大青龙汤对脂多糖致发热大鼠的解热作用研究△

邹甜，田连起，叶晓川，张秀桥，周爱军，刘焱文*

(1.湖北中医药大学 中药资源与中药复方教育部重点实验室，湖北 武汉 430061；2.东莞市沙田医院，广东 东莞 523981)

东莞市科技局项目(东科[2010]111号)

*

周爱军，E-mail：dgzhouaijun@163.com；刘焱文，E-mail：ywliu2008@163.com

大青龙汤对脂多糖致发热大鼠的解热作用研究△

邹甜1，田连起1，叶晓川1，张秀桥1，周爱军2*，刘焱文1*

(1.湖北中医药大学 中药资源与中药复方教育部重点实验室，湖北 武汉 430061；2.东莞市沙田医院，广东 东莞 523981)

目的研究大青龙汤退烧解热活性物质。方法采用内毒素致大鼠发热模型,观察大青龙汤不同化学物质部位解热作用的效果。结果大青龙汤全方水煎剂及其多糖物质部位和生物碱提取物均对内毒素引起的大鼠体温升高有明显的抑制作用，在给药3 h后就有较强的解热作用，于3，4，6，7 h均与模型对照组比较差异有统计学意义，其解热作用与阿司匹林相当。结论大青龙汤解热效果显著，其解热的主要物质部位为生物碱提取物、多糖、挥发油及石膏。

大青龙汤；脂多糖；解热；物质部位

“大青龙汤”为我国医圣张仲景所著《伤寒论》的经典方剂，由麻黄、桂枝、炙甘草、杏仁、石膏、生姜、大枣7味组方，具有发汗解表，清热除烦之功效；临床用于外感风寒，表实无汗，兼有里热之症等病患[1]。该方剂历经两千余年的临床实践，疗效确切。东莞市沙田镇医院周爱军主治医师近年采用“大青龙汤”加减方临床治疗流感患者数百例，效果显著；特别针对高烧患者，退热效果优于同类中西药物。本实验室前期将大青龙汤复方视为整体，按方中各药所含化学成分的理化性质分类，将其分为挥发油、生物碱、酚酸类、苷类、多糖和水溶性成分等不同有效组分，对其抗流感病毒的有效物质部位进行筛选研究。为了进一步阐释大青龙汤的药效物质基础，本论文通过建立SD大鼠发热模型，视大青龙汤为整体，对方中植物药不同有效组分进行了解热的药理学研究。

1 材料

1.1 药物

1.1.1 各味饮片 大青龙汤中麻黄、桂枝、炙甘草、石膏、杏仁、生姜、大枣7味药均购自湖北金贵中药饮片有限公司，并经本实验室张秀桥教授鉴定为正品。麻黄为麻黄科植物草麻黄EphedrasinicaStapf.的干燥草质茎，桂枝为樟科植物肉桂CinnamomumcassiaPresl.的干燥嫩枝，杏仁为蔷薇科植物山杏Prunusarm-eniacaL.var.ansu Maxim.的干燥成熟种子，甘草为豆科植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch.的干燥根及根茎，生姜为姜科植物姜ZingiberofficinaleRosc.的干燥根茎，石膏为硫酸类矿物石膏族石膏。

1.1.2 供试药液的制备

1.1.2.1 大青龙汤全方供试液的制备 7味中药用自来水浸泡40 min，加水煎煮两遍。合并两次煎液，过滤浓缩。

1.1.2.2 大青龙汤不同有效部位供试液的制备 按大青龙汤方中各药配伍剂量比例，分别称取麻黄、桂枝、甘草、杏仁、生姜、大枣适量。取桂枝和冷冻干燥后的生姜，粉碎，超临界二氧化碳萃取得到超临界CO2萃取物[2]；桂枝、生姜二药经超临界二氧化碳萃取后的药渣与方中其他植物药混合，用70%乙醇回流提取两次，合并滤液，回收乙醇至适量，药液用石油醚脱脂，将石油醚萃取后的残液碱化，用三氯甲烷萃取5次，合并三氯甲烷萃取液，回收三氯甲烷得到生物碱；将三氯甲烷萃取后的残液酸化，用乙酸乙酯萃取5次，合并萃取液，回收乙酸乙酯得到酚酸类化合物；将乙酸乙酯萃取后的残液用正丁醇萃取5次，合并萃取液，减压回收正丁醇得到苷类化合物；取前述经70%乙醇回流提取方中植物药所剩药渣，加水煎煮两次，合并煎液，浓缩，加无水乙醇至80%醇度，放置过夜，滤出沉淀为多糖。

