不同等级白芍药材中芍药苷含量的分析

胡正余，徐以亮

(江阴天江药业有限公司,江苏 江阴 214434)

*

徐以亮，Tel：(0510)86408091，E-mail：xyl009@126.com

不同等级白芍药材中芍药苷含量的分析

胡正余，徐以亮*

(江阴天江药业有限公司,江苏 江阴 214434)

目的测定不同等级白芍中芍药苷的含量。方法采用反相HPLC法，色谱柱：Kromasil C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86)；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：230 nm。结果芍药苷进样量在0.201 6～1.008 μg线性关系良好(r=0.999 9)，平均回收率为97.36%(RSD=1.27%)。19批样品测定结果表明，一等品中芍药苷的含量在2.88%～3.54%，二等品中芍药苷的含量在2.46%～2.78%，三等品中芍药苷的含量在2.04%～2.32%，四等品中芍药苷的含量在1.34%～1.97%。结论白芍现有的划分等级的方法较好地体现了白芍的质量差异，为白芍的临床使用和制药企业选择原料提供了依据。

白芍；芍药苷；HPLC；含量测定

白芍[1]为毛茛科植物芍药PaeonialactitloraPall.的根经过水煮去皮的干燥品，性微寒，具有养血调经，敛阴止汗，柔肝止痛，平抑肝阳的功能，用于血虚萎黄，月经不调，自汗，盗汗，胁痛，腹痛，四肢挛痛，头痛眩晕。白芍中含有芍药苷、牡丹酚、芍药花苷、芍药内酯以及挥发油和三萜类等化学成分，其中芍药苷为其主要药效成分，具有镇静、解痉、抗炎、抗应激性溃疡等多方面的作用[2]，是白芍质量评价的指标成分。白芍主产浙江、安徽、四川等地，分别被称为杭白芍、毫白芍以及川白芍。在长期实践中，人们根据药材传统外观、规格，将白芍划分为杭白芍1～7等、白芍1～4等进行销售。笔者以芍药苷为指标，参考《中国药典》2010版一部白芍【含量测定】项下相关规定，采用HPLC法对4个等级白芍样品[3]的芍药苷含量进行考察，为白芍的质量评价及临床用药提供参考依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent12000高效液相色谱仪、Agilent-G1311A四元泵、Agilent-G1322A真空脱气器、Agilent-G1314B可变波长检测器、CHEMSTATION B.04.01化学工作站(美国安捷伦公司)；超声清洗机(无锡超声电子设备厂)；电子天平(瑞士Mettler公司)；KQ-250B型超声波清洗器(昆山市超声波仪器公司)；SD101-2电热鼓风干燥箱(南通金石实验仪器有限公司)。

1.2 试药

芍药苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110736-200527，供含量测定用)；乙腈为色谱纯(上海凌峰化学试剂有限公司)，水为重蒸水，其余试剂为分析纯。

白芍样品产自安徽亳州，按照现行标准划分为：一等1～4号，二等1～6号，三等1～5号，四等1～4号(一等：长8 cm以上，中部直径1.7 cm以上，无芦头、花麻点、破皮、裂口、夹生；二等：长6 cm以上，中部直径1.3 cm以上，间有花麻点；三等：长4 cm以上，中部直径8 mm以上，间有花麻点；四等：长短粗细不分，间有夹生、破条、花麻点、头尾、碎节或未去净栓皮)。以上白芍药材经江阴天江药业有限公司唐波执业药师鉴定为毛茛科植物芍药PaeonialactitloraPall.的去外皮干燥根。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Kromasil C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-0.1% 磷酸溶液(14∶86)；柱温：30 ℃；检测波长：230 nm；理论塔板数按芍药苷计算应不低于1 000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取经五氧化二磷减压干燥器中干燥36 h的芍药苷对照品适量，加甲醇制成1 mL含芍药苷100.8 μg的溶液，摇匀，即得。HPLC图见图1。

2.3 供试品溶液的制备

本品切片干燥，取适量打粉，称取约0.1 g，精密称定，置50 mL量瓶中，加稀乙醇35 mL，超声处理(功率240 W，频率45 kHz)30 min，放冷，加稀乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，过微孔滤膜(0.45 μm)，即得。HPLC图见图2。

