高效液相色谱法测定维吾尔药制剂西帕依固龈液中没食子酸含量

司马义江·阿布都热西提，阿依努尔·阿木提

(新疆维吾尔自治区喀什地区药品检验所，新疆 喀什 844000)

西帕依固龈液是由新疆维吾尔族习用单味药材没食子经提取精制而成的漱口液，具有健齿固龈、清血止痛之功效，临床上用于牙周疾病的治疗。部颁标准仅采用定性鉴别试验来控制该制剂的质量。没食子酸是西帕依固龈液的主要有效成分之一，研究测定该成分含量的方法可以更好地反映和控制西帕依固龈液的内在质量。

1 仪器与试药

岛津高效液相色谱系统，包括LC 20AT型双泵，SIL 20AC型自动进样器，SPD-M 20A型PDA检测器;岛津uv-2450型紫外可见分光光度计;BP211D型分析天平(德国Sartorius公司)。没食子酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号为0831-9501);西帕依固龈液(新疆奇康哈博维药有限公司，批号分别为090401，100136，101018);甲醇为色谱纯(美国TEDIA试剂公司)，磷酸为分析纯(天津市永大化学试剂开发中心)，所有色谱用试剂均用0.45 gm微孔滤膜过滤;水为重蒸馏水;其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱:VP-ODS柱(250 mm×4.6 mm，5μm);流动相:甲醇-0.025%磷酸溶液(4∶96);流速:1 mL/min;检测波长:270 nm;柱温:25℃;进样量:10μL;分析方法:外标法[1]。取对照品溶液及供试品溶液，按上述色谱条件各进样10μL，同时采集270 nm光谱数据。结果供试品溶液色谱峰与对照品没食子酸一致，没食子酸对照品保留时间为16.2 min，理论板数大于5 000。高效液相色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液配制

精密称取没食子酸对照品，加流动相溶解制成0.106 0 g/L的溶液，作为对照品贮备液，精密量取该溶液5 mL，置50 mL量瓶中加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密吸取样品1 mL，置100 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度摇匀即得供试品溶液。微孔滤膜滤过，备用。

2.3 方法学考察

线性关系考察:精密量取对照品贮备液(0.106 0 g/L)1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 mL，置 10 mL 量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别取10μL，按2.1项下色谱条件操作，以6次测定的峰面积平均值考察线性范围。线性回归方程为 Y=2.4×104X-1.4 ×103，r=0.999 6(n=6)。结果表明，没食子酸质量浓度在10.6～106.0μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:精密量取对照品贮备液(0.106 0 g/L)5 mL，置50 mL量瓶中加流动相稀释至刻度，摇匀，取10μL，重复进样5次。结果峰面积的 RSD为0.42%(n=5)，表明方法有较高的精密度。

稳定性试验:取同一溶液，分别于 0，1，2，4，6 h 时进样，进样量为10μL，测定没食子酸的峰面积。结果的 RSD为1.24%。

重复性试验:取同一批号样品(批号为100136)，平行制备5份供试品溶液并依法测定。结果没食子酸含量的 RSD为0.89%。

加样回收试验:精密量取已知含量的样品(批号为090401，含量为34.94μg/mL)6份，各1.0 mL，分别置100 mL量瓶中，再分别加入对照品溶液 1.0，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 mL，加流动相稀释至刻度，进样测定，计算回收率。结果见表1。

表1 没食子酸加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取3批样品，依法制备供试品溶液，按拟订的色谱条件进样测定，按外标法计算没食子酸含量。结果批号分别为090401，100136，101018的样品中没食子酸含量分别为0.03494，0.03718，0.032 56 g/L。

3 讨论

取没食子酸对照品适量，用流动相溶解并稀释成0.1 g/L溶液，用紫外可见分光光度计于200～400 nm波长范围进行扫描，可见其在220，270 nm波长处有最大吸收，但在220 nm检测波长下，流动相中甲醇及样品中其他物质的紫外吸收干扰较大，基线不稳，故选择270 nm为检测波长。

采用文献[2]的方法试验，流动相用甲醇-水(5∶95)、水-乙酸(98∶2)、甲醇-0.5%冰醋酸(15∶85)，在该制剂中没食子酸的分离效果均不佳。考虑到没食子酸显酸性，故流动相的pH对没食子酸的分离影响较大，通过不断改变甲醇与磷酸水溶液的比例及流速，选定甲醇-0.025%磷酸水溶液(4∶96)及流速1mL/min比较合适，分离度好且保留时间适宜。

本试验测定了不同批号的西帕依固龈液，结果均能检出没食子酸，但含量有所差异。笔者通过试验研究，建立了测定西帕依固龈液中没食子酸含量的高效液相色谱法，取样量少，方法简单，重现性好，结果准确，可作为质量控制分析方法，为没食子酸的含量测定提供有效方法。

[1]WS3-BW-0123-98，卫生部药品标准·维吾尔药分册[S].

[2]徐小平，王 曙.HPLC测定4种藏药中没食子酸的含量[J].华西药学杂志，2003，18(6):448.