中药金樱子叶的化学成分研究

吴建林，王 平，高 鹏，曾 娜，刘香芳，王书一，沈 阳，徐超斗

(1.山东中医药大学，山东 济南 250355 ；2.北京同仁堂药材公司，北京 100035；3.上海市儿童医院，上海 201203；4.总后勤部卫生部药品仪器检验所, 北京100071)

中药金樱子叶的化学成分研究

吴建林1，王 平2，高 鹏1，曾 娜3，刘香芳3，王书一3，沈 阳3，徐超斗4

(1.山东中医药大学，山东 济南 250355 ；2.北京同仁堂药材公司，北京 100035；3.上海市儿童医院，上海 201203；4.总后勤部卫生部药品仪器检验所, 北京100071)

目的研究金樱子RosaLaevigataMichx.嫩叶的化学成分。方法运用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱(Sephadex LH-20)以及半制备高效液相色谱等多种现代色谱技术进行分离纯化，根据理化性质和波谱分析鉴定化合物结构。结果从金樱子叶的70%乙醇提取物乙酸乙酯部位分离鉴定得到12个化合物，分别为儿茶素(1)、槲皮素(2)、柚皮素(3)、山柰酚(4)、没食子酸乙酯(5)、对羟基肉桂酸乙酯(6)、ω-hydroxypropioquaiacone (7)、3，4-二羟基苯乙醇(8)、邻羟基苯甲酸(9)、莨菪亭(10)、乙基-α-D-呋喃阿拉伯糖苷(11)、甲基-O-β-D-葡萄糖苷(12)。结论化合物11为首次从蔷薇属植物中分离得到，化合物3、5～9为首次从金樱子叶中分离得到。

金樱子叶；化学成分；提取分离；结构鉴定

金樱子叶为蔷薇科蔷薇属植物金樱子RosalaevigataMichx.的嫩叶，性平味辛，主治痈肿、溃疡、金疮、汤火伤等。《闽东本草》中记载“治汤火伤：金樱叶焙干为末，调麻油涂患处，欲愈时加入鳖甲末。”民间常用此法治疗烧烫伤。文献报道金樱子叶70%乙醇提取物能明显促进SD大鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合，并从中分离出一系列三萜类化合物[1]。为进一步探索金樱子叶治疗烧烫伤的活性成分，本研究对采自安徽黄山的金樱子叶进行了系统的化学成分分析，从中分离鉴定得到12个化合物，分别为儿茶素(1)、槲皮素(2)、柚皮素(3)、山柰酚(4)、没食子酸乙酯(5)、对羟基肉桂酸乙酯(6)、ω-hydroxypropioquaiacone(7)、3，4-二羟基苯乙醇(8)、邻羟基苯甲酸(9)、莨菪亭(10)、乙基-α-D-呋喃阿拉伯糖苷(11)、甲基-O-β-D-葡萄糖苷(12)。化合物11为首次从蔷薇属植物中分离得到，化合物3、5～9为首次从金樱子叶中分离得到。

1 仪器与材料

1.1仪器与试剂 SGW X-4 显微熔点仪(温度计未校正，上海精密科学仪器有限公司)； MAT-212 质谱仪(ES-MS)；Q-Tof-micro 质谱仪(ESI-MS)； Bruker AC-400，AC-500 型核磁共振仪；JY6001 电子天平(上海恒平科学仪器有限公司)；BSZ-100 部分收集器(上海青浦沪西仪器厂)；WFH-201B紫外投射反射仪(上海精科实业有限公司)；柱色谱硅胶(200～300目和300～400目)、HSGF254硅胶薄层层析硅胶板(20 cm×20 cm)，均为烟台市芝罘黄务硅胶开发试验设计厂；Sephadex LH-20(安发玛西亚生物技术(上海)有限公司，Merck 公司)；HPLC：仪器 Waters 1525 泵，PDA 2996 检测器(Waters 公司)；反相柱(SunFire Prep C18250×10 mm，5μm)。

1.2材料 药材经第二军医大学药学院生药教研室李红方老师鉴定为金樱子Rosa Laevigata Michx.的嫩叶。

图1 化合物1～12的结构

1.3提取与分离 取金樱子干燥嫩叶(10 kg)，用70%乙醇水溶液渗滤提取10 d，减压浓缩乙醇提取液得到水溶液2 kg。用水混悬后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇等体积萃取，萃取液浓缩分别得到A(35 g)，B(100 g)，C(65 g)三部分。B部分经硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，得到6个组分(Fr. 1～Fr. 6)。Fr. 2再经凝胶柱色谱、硅胶柱色谱和半制备高效液相等色谱技术反复分离，得到化合物2(20 mg)，3(20 mg)，4(80 mg)，5(20 mg)，6(20 mg)，7(20 mg)，9(20 mg)，10(10 mg)，11(15 mg)。Fr. 4再经凝胶柱色谱、硅胶柱色谱、薄层制备和重结晶等技术反复分离，得到化合物1(200 mg)，8(40 mg)，12(15 mg)。