1.2 试剂

脂多糖(Escherichia il，O55：B5, L2880,Sigma公司)。脂多糖(LPS)注射液的制备：无菌条件下，用0.9%氯化钠溶液将脂多糖配成20 mg·L-1注射液，备用。阿司匹林(神威药业有限公司，批号：1101021)。

1.3 动物

SD大鼠，雄性，体重180～220 g，购自华中科技大学同济医学院，合格证号：SCXK(鄂)2010-0007。在室温(20±2)℃环境下分笼饲养，实验前适应环境饲养一周。

1.4 仪器

DL-I型电子体温计(江苏鱼跃医用仪器有限公司)。

2 方法[3]

2.1 分组

大鼠每日测量体温(肛温)2次，连续2日，取两次体温的平均值记为基础体温。单次体温超过38 ℃ 或2次温差超过0.5 ℃的动物剔除。将合格的大鼠150只随机分为15组，即空白对照组,模型组对照,阿司匹林对照组(0.2 g·kg-1)[4],大青龙汤全方水煎高、低剂量组，超临界CO2萃取物高、低剂量组，生物碱提取物高、低剂量组，酚酸提取物高、低剂量组，苷类提取物高、低剂量组，多糖部位高、低剂量组，每组10只。实验药物高、低剂量组分别按5倍临床用药剂量(相当于生药38.7 g·kg-1)和1倍临床用药剂量(相当于生药7.74 g·kg-1)，各部位灌胃给药剂量见表1。

2.2 动物处理及观察指标

实验前12 h，禁食不禁水。实验时空白对照组及模型对照组灌胃给予蒸馏水，其他各组灌胃给药；给药后1 h空白组腹腔注射灭菌0.9%氯化钠溶液，其他各组大鼠分别腹腔注射LPS(20 μg·kg-1)，诱发动物发热。

体温测定：取各组大鼠腹腔注射前二次测得的体温平均值作为基础体温(T0)。各组动物分别于腹腔注射LPS后1 h开始测体温(Ti)，以后每隔1 h测1次体温，连续监测7 h。计算△T(△T=Ti-T0)，以时间为横坐标，各组体温△T为纵坐标，绘制体温变化(△T-Time)曲线。

2.3 数据处理

3 结果

以时间为横坐标，各组体温△T为纵坐标，绘制体温变化(△T-Time)曲线，结果见图1。

图1 大青龙汤及其不同物质部位对发热模型大鼠△T变化的影响

模型组与空白组比较,模型组大鼠体温明显升高，每个时间点差异均有统计学意义，说明造模成功;其他各物质部位组与模型组比较，大青龙汤水煎液低剂量组在5 h差异有统计学意义(P<0.05),在3，4，6，7 h差异有统计学意义(P<0.01)，其高剂量组在3 h差异有统计学意义(P<0.05),在4，6，7 h差异有统计学意义(P<0.01)；生物碱低剂量组在3 h差异有统计学意义(P<0.05),在4，7 h差异有统计学意义(P<0.01)；多糖高剂量组在1、3、4、6 h差异有统计学意义(P<0.05)；而超临界CO2萃取物、酚酸提取物及苷类提取物有解热作用趋势，但无统计学意义。说明大青龙汤全方解热效果显著，其主要解热有效物质部位为生物碱、多糖。与阿司匹林比较，大青龙汤全方水煎液在1～4 h降温幅度稍低，第5小时即与之相当，第6、7小时则效果优于阿司匹林，说明其全方水煎液起效稍慢，但药效持续时间长。结果见表1。

