HPLC测定山枚注射液中牡荆素鼠李糖苷、金丝桃苷、芦丁的含量

高 辉

(黑龙江省澳利达药业股份有限公司·哈尔滨 150001)

山枚注射液是由山楂、刺枚果两药味组成。山楂味酸甘，微温，为药食两用之品，有消食化积、行气散瘀的功效。刺玫果甘酸、微温，具有健脾理气，养血调经的作用。本实验通过对山枚注射液有效成分的含量测定，为本产品的进一步开发利用奠定了实验基础。

1 仪器和试药

1.1 仪器

岛津SCL-10A高效液相色谱仪，岛津SPD-10A紫外检测器，昆山KQ-200DB型超声仪。

1.2 药品

牡荆素鼠李糖苷对照品(批号111668-201101)、金丝桃苷对照品(批号111521-201103)、芦丁对照品(批号110752-201009)(购自中国药品生物制品检定所)，山枚注射液自制。

1.3 试剂

甲醇为色谱纯，乙醇为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：HypersilODS2(5μm，5mm×200mm)；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液(40：60)；流速：1ml/min；检测波长：359nm。

2.2 对照品溶液的配制

精密称取牡荆素鼠李糖苷对照品3.925mg，金丝桃苷对照品2.775mg，芦丁对照品9.675mg，置于25ml容量瓶中，用50%乙醇溶解并稀释至刻度，制成混合溶液，作为对照品溶液，进样10μl。

2.3 供试品溶液的配制与测定

精密量取样品50ml，置于干燥蒸发皿中，水浴蒸干，残渣加50%乙醇使溶解，转移至25ml容量瓶中，并用50%乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，进样10μl。

2.4 标准曲线的绘制

精密称取干燥至恒重的牡荆素鼠李糖苷对照品2mg，金丝桃苷对照品2mg，芦丁对照品5mg，置于25ml容量瓶中，加入适量的50%乙醇超声振荡使其溶解，加50%乙醇稀释至刻度，作为对照品溶液。分别精密吸取上述对照品溶液1、2、3、4、5ml于10ml容量瓶中，用50%乙醇稀释至刻度，再分别注入高效液相色谱仪各10μl，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标绘制标准曲线，回归方程如下：

牡荆素鼠李糖苷：Y=4.10×10-8X+5.17×10-2，r=0.9993， 线 性 范 围 0.08-0.4μg， 峰 面 积RSD=1.20%。

金丝桃苷：Y=1.801×1O-8X-7.39×10-3，r=0.9989，线性范围0.08-0.4μg,峰面积RSD=1.20%。

芦 丁：Y=8.74×10-8X+6.73×10-3，r=0.9987， 线性范围0.2-1.0μg，峰面积RSD=0.85%。

2.5 精密度试验

取线性关系项下牡荆素鼠李糖苷浓度为0.008mg/ml，金丝椤瞄浓度为O.008mg/ml，芦丁浓度为0.02mg/ml的混合对照品溶液，连续进样六次，测定其峰面积，经计算，牡荆素鼠李糖苷峰面积RSD=0.93%，金丝桃苷峰面积RSD=0.11%，芦丁峰面积RSD=0.12%。

芦丁含量峰面积积分值1 349891 317519 748774 2 350084 317369 748251 3 347186 317487 749563 4 342401 317612 747998 5 345957 317447 748106 6 343259 318301 750112平均含量 346463 317623 748801 RSD% 0.93 0.11 0.12样品 牡荆素鼠李糖苷峰面积积分值金丝桃苷含量峰面积积分值

2.6 重复性试验

取同一批号下样品进行五次平行试验，分别进行测定，测得牡荆素鼠李糖苷0.0105mg/ml，RSD=1.7%；金丝桃苷O.0052mg/ml，RSD=1.9%；芦丁0.0170mg/ml，RSD=0.93%。

表1

2.7 稳定性试验

取同一供试品溶液，室温下放置，在配制后的0、2、4、6、8、24依次测定，结果在24小时内的RSD如下：牡荆素鼠李糖苷1.36%，金丝桃苷1.9%，芦丁0.83%。

时间(h)牡荆素鼠李糖苷含量(mg／ml)芦丁含量(mg／ml)0 0.0104 0.0052 0.0170 2 0.0105 0.0051 0.0168 4 0.0103 0.0053 0.0172 6 0.0106 0.0054 0.0169 8 0.0104 0.0053 0.0171 24 0.0102 0.0052 0.0170 RSD% 1.36 1.9 0.83金丝桃苷含量(mg／ml)

2.8 加样回收率试验

取已知含量的同批样品6份，精密加入一定量的对照品，依供试品处理方法，测定样品中牡荆素鼠李糖苷，金丝桃苷和芦丁的含量，计算平均回收率。结果分别为：牡荆素鼠李糖苷99.45%(RSD=1.72%)，金丝桃苷98.87%(RSD=0.82%)，芦丁97.15%(RSD=1.68%)，(n=6)。见表 1、2、3。

表1

表2

表3

2.9 样品含量的测定

取三批样品，按上述方法制备成供试品溶液，每批测定3次，见表4。

表4

3 讨论

3.1 进行溶剂选择

比较了50%乙醇、30%乙醇，结果以后者的牡荆素鼠李糖苷，金丝桃苷和芦丁提取完全，且分离较好。

3.2 色谱条件筛选

在流动相中曾选择用甲醇-水系统，试验结果表明采用甲醇-磷酸溶液系统，三对照品的峰形对称，保留时间适中，分离效果好。

[1] 中国药典.一部[S].2005.273.

[2] 王福成，豆文太，等.HPLC测定山楂精中牡荆苷、牡荆苷-2″-O-鼠李糖苷、金丝桃苷、芦丁的含量.中成药.2002，24(2)，122-124.