2 结构鉴定

2.1化合物1 白色无定型粉末(甲醇)，mp：94 ～ 95 ℃。12%硫酸香草醛显色为鲜艳的红色。ESI-MS给出准分子离子峰m/z：313 [M + Na]+。1H-NMR(400 MHz, CD3OD)：δppm：6.83(1H, d,J=1.8 Hz, H-2′)，6.76(1H, d,J=8.1 Hz, H-5′)，6.72(1H, d,J=8.1, 1.8 Hz, H-6′)，5.92(1H, d,J=2.28 Hz, H-6)，5.85(1H, d,J=2.27 Hz, H-8)，4.56(1H, d,J=7.49 Hz, H-2)，3.98(1H, m, H-3)，2.77(1H, dd,J=5.44, 16.1 Hz, H-4a)，2.50(1H, dd,J=8.13, 16.1 Hz, H-4b)。13C-NMR(100 MHz, CD3OD)：δppm：83.1(C-2)，69.1(C-3)，28.8(C-4)，158.1(C-5)，96.6(C-6)，157.8(C-7)，95.8(C-8)，157.2(C-9)，101.1(C-10)，132.5(C-1′)，116.4(C-2′)，146.5(C-3′, 4′)，115.5(C-5′)，120.3(C-6′)。以上光谱数据与文献报道[2]儿茶素的数据基本一致，故鉴定化合物1为儿茶素。

2.2化合物2 黄色无定型粉末(甲醇)，mp：298 ～ 299 ℃。ESI-MS给出准分子离子峰m/z：301 [M- H]+。1H-NMR(500 MHz, pyridine-d5)：δppm：13.40(1H, br.s, 5-OH)，12.13(3H, br.s, 7, 3, 3′, 4′-OH)，8.69(1H, s, H-2′)，8.19(1H, d,J=7 Hz, H-6′)，7.46(1H, d,J=8.5 Hz, H-5′)，6.83(1H, s, H-8)，6.79(1H, s, H-6)。13C-NMR(125 MHz, pyridine-d5)：δppm：147.8(C-2)，138.0(C-3)，177.4(C-4)，157.5(C-5)，99.3(C-6)，165.6(C-7)，94.4(C-8)，162.5(C-9)，104.6(C-10)，121.1(C-1′, 6′)，147.2(C-3′)，116.8(C-2′, 5′)。以上光谱数据与文献报道[3]槲皮素的数据基本一致，故鉴定化合物2为槲皮素。

2.3化合物3 白色无定型粉末(甲醇)，mp：246 ～ 249℃。ESI-MS给出准分子离子峰m/z：271[M -H]+。1H-NMR(500 MHz, pyridine-d5)：δppm：7.61(2H, d,J=8.5 Hz, H-2′, 6′)，7.29(2H, d,J=9 Hz, H-3′, 5′)，6.56(1H, d,J=2 Hz, H-8)，6.47(1H, d,J=2 Hz, H-6)，5.56(1H, dd,J=3, 13 Hz, H-2)，3.35(1H, dd,J=13, 17 Hz, H-3b), 2.95(1H, dd,J=3, 17 Hz, H-3a)。13C-NMR(125 MHz, pyridine-d5)：δppm：79.8(C-2)，43.5(C-3)，196.5(C-4)，165.3(C-5)，97.4(C-6)，169.0(C-7)，96.4(C-8)，164.2(C-9)，102.9(C-10)，129.9(C-1′)，128.9(C-2′, 6′)，159.7(C-4′)，116.6(C-3′, 5′)。以上光谱数据与文献报道[4]柚皮素的数据基本一致，故鉴定化合物3为柚皮素。

2.4化合物4 黄色无定型粉末(甲醇)，mp：294 ～ 296 ℃。1H-NMR(400 MHz, pyridine-d5)：δppm：13.4(1H, br.s, 5-OH)，12.5(2H, br.s, 7, 4′-OH)，8.63(2H, d,J=8.74 Hz, H-2′, 6′)，7.38(2H, d,J=8.74 Hz, H-3′, 5′)，6.92(1H, d,J=1.7 Hz, H-8)，6.83(1H, d,J=1.7 Hz, H-6)。13C-NMR(100 MHz, pyridine-d5)：δppm：147.6(C-2)，137.9(C-3)，177.5(C-4)，162.6(C-5)，99.4(C-6)，165.7(C-7)，94.5(C-8)，160.8(C-9)，104.6(C-10)，123.1(C-1′)，157.6(C-4′)，130.6(C-2′, 6′)，116.5(C-3′, 5′)。以上光谱数据与文献报道[5]山柰酚的数据基本一致，故鉴定化合物4为山柰酚。