表1 大青龙汤及其不同物质部位对内毒素致大鼠发热的影响

注：与模型对照组比较，*P<0.05,**P<0.01；与阳性对照组比较，#P<0.05,##P<0.01

4 讨论

脂多糖(LPS)诱导发热模型所用的剂量范围较大，其剂量范围为10～100 μg·kg-1。在探索LPS诱导大鼠发热的最佳剂量时，本实验选取了20，50，100 μg·kg-13个不同的剂量进行考察，结果表明100 μg·kg-1没有明显的致热效果，50，20 μg·kg-1均可以诱导大鼠发热，但20 μg·kg-1剂量引起实验大鼠发热热势高及持续时间较长，且肾毒性也较小，综合各方面考虑，确定LPS剂量为20 μg·kg-1。大鼠在腹腔注射20 μg·kg-1LPS后在7 h内各观察点的体温均见显著增高(P<0.05)，同时伴有寒颤、精神萎靡和轻微腹泻等症状，表明该剂量LPS成功诱导了大鼠的发热模型[5]。LPS诱导发热起效较慢，宜较早给药，所以本实验提前1 h灌胃给药[6]。

本方以麻黄为君药，桂枝为臣药，甘草味甘平，杏仁味甘苦，苦甘为助，佐麻黄以发表；大枣味甘温，生姜味辛温，佐桂枝以解肌；石膏味甘辛微寒，增加清热除烦之效。实验结果表明,大青龙汤全方水煎液，生物碱及多糖组分有显著的解热作用,其作用与阿司匹林相近。另据文献报道，大青龙汤方中臣药桂枝所含挥发油的主要成分桂皮醛具有明显解热作用[2,7]，石膏水煎液亦具有显著解热效果[8]。

根据本论文的研究结果和相关文献资料综合分析，我们认为，大青龙汤经典方剂退烧解热效果显著，其解热的药效物质基础可能为方中生物碱和多糖等组分的配伍协同作用。

[1] 刘庆芳.大青龙汤药效研究与应用[J].河南大学学报(医学版)，2006,25(4)：70-72.

[2] 黄鹤归，叶晓川，刘焱文,等.超临界CO2萃取法与水蒸气蒸馏法提取桂枝-干姜药对的化学成分比较[J].中国实验方剂学杂志，2011，17(24)：85-92.

[3] 章卓，万敬员，李洪忠，等.积雪草苷对脂多糖诱导大鼠发热的预防及对相关炎症因子的影响[J].中国药理学与毒理学杂志，2007，21(3)：229-234.

[4] 梅全喜，田素英，钟希文，等．复方土牛膝糖浆解热、镇痛作用研究[J].中国药房，2006，17(22)：1695-1697.

[5] Dokladny K，Kozak A，Wachulec M，et al. Effect of heat stress on LPSinduced febrile response in D-galactosamine-sensitized rats[J].Am J Physiol Regul Integr Com PPhysiol，2001，280(2)：R338-R344.

[6] 张福利,许宏连,马艳春,等.脂多糖对寒体、热体、常体大鼠攻毒发热后体温曲线、一氧化氮的影响[J].中医药学报,2007,35(1)：17-19.

[7] 马悦颖，李沧海，郭建友，等.桂皮醛解热作用及机制的实验研究[J].中国实验方剂学杂志，2007，13(4)：22-25.

[8] 梁强，范书铎，张晓玲，等.生石膏对发热兔解热作用的实验研究[J].中国医科大学学报，1991，20(1)：16-18.

StudyofDaqinglongTangConcerningLPS(lipopolysas-charideca)UseFebrileRats’AntipyreticEffects

ZOU Tian1，TIAN Lian-qi1，YE Xiao-chuan1，ZHOU Ai-jun2，LIU Yan- wen1

(1.ProvincialandMinistryofEducationKeyLaboratoryofResoureScienceandChineseHerbalCompoundinChineseMedicineHubeiUniversityofTraditionalChineseMedicine，Wuhan430061，China;2.ShatianHospitalofDongguanCity，Dongguan523981，China)

Objective:To study antipyretic effects of Daqinglong Tang and filter out the main effective parts to antipyretic.MethodsUsing endotoxin induced fever method to observe effects of Daqinglong Tang antipyretic.ResultsDaqinglong Tang of all square decotion, Polysaccharide parts and Alkaloid parts bring significantly inhibition on rats body temperature rising that caused by Endotoxin. Their antipyretic effects were like aspirin.ConclusionAntipyretic effect of Daqinglong Tang was significant，and effective parts were alkaloid, polysaccharides，volatile oil and Gypsum Fibrosum.

Daqinglong Tang; Lipopolysaccharide; Antipyretic;Material part

2012-05-09)