JWA基因＋723G／T基因型单核苷酸多态性对表浅性膀胱癌患者预后的影响

关云哲

（长春市中心医院，吉林 长春130051）

在我国膀胱癌位于泌尿系统肿瘤首位，且有上升趋势。90%的膀胱肿瘤为尿路上皮癌，其中70%的初发患者为表浅性膀胱癌［1］。手术是治疗的关键，术后灌注化疗可以有效降低术后复发率，提高生存率［2］。膀胱癌患者的复发与膀胱癌治疗过程中出现的耐药性有关［3］。

本文通过测序检测恶性表浅性膀胱癌患者JWA基因中＋723T／G的单核苷酸多态；应用Kaplan－Meier来确认JWA基因中＋723T／G的单核苷酸多态性对患者生存率的影响及JWA基因中＋723T／G对顺铂治疗的浅表性膀胱癌患者预后的影响。

1 对象与方法

1．1 对象

长春市中心医院泌尿外科2007－2010年经病理证实的膀胱癌标本52例，进行分组研究。单纯手术治疗组16例，中位年龄52（31－76）岁，手术加术后顺铂化疗治疗组36例，中位年龄57（29－84）岁。

1．2 实验方法

从组织样本中提取全基因组DNA，通过PCR检测JWA基因外显子3序列。PCR引物：

Forward： 5′－CTTCGGAACCTCAAGAACAