咔唑硫酸比色法测定皖南山区豆腐柴叶中果胶含量的研究

陶阿丽，张国升

（安徽新华学院 药学院，安徽 合肥 230088）

咔唑硫酸比色法测定皖南山区豆腐柴叶中果胶含量的研究

陶阿丽，张国升

（安徽新华学院 药学院，安徽 合肥 230088）

使用咔唑硫酸比色法测定皖南山区豆腐柴叶中果胶的含量，得到符合试验方法的最佳测定条件：测定果胶含量所需的浓硫酸用量为10.0ml,水解温度为85℃，水解时间为25min,0.15%咔唑无水乙醇溶液用量为0.8ml,提取的果胶含量为37.8%，半乳糖醛酸的标准曲线方程为A=0.0043C+0.104,回收率在98.6%-103.4%，相对标准偏差为1.529%.本法操作简单，稳定性好，用于实际样品测定时，效果较为满意.

咔唑硫酸比色法；豆腐柴果胶；含量测定

果胶是一种植物胶体，是从植物中提取的一种复杂的天然高分子聚合物，存在于植物的细胞壁和细胞内层，是细胞壁的组成成分.果胶分子主要是由α-1,4-糖苷键联接而成的半乳糖醛酸（G.A.）与鼠李糖、阿拉伯糖和半乳糖等中性糖联结而成[1].果胶安全无毒，被广泛应用于食品、医药、纺织、化妆品、冶金、烟草等行业[2-3].目前国内对其含量的测定方法主要有重量法[4]、容量法[4]、比色法[5]和滴定法[5]等.其中重量法中果胶经皂化生成果胶酸钠，再经乙酸酸化使之生成果胶酸，加入钙盐则生成果胶酸钙沉淀，烘干后称量[6].此法稳定可靠，但操作较烦琐费时，分析时间较长，不宜普遍推广.比色法是通过测定半乳糖醛酸的含量来获得果胶的含量，准确性好，且操作简单，在用于剑麻、苎麻[7]、甜菜[8]、向日葵[9]、柑橘[10]等中果胶的含量测定时，都取得了满意的结果.本实验用咔唑比色法测定豆腐柴中果胶的含量，并且对果胶的水解条件和半乳糖醛酸的测定条件做了详细的实验，获得了满意的结果.

1 试验部分

1.1 试验仪器与主要试剂

试验仪器：

HH-S恒温水浴锅：江苏国胜实验仪器厂；721可见分光光度计：上海成光仪器有限公司；FA2004型电子天平：上海良平仪器有限公司；

试剂：

咔唑：AR，合肥博美生物科技有限责任公司；浓硫酸：AR，淮南市化学试剂厂；无水乙醇：AR，上海振企化学试剂有限公司；果胶：课题组从皖南山区采集豆腐柴叶自制.

1.2 试验方法

1.2.1 测量方法依据

以半乳糖醛酸为对照品测定豆腐柴中果胶含量，利用半乳糖醛酸与咔唑反应生成有颜色的配合物，在可见光区530nm[11]处有最大吸收，以测得的半乳糖醛酸的浓度来计算果胶的含量.

1.2.2 半乳糖醛酸标准曲线的绘制

半乳糖醛酸标准溶液：精确称取0.1000g半乳糖醛酸于烧杯中，用少量蒸馏水溶解后转移至100ml容量瓶中，用pH为3.0的盐酸稀释并定容.用移液管分移取上述稀释液 1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml于 6 个 100ml容量瓶中，用 PH为3.0的盐酸稀释至刻度，得到浓度分别为10、20、30、40、50、60ug/ml的半乳糖醛酸标准溶液，备用.

0.15%咔唑无水乙醇溶液：称取0.15g的咔唑置烧杯中，加入乙醇溶解后定容于100ml容量瓶中备用.

标准曲线的绘制：取上述标准溶液各1ml于6个试管中，加入浓硫酸10ml,边加边冷却，放于85℃水浴锅中加热25min后冷却至室温，加入0.15%咔唑无水乙醇溶液0.8ml,摇匀，在530nm处依次测定吸光度，空白试剂为参比，以吸光度为纵坐标，半乳糖醛酸的浓度为横坐标，绘制标准曲线，得曲线方程为A=0.0043C+0.104，r=0.9996曲线见图1.

图1 标准曲线

1.2.3 换算因子的测定

称取样品果胶20mg，至100ml容量瓶中，用pH为3.0的盐酸定容，移取1ml该溶液于100ml容量瓶中并用盐酸定容，按1.2.2的测定方法测定其吸光度(A=0.112)，根据标准曲线得到其半乳糖醛酸的浓度（C)，根据换算因子 f=W/(C×D)得 f=1.2651.