图1 芍药苷对照品HPLC图

图2 白芍药材HPLC图

2.4 线性关系考察

分别精密吸取芍药苷对照品溶液(100.8 μg·mL-1)2，4，6，8 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成浓度分别为20.16,40.32,60.48,80.64 μg·mL-1的系列对照品溶液。分别精密吸取上述不同浓度的对照品溶液各10 μL，按上述色谱条件进样，以芍药苷峰面积积分值为纵坐标(Y)，芍药苷进样浓度为横坐标(X)，计算得回归方程Y=12.057X-5.45，r=0.999 9。结果表明芍药苷进样量在0.201 6～1.008 μg进样浓度与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.5 精密度考察

精密吸取芍药苷对照品溶液(100.8 μg·mL-1)5 μL，注入液相色谱仪分析，测定峰面积积分值，重复6次，计算其RSD=0.99%。结果表明精密度良好。

2.6 重复性试验

精密称取白芍药材(二等1号样品)0.1 g，6份，按供试品溶液的制备方法制成供试液，分别进样10 μL，测定。结果表明白芍药材(二等1号样品)中芍药苷的平均含量为2.54%，RSD=1.27%。

2.7 稳定性试验

取白芍二等1号样品的供试品溶液，于0，1，2，4，6，8 h分别进样10 μL，测定样品中芍药苷峰面积积分值，计算其RSD=1.14%。结果表明供试品溶液在8 h内稳定。

2.8 回收率试验

取已知含量的样品(白芍二等1号样品)0.05 g，精密称定，分别加入芍药苷对照品适量，按正文供试品溶液制备方法和色谱条件，制备加样回收供试品溶液，分别进样10 μL，注入液相色谱仪，测定。结果平均加样回收率为97.36%，RSD=1.34%(n=6)，结果见表1。

2.9 样品测定

分别取各样品约0.1 g，精密称定，按供试品溶液制备方法分别制成供试品溶液，分别进样10 μL，测定，计算含量，结果见表2。

表1 芍药苷加样回收率试验

表2 样品测定结果 /%

3 结果与讨论

不同等级的19批样品测定结果表明，一等品中芍药苷的含量在2.88%～3.54%，二等品中芍药苷的含量在2.46%～2.78%，三等品中芍药苷的含量在2.04%～2.32%，四等品中芍药苷的含量在1.34%～1.97%。以芍药苷的含量为指标，现有的规格等级划分方法能较好地体现了白芍的质量差异，为白芍药材的原料采购及制剂生产和临床使用提供了依据。

以上测定所用白芍样品均为4年生当年采收产白芍，且均为亳州产。白芍为药材中的大宗商品，库存量较大，在产量高时，入库封存量较大，有的贮存期较长，在存放过程中，芍药苷可能会降低。贮藏时间对白芍中芍药苷含量的影响没见报道，有待进一步研究。

[1] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：96-97.

[2] 吴菡子，熊南山．白芍的药理研究与临床应用[J]．中国医院药学杂志，1998，18(4)：172-173．

[3] 徐国钧.中国药材学[M].北京：中国医药科技出版社，1996：178-179.

DeterminationofPaeoniflorininPaeoniaeRadixAlbaofDifferentGradesbyHPLC

HU Zheng-yu， XU Yi-liang

(JiangyinTianjiangPharmaceuticalCo.,Ltd,Jiangyin214434，China)

Objective:To established a method for the determination of paeoniflorin in Paeoniae Radix Alba.MethodsRP-HPLC method was on Kromasil C18column (150 mm×4.6 mm, 5μm), with acetonitrile-0.1% phosphoric acid (14∶86) as mobile phase and detection wavelength at 230 nm. The flow rate was 1.0 mL·min-1and column temperature was 25 ℃.ResultsThe calibration curves of paeoniflorin were in good linearity at the range of 0.201 6～1.008 μg (r=0.999 9). The average recovery was 97.36% (n=6, RSD=1.27%). The results from 19 samples showed that the content of paeoniflorin was between 2.88% to 3.54% in first rank sample, 2.46% to 2.78% in second rank sample, 2.04% to 2.32% in third rank sample, 1.34% to 1.97% in fourth rank sample, respectively.ConclusionThe classification properly reflects the quality of Paeoniae Radix Alba according to content of paeoniflorin, and provides quality information for clinical use.

Paeoniae Radix Alba;Paeoniflorin; HPLC;Determination

2012-05-23)