2.5化合物5 无色针晶(甲醇)，mp：153 ～ 155 ℃。ESI-MS给出准分子离子峰m/z：221 [M + Na]+。1H-NMR(500 MHz, pyridine-d5)：δppm：7.92(2H, s, H-2, 6)，4.34(2H, q,J=7 Hz, H-2′)，1.25(3H, t,J=7 Hz, H-3′)。13C-NMR(125 MHz, pyridine-d5)：δppm：121.6(C-1)，110.3(C-2, 6)，141.2(C-4)，147.8(C-3, 5)，167.4(C-1′, C=O)，60.5(C-2′)，14.5(C-3′)。以上光谱数据与文献报道[6]没食子酸乙酯的数据基本一致，故鉴定化合物5为没食子酸乙酯。

2.6化合物6 无色针晶(甲醇)。ESI-MS给出准分子离子峰m/z：215 [M + Na]+。1H-NMR(500 MHz, pyridine-d5)：δppm：8.02(1H, d,J=16 Hz, H-7)，7.68(2H, d,J=8.5 Hz, H-2, 6)，7.24(2H, d,J=8.5 Hz, H-3, 5)，6.67(1H, d,J=16 Hz, H-8)，4.34(2H, q,J=7 Hz, H-1′)，1.29(3H, t,J=7 Hz, H-2′)。13C-NMR(125 MHz, pyridine-d5)：δppm：126.2(C-1)，130.8(C-2, 6)，117.0(C-3, 5)，161.6(C-4)，145.2(C-7)，115.4(C-8)，167.5(C-9)，60.3(C-1′)，14.6(C-2′)。以上光谱数据与文献报道[7]对羟基肉桂酸乙酯的数据基本一致，故鉴定化合物6为对羟基肉桂酸乙酯。

2.7化合物7 无色粘稠状物质(甲醇)。ESI-MS给出准分子离子峰m/z：219 [M + Na]+。1H-NMR(500 MHz, CD3OD)：δppm：7.55(1H, dd,J=2, 10 Hz, H-6′)，7.52(1H, s, H-2′)，6.85(1H, d,J=10 Hz, H-5′)，3.93(2H, t,J=5 Hz, H-3)，3.14(2H, t,J=5 Hz, H-2)，3.88(3H, s, OMe)。在NOESY谱中，可观察到δH3.88(OMe)与7.52(1H, s, H-2′)有相关，6.85(1H, d,J=10 Hz, H-5′)与7.55(1H, dd,J=5, 10 Hz, H-6′)有相关，推断甲氧基是在3′位上取代。13C-NMR(125 MHz, CD3OD)：δppm：200.0(C-1)，41.9(C-2)，59.2(C-3)，130.9(C-1′)，112.1(C-2′)，153.6(C-3′)，149.3(C-4′)，116.1(C-5′)，125.0(C-6′)，56.7(OMe)。以上光谱数据与文献报道[8]ω-Hydroxypropioquaiacone的数据基本一致，故鉴定化合物7为ω-hydroxypropioquaiacone。

2.8化合物8 白色无定型粉末(甲醇)。1H-NMR(400 MHz, CD3OD)：δppm：6.67(1H, d,J=8 Hz, H-5)，6.64(1H, d,J=1.9 Hz, H-2)，6.52(1H, dd,J=8, 2 Hz, H-6)，3.67(2H, t,J=7 Hz, H-8)，2.66(2H, t,J=7 Hz, H-7)。13C-NMR(100 MHz, CD3OD)：δppm：132.1(C-1)，116.6(C-2)，146.4(C-3)，144.9(C-4)，117.4(C-5)，121.5(C-6)，39.9(C-7)，64.8(C-8)。以上光谱数据与文献报道[9]3，4-二羟基苯乙醇的数据基本一致，故鉴定化合物8为3，4-二羟基苯乙醇。

2.9化合物9 黄色针晶(甲醇)，mp：161 ～ 162 ℃。ESI-MS给出准分子离子峰m/z：137.0[M - H]+。1H-NMR(400 MHz, CDCl3)：δppm：10.3(1H, br.s)，7.95(1H, dd,J=1.4, 7.9 Hz, H-6)，7.53(1H, m, H-4)，7.03(1H, dd,J=0.49, 8.4 Hz, H-5)，6.94(1H, m, H-3)。13C-NMR(100 MHz, CDCl3)：δppm：111.3(C-1)，162.2(C-2)，117.8(C-3)，137.0(C-4)，119.6(C-5)，130.9(C-6)，174.9(C=O)。以上光谱数据与文献报道[10]邻羟基苯甲酸的数据基本一致，故鉴定化合物9为邻羟基苯甲酸。

