扁咽口服液生产过程中黄芩苷转移率的研究

李 翔，刘皈阳，马建丽，王晓青，高 磊，张清哲

(解放军总医院第一附属医院药剂药理科，北京 100037)

·药物分析·

扁咽口服液生产过程中黄芩苷转移率的研究

李 翔，刘皈阳，马建丽，王晓青，高 磊，张清哲

(解放军总医院第一附属医院药剂药理科，北京 100037)

目的建立高效液相色谱法测定扁咽口服液中黄芩苷的含量，对其在生产过程中的转移率进行评价。方法色谱柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18(4.6 mm × 150 mm，5 μm)；流动相：甲醇-0.5%冰醋酸溶液(45:55)；流速：1.0 ml/min；检测波长：277 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μl。结果黄芩苷浓度在1.064～106.4 μg/ml范围内与其峰面积线性关系良好(r=0.999 9)，平均回收率(n=6)为101.26%，RSD为1.92%。黄芩苷由药材到中间品及由中间品到成品的转移率分别为17.2%～19.0%和78.7%～79.4%。结论该方法快速、简便、准确，可用于扁咽口服液的质量控制和生产工艺评价。

扁咽口服液；黄芩苷；含量；转移率；高效液相色谱法

扁咽口服液是由黄芩、山豆根、连翘、穿心连、黄连、桔梗等多味中药采用现代制剂工艺制成，具有清热解毒，利咽生津，软坚散结的功效，主要用于急慢性咽炎、扁桃体炎的治疗。扁咽口服液作为本单位的医院制剂，长期的临床应用证明其具有良好的治疗作用。黄芩作为该制剂的主要组分之一，具有清热燥湿，泻火解毒的功能[1]。黄芩中的主要成分黄芩苷被证明具有抗菌、抗病毒等的多种作用，是扁咽口服液的重要指标性成分之一[2]。含量测定成分的转移率是中药、天然药物制备工艺研究中一项重要的指标。转移率的稳定程度是用于评价工艺的合理性，分析工艺可行性的重要内容。本研究以黄芩苷的含量为指标，对其在多批次扁咽口服液中的转移率进行评价，方法快速简便，结果准确可靠，可为扁咽口服液质量控制和生产工艺评价提供科学依据。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱仪(包括四元泵、VWD检测器、自动进样器、ChemStation化学工作站)，Mettler AE200电子天平；黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号715- 200111)；药材均由北京市鹤延龄中药饮片有限公司提供；扁咽口服液(解放军总医院第一附属医院，批号：110919，110926，111010)；甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯，水为重蒸水。

2 方法与结果

2.1溶液的制备

2.1.1对照品储备液 精密称取在60 ℃减压干燥4 h的黄芩苷对照品10.64 mg，置于100 ml量瓶中，用甲醇定容，摇匀，即得106.4 μg/ml的对照品储备液，置4 ℃冰箱保存。

2.1.2黄芩药材供试品溶液 按照中国药典2010年版一部黄芩项下的方法制备。

2.1.3扁咽口服液中间品和成品供试品溶液 按扁咽口服液处方组成与比例，分别称取黄芩40 g及其它药材，按生产工艺制成总体积为1 000 ml，得中间品(含黄芩0.04 μg/ml)。再加入适量壳聚糖，搅拌，静置，过滤，滤液加水至总体积为1 000 ml，得成品(含黄芩0.04 μg/ml)。精密量取中间品或成品1 ml，置于10 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。再精密量取1 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，0.45 μm滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.1.4阴性对照溶液 按处方比例及生产工艺制备缺黄芩的阴性对照样品，按“2.1.3”项下方法制成阴性对照溶液。

2.2色谱条件 色谱柱为Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18(4.6 mm × 150 mm，5 μm)；流动相为甲醇-0.5%冰醋酸溶液(45:55)；流速为1.0 ml/min；检测波长为277 nm；柱温为30 ℃；进样量为10 μl。在此条件下，黄芩苷与样品中其他色谱峰分离良好，保留时间约为7 min，理论塔板数按黄芩苷峰计算不低于4 000。

2.3专属性试验 取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液，按“2.2” 项下色谱条件测定，记录色谱图。结果显示，阴性对照对黄芩苷的测定无干扰。见图1。

图1 对照品及样品HPLC色谱图

2.4线性关系考察 精密吸取黄芩苷对照品溶液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 ml，置于10 ml容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，即得系列对照品溶液。将系列对照品溶液与储备液依次进样10 μl，记录黄芩苷峰面积。以黄芩苷浓度(μg/ml)为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，得回归方程为Y=31.09X+0.123 1(r=0.999 9，n=6)。结果表明，黄芩苷在1.064～106.4 μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.5精密度试验 取浓度为10.64 μg/ml的对照品溶液，连续进样6次测定。结果黄芩苷峰面积RSD为0.16%(n=6)，表明仪器的精密度良好。

