红细胞悬液辐照前后在不同贮存期游离血红蛋白含量的比较

王九兵 王永维 重庆市精神卫生中心检验科 4047； 重庆市涪陵区中心血站

血站的血液制品主要是红细胞悬液，近来一些血站开展了对血液制品的辐照，以降低输血相关性移植物抗宿主病（TA－GVHD）。其制备、辐照、保存等过程中可能影响红细胞的生存质量，导致其中的游离血红蛋白含量比正常全血的高，必须控制好各环节，保证临床的输注质量与安全。

1 仪器设备

1.1 辐照设备 GC－3000－Ⅰ血液辐照仪（Cs137，中心剂量5Gy／min），加拿大诺迪安公司。

1.2 离心设备 80－2型离心沉淀器，上海手术器械厂。

1.3 加样设备 移液器100～1 000μl，德国eppendorf公司。

1.4 孵育设备 HH W 21 600型电子恒温水箱，上海科析试验仪器厂。

1.5 检测设备 eppendorf 6124型半自动生化分析仪，德国eppendorf公司。

2 试剂

成品血浆游离血红蛋白测定试剂，北京瑞尔达生物科技有限公司，批号：C1001003。

3 检测方法与结果

3.1 操作步骤

3.1.1 红细胞悬液的准备：将采集的全血在全程冷链控制的情况下，于采后6h内制备成红细胞悬液，并分为两组，一组将红细胞悬液置于辐照仪中，通过γ射线中心靶计量≥25Gy辐照［1］；另一组不辐照。

3.1.2 将辐照前、后的红细胞悬液，均置于（4±2）℃下保存。

3.1.3 在无菌条件下，从血袋中取出红细胞悬液约5ml，3 000r／min离心5min〔在（4±2）℃下保存原袋红细胞悬液，供下次不同时期取样使用〕。

3.1.4 取离心后的上清液，按以下步骤操作，见表1。

表1 操作步骤（ml）

3.2 结果 分别取已制备保存的当天、1周、2周、3周、4周后的红细胞悬液进行检测，结果如表2。将辐照前后不同储存时期的游离血红蛋白含量进行比较（实验组不包含第17号标本结果），对检测结果作t检验，其中当天、第1周、第2周P＞0.05，说明辐照前、后含量无显著差异；第3周与第4周P＜0.05，说明辐照前、后含量有显著差异。

混匀，恒温水箱37℃反应20min，于生化分析仪上测定，光径10mm，波长505nm，空白管调零比色。

表2 辐照前、后不同贮存期红细胞悬液中游离血红蛋白含量（mg／L）

4 讨论

由于红细胞悬液的制备过程、辐照、保存对红细胞本身有影响，所以游离血红蛋白的含量比正常全血高。国家标准《全血及成分血质量要求》GB－18469［2］，没有对辐照后红细胞悬液中游离血红蛋白的含量作出明确的要求。但制备人员也应通过控制制备过程的操作等方式来延长红细胞的寿命，控制其中的游离血红蛋白的含量。

4.1 从检测结果比较，在未辐照红细胞悬液的保存期（CPDA保存液，35d）内和辐照后红细胞悬液的保存期（参照FDA推荐辐照后红细胞保存期不能超过28d）［3］内，前3周内辐照前、后的红细胞悬液中游离血红蛋白的含量没有明显的变化；但从第3周到第4周变化明显，虽然都在正常范围内，但笔者仍建议每天根据临床用血计划对库存血液进行辐照，尽量缩短辐照后的保存时间，控制在21d以内更为安全。

4.2 随着保存期的延长，游离血红蛋白含量逐渐增加，但直到末期也能达到临床输注要求范围（按《全血及成分血质量要求》GB－18469中冰冻红细胞洗涤后的游离血红蛋白含量≤1g／L要求推算）［4］。本次实验中1例超出范围，属于检测取样的操作不当所致（第3次取样后血辫热合不全，血液已污染），在统计分析时已舍该值。

4.3 导致游离血红蛋白检测含量增高的因素有：（1）辐照后储存对红细胞代谢、功能等造成不同程度的影响，随保存期的延长，红细胞代谢废物的产生，血袋中红细胞的生存条件变化，部分红细胞寿命缩短，损伤增加。（2）每次从原血袋中取样，都会对每袋悬液中的红细胞造成影响，所以控制取样的环境条件（特别控制污染）和轻拿轻放等。（3）检测过程中，标本的处理也会影响红细胞的质量，导致游离血红蛋白含量增高。

4.4 要求制备红细胞悬液时，严格执行好各项操作规程，控制制备环境条件和存储条件；在对红细胞悬液进行辐照的过程中，注意一次照射的血量，防止在放入和取出容器时的挤压，最大程度保证红细胞悬液中的细胞质量，保证输注有效及降低危害。

［1］梁华钦，邓晶，田兆嵩，等.γ射线辐照对血液质量的影响〔J〕.中国输血杂志，2002，15（3）：177－178.

［2］中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.GB18469－2001全血及成分血质量要求〔S〕.北京：中国标准出版社，2004.

［3］吕秋霜，任芙蓉，李慧，等.不同保存期全血辐照后红细胞保存损伤的研究〔J〕.中国输血杂志，2003：16（3）：170－172.

［4］刘菲，刘春莲.不同贮存期红细胞悬液中游离血红蛋白量的变化〔J〕.贵阳医学院学报，2005，30（6）：564.