血波氏菌是一种需氧的革兰氏阴性球杆菌。这是引起犬传染性呼吸道疾病的最常见细菌性病原。诊断可以通过收集气管或支气管肺泡冲洗液，也可以采用喉-咽或者鼻试进行细菌分离培养或者PCR检测。

（二）马链球菌兽疫亚种

马链球菌兽疫亚种是一种β-溶血性链球菌，可以引起急性化脓性或坏死性出血性肺炎。这也是犬类最常见的一种β-溶血性链球菌。该链球菌的分离成功的几率同疾病的严重程度有关。尚不能确定该病原体是犬传染性呼吸道疾病发病的主要病原还是继发病原。

（三）支原体

支原体被认为属于犬的呼吸道正常菌群，但有时可以从下呼吸道分离到。同犬下呼吸道疾病有关的主要支原体是Mycoplasma cynos。在英国，Mycoplasma cynos同小狗发生支气管肺炎的关系很密切。从犬呼吸道可以分离到的其他支原体还有M bovigenitalium、M canis、M edwardii、M feliminutum、M gateae 和M spumans等。这些通常认为同下呼吸道疾病没有关系。对支原体进行分离培养是常见的诊断方法。支原体生长需要特殊的培养基，有时潜伏期长达1个星期。分子生物学方法如PCR的发展使得诊断支原体更为准确迅速。但对于检测呈阳性的结果是否肯定同疾病的发生有关，仍然是一个值得研究的问题。

（四）犬流感病毒

在美国，犬流感病毒最早出现在佛罗里达。有研究称，引起犬流感的病毒是马流感病毒H3N8亚型的变异毒株。现在犬流感已经广泛存在于整个美国的犬群中。澳大利亚、英国的犬群中也存在较高比例的犬流感病毒感染。任何日龄的犬对犬流感都易感，一年四季均可发生。病毒感染的潜伏期为2~4天，可以引起发热、咳嗽、出血性肺炎等症状，但死亡率较低。继发细菌感染的现象也比较普遍。通过鼻液向外排毒的现象一般出现在疾病发生的早期(感染后的1~7天内），临床症状（喷嚏、咳嗽等）一般在感染病毒3~12天后出现。有些犬呈亚临床感染状态，但仍可以向外界排毒。采集鼻试或者喉试样品做PCR检测可以用于诊断。用于检测人流感病毒的ELISA试剂盒也可以用于检测犬流感病毒，但敏感性要比人流感病毒低。现在，美国等国家已有专门的灭活疫苗被批准用于犬流感的预防。

（五）犬呼吸道冠状病毒

犬呼吸道冠状病毒是一种RNA病毒，是世界各地狗群中新出现的一种呼吸道疾病的病原体。该病毒同牛冠状病毒相近，但同犬肠道冠状病毒却差异很大。该病毒引起的疾病症状通常比较轻微，但很多较为严重的呼吸道疾病的病例中都能够检测到该病毒。犬呼吸道冠状病毒感染有可能诱发其他细菌和病毒感染，但也有可能是引起呼吸道疾病的主要病原。诊断可以采用PCR方法对气管或支气管肺泡冲洗样本和喉试样本进行检测诊断。

（六）犬瘟热病毒

犬瘟热病毒也是引起犬类咳嗽的一个重要因素。很多患犬瘟热的犬并没有神经或胃肠道的症状，咳嗽是唯一的症状。犬瘟热病毒是一种RNA病毒，呼吸道样本可用于RTPCR检测。此外，全血样品以及眼结膜刮取物也可以用于RT-PCR检测。眼结膜刮取物还可以用于间接免疫荧光实验进行诊断，但该方法假阳性以及假阴性的概率较高。除此之外，现在已有多种商用ELISA以及胶体金检测试剂盒用于检测犬瘟热病毒。

（七）其他病原

犬副流感病毒仍然是引起犬传染性呼吸道疾病的头号病毒性病原体。不过，现在已有各种疫苗广泛用于犬副流感病毒感染的预防。其他的病毒性病原体还有犬腺病毒和犬疱疹病毒。犬腺病毒的疫苗可以用于预防犬传染性肝炎。犬疱疹病毒在犬传染性呼吸道疾病发生所起的作用尚不清楚，但近些年的很多犬传染性呼吸道疾病病例中都能检测到犬疱疹病毒。

总之，越来越多的病原体被确认同CIBD的发生有关，因此多种病原体混合感染的情况比较普遍。混合感染很有可能导致更为严重的疾病发生，引起治疗失败。预防疾病的基本方法是进行疫苗接种，但有几种引起CIBD的病原体尚无有效的疫苗，因此采取其他预防措施也比较重要。首先，要建立和健全经常性的防疫制度，有条件的应定期采集样本进行病原体检测。其次，做好经常性的环境卫生和消毒工作。再次，要加强饲养管理，禁喂腐败、变质的肉食和饲料。最后，要勤于观察，发现病犬要及时隔离和治疗。

（作者单位：上海市外高桥出入境检验检疫局检验检疫二科，200137）

（编辑：李 冰）