2.6稳定性试验 取同一批号(批号：110919)扁咽口服液成品供试品溶液，在0、2、4、8、12、24 h分别进样测定。结果黄芩苷峰面积RSD为1.06%(n=6)，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好

2.7重复性试验 取同一批号(批号：110919)扁咽口服液成品样品6份，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，分别进样测定。结果黄芩苷的平均含量为674.9 μg/ml，RSD为1.36%(n=6)，表明方法的重现性良好。

2.8回收率试验 精密量取已知含量(674.9 g/ml)的同一批号(批号：110919)扁咽口服液样品6份，精密加入适量黄芩苷对照品溶液，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，分别进样测定，计算回收率。结果平均回收率为101.26%，RSD为1.92%(n=6)，表明方法的回收率良好。

2.9样品含量测定 按“2.1.3”项下方法，制备3批扁咽口服液供试品溶液，每批制备3份，分别进样测定，计算各批次中间品和成品中黄芩苷占黄芩药材(相当于口服液0.04 g/ml)的质量比含量(mg/g)和转移率(%)，结果见表1。

表1 样品含量测定结果及转移率(n=3)

转移率(%)=黄芩苷实测含量/溶液理论含量×100%

3 讨论

3.1采用HPLC法测定黄芩苷含量的报道较多，以甲醇-水-磷酸的流动相体系较为多见[3～5]。经本研究比较发现，采用甲醇-水-冰醋酸作为流动相体系，可以降低磷酸引起的基线波动，较好完成黄芩药材、扁咽口服液中间品和成品中黄芩苷的检测。另外，通过比较2%、1%和0.5%等不同浓度冰醋酸对分离的影响，发现0.5%冰醋酸即能取得满意的分离效果。

3.2中药制剂在生产中按照既定的工艺进行制备，药材中成分的转移率一般较为固定。从测定结果可以看出，黄芩苷在黄芩药材制成中间品的过程中转移率为17.2%～19.0%，从中间品到成品过程中，由于添加了壳聚糖进行澄清处理，造成黄芩苷的进一步损失，但其转移率也能够达到78.7%～79.4%。由此可以判定，尽管黄芩苷的转移率较低，但其波动范围不大，说明扁咽口服液的生产工艺是稳定适用的。

3.3尽管黄芩苷在扁咽口服液的生产过程中转移率较为稳定，但从药效成分的角度评价则相对偏低。因此，根据黄芩苷的化学性质，可以采用其他适宜的提取溶剂，提高黄芩苷的转移率和含量，可以考虑将扁咽口服液开发成药效更好、用量更小、使用更方便的颗粒剂的新剂型。

[1] 中国药典2010年版. 一部[S]. 2010: 283.

[2] 雷 芳. 黄芩苷药理作用研究进展[J]. 中国药业, 2010, 19(15): 87.

[3] 李玲玲, 赵兰芬. 清开灵不同制剂中黄芩苷的含量测定[J]. 药物分析杂志, 2011, 31(5): 950.

[4] 宋宗华, 王 鹏, 陈晓辉, 等. 中药黄芩和一清颗粒中黄芩苷 HPLC定量分析方法学验证参数限度考察[J]. 药物分析杂志, 2010, 30(6): 1140.

[5] 张 捷, 谭生建, 王 欢, 等. 高效液相色谱法测定小儿润肺止咳口服液中橙皮苷和黄芩苷的含量[J]. 药物分析杂志, 2010, 30(8): 1451.

ResearchonthetransferrateofbaicalininpreparationofBianyanoralsolution

LI Xiang, LIU Gui-yang, AM Jian-li, WANG Xiao-qing, GAO Lei, ZHANG Qin-zhe

(Department of Pharmacy, First Affiliated Hospital, General Hospital of PLA, Beijing 100037, China)

ObjectiveTo establish the HPLC method for determination of baicalin in Bianyan oral solution, and evaluate the transfer rate in process of production.MethodsThe Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18(4.6 mm × 150 mm, 5 μm) was used, the mobile phase consisted of methanol-0.5% acetic acid (45:55) , the flow rate was 1.0 ml/min, the detection wavelength was at 277 nm, the column temperature was at 30 ℃, the inject volume was 10 μl.ResultsA good linear correlation of baicalin was observed within the range of 1.064 ～ 106.4 μg/ml (r=0.999 9). The average recovery was 101.26% with RSD 1.92% (n=6). The transfer rates from Radix Scutellariae to intermediate sample and to Bianyan oral solution were 17.2%～19.0% and 78.7%～79.4%.ConclusionsThe method was rapid, simple and accurate, which could be used for the quality control and processing technique evaluation of Bianyan oral solution.

Bianyan oral solution; baicalin; contents; transfer rate; HPLC

李 翔(1976-)，男，主管药师.Tel: (010)66867401，E-mail:lxbj@hotmail.com.

刘皈阳.Tel: (010)66867081，E-mail:liuguiy@gmail.com.

R917

A

1006-0111(2012)04-0289-03

10.3969/j.issn.1006-0111.2012.04.012

2012-01-03

2012-04-05