2.10化合物10 黄色晶体(甲醇)，mp：203 ～ 204 ℃。紫外灯下显强烈蓝色荧光。ESI-MS给出准分子离子峰m/z：191 [M-H]+。1H-NMR(500 MHz, pyridine-d5)：δppm：6.38(1H, d,J=10 Hz, H-3)，7.77(1H, d,J=10 Hz, H-4)，7.13(1H, s, H-5)，7.20(1H, s, H-8)，3.85(OMe)。在NOESY谱中，可观察到δH3.85(OMe)与7.13(1H, s, H-5)有相关，7.13(1H, s, H-5)与7.77(1H, d,J=10 Hz, H-4)有相关，推断甲氧基取代在6位上。13C-NMR(100 MHz, pyridine-d5)：δppm：161.6(C-2)，112.5(C-3)，144.2(C-4)，109.7(C-5)，151.2(C-6)，146.4(C-7)，104.2(C-8)，153.1(C-9)，111.3(C-10)。以上光谱数据与文献报道[11]莨菪亭的数据基本一致，故鉴定化合物10为莨菪亭。

2.11化合物11 无色油状物(甲醇)，Molish反应呈阳性。ESI-MS (m/z)：201 [M + Na]+。1H-NMR(500 MHz, CD3OD)：δppm：4.86(1H, s, H-1)，1.20(3H, t,J=5 Hz, H-7)。13C-NMR(125 MHz, CD3OD)：δppm：109.5(C-1)，85.5(C-2)，83.8(C-3)，78.9(C-4)，64.5(C-5)，63.3(C-6)，15.7(C-7)。以上光谱数据与文献报道[12]乙基α-D-呋喃阿拉伯糖苷的数据基本一致，故鉴定化合物11为乙基α-D-呋喃阿拉伯糖苷。

2.12化合物12 无色方晶(甲醇)，mp：106 ～ 108 ℃，Molish反应呈阳性。ESI-MS (m/z)：217[M + Na]+。1H-NMR(500 MHz, DMSO)：δppm：4.02(1H, d,J=7.5 Hz, H-1)，3.37(OMe)。13C-NMR(125 MHz, DMSO)：δppm：103.9(C-1)，73.4(C-2)，76.7(C-3)，70.1(C-4)，76.8(C-5)，61.1(C-6)，56.0(OMe)。以上光谱数据与文献报道13]甲基-O-β-D-葡萄糖苷的数据基本一致，故鉴定化合物12为甲基-O-β-D-葡萄糖苷。

3 讨论

金樱子叶作为一种治疗烧烫伤的草药，在民间广泛应用。但迄今为止，对金樱子叶的化学成分研究报道较少。作者对金樱子叶70%乙醇提取物进行了化学成分的系统分离，鉴定了12个化合物。化合物11为首次从蔷薇属植物中分离得到，化合物3、5～9为首次从金樱子叶中分离得到。化合物1～9为多酚类化合物，文献报道[14]植物多酚对多种细菌、真菌、酵母菌都有明显的抑制作用，这可能为金樱子叶治疗烧烫伤提供了作用依据。

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StudiesonthechemicalconstituentsinleavesofRosaLaevigataMichx

WU Jian-lin1，WANG Ping2，GAO Peng1，ZENG Na3，LIU Xiang-fang3，WANG Sui-yi3，SHEN Yang3，XU Chao-dou4

(1.Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250355, China；2.Beijing Tongrentang Herbal Medicine Company, Beijing 100035, China; 3. Shanghai Children′s Hospital, Shanghai 200040, China; 4. Institute For Drug and Instrument Control of PLA, Beijing 100071 China)

ObjectiveTo investigate the chemical constituents from leaves ofRosaLaevigataMichx.MethodsThe chemical constituents were isolated and purificated by silica gel column chromatography, Sephadex LH-20 and semi-preparative RP-HPLC. Their structures were identified by spectral data together with physicochemical analysis.ResultsTwelve known compounds were isolated and identified as catechin (1)，quercetin (2)，naringenin (3)，kaempferol(4)，ethyl gallate(5)，p-hydroxyl ethyl cinnamate(6)，ω-hydroxypropioquaiacone(7)， hydroxytyrosol(8)，o-hydroxybenzoic acid(9)，scopoletin(10)，ethyl α-D-arabinofuranoside(11)，methyl β-D-glucopyranoside(12).ConclusionCompound 11 was isolated from genus Rosa for the first time, compounds 3, 5～9 were isolated from leaves ofRosaLaevigataMichx for the first time.

Leaves ofRosaLaevigataMichx;chemical constituents; isolation; structure identification

吴建林(1976-)，男，中医学博士.

沈 阳.E-mail:shenyang@medmail.com.cn；徐超斗.E-mail:leisstar@126.com.

R284.1

A

1006-0111(2012)04-0275-04

10.3969/j.issn.1006-0111.2012.04.008

2012-03-15

2012-06-10