1.2.4 样品果胶的含量测定

称取样品果胶6.0g置于250ml烧杯中，加入1.0mol/L的硫酸溶液10.0ml，边加边冷却，冷却至室温后，置于85℃水浴中加热25min进行水解，水解后冷却至室温，转入50ml容量瓶中，稀释定容，得到样品溶液.移取样品溶液10ml，置于50ml容量瓶中并定容，移取稀释后的样品溶液1.0ml放于试管中，加入0.15%的咔唑无水乙醇溶液0.8ml,充分摇匀后于暗处放置25min后，以试剂空白为参比，放于721分光光度计530nm处测定其吸光度.

计算公式1.1：果胶含量（%)=C×50×(50/10)×f/W×103

其中，C为半乳糖醛酸浓度(mg/ml)，f为换算因子，W为样品重量

根据计算公式得出样品果胶含量为37.8%

2 结果与讨论

2.1 0.15%的咔唑无水乙醇溶液用量的选择

图2 不同显色剂用量时的吸光度值

其他条件不变，分别测定显色剂的用量为0.4ml、0.5ml、0.6ml、0.7ml、0.8、0.9ml、1.0ml 时 的 吸光度，结果表明（见图2），当显色剂的用量为0.8ml时，吸光度最大，因此咔唑无水乙醇溶液的用量宜为0.8ml.

2.2 浓硫酸用量的选择

在水解温度为85℃，水解时间为25min的条件下，分别对浓硫酸的加入量为6.0～12.0ml的果胶溶液进行水解和显色，于530nm处测定吸光度，结果表明（见图3)，硫酸加入量10.0ml时，有最大吸光度，因此本实验选择的硫酸加入量为10.0ml.

图3 不同浓硫酸用量时的吸光度值

2.3 水解温度的选择

分别移取10.0mL浓硫酸于6支试管中，置冰水浴中冷却，边冷却边缓慢加入1ml果胶溶液，充分冷却后，分别放入 70、75、80、85、90、95℃水浴中加热25min，冷却至室温后，加入0.8ml0.15%咔唑无水乙醇溶液，以试剂空白为参比，分别测其在530nm的吸光度，实验结果表明(见图4），当水解温度为85℃时，有最大吸收值，由此可知水解温度宜为85℃.

图4 不同浓硫酸用量时的吸光度值

2.4 水解时间的选择

精密移取10.0ml浓硫酸于试管中，置冰水浴中冷却，边冷却边加入0.8ml，充分冷却后，放于85℃水浴锅中加热15-30min冷却置室温后，于530nm处分别测定不同水解时间的吸光度.结果表明（见图5)，当水解时间为25min时，吸光度最大，当水解时间超过25min时，吸光度值降低，可能是因为水解时间过长，破坏了半乳糖醛酸的结构，因此本实验选择的水解时间为25min.

图5 不同水解时间下的吸光度值

3 方法学考察

3.1 加标回收率实验

准确移取4份样品果胶溶液，分别加入30ug/ml的半乳糖醛酸标准液，按试验方法测定果胶含量，计算其浓度求其回收率，结果如表1，得到的回收率在98.6%～103.4%之间，表明此方法准确度较好.

表1 回收率实验

3.2 精密度实验

准确移取3份果胶样品溶液，分别测定其果胶含量，求平均含量和相对标准偏差，其结果如表2所示，表明此方法精密度较好.

4 结论

经测定，豆腐柴样品果胶含量为37.8%，回收率在98.6%-103.4%之间，相对标准偏差为1.529%，这表明本实验所采用的咔唑硫酸比色法回收率较高，精密度较好，所测得的豆腐柴果胶含量也较高.与传统方法相比，咔唑硫酸比色法不仅简单准确，显色稳定，灵敏度高，重现性好，稳定性高，而且缩短了测定时间，有利于提取过程的分析与控制，是目前豆腐柴中果胶含量测定的较好方法，已在多种植物果胶的测定中使用.

表2 精密度实验

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〔2〕马彦彪，陈桂卿，冯辉.果胶的研究概况[J].内蒙古中医药，2000,19（增刊）：111-112.

〔3〕胡国华.功能性食品胶[M].北京:化学工业出版社,2004.15-128.

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R284.2

A

1673-260X（2012）11-0108-03

安徽省教育厅自然研究项目（KJ2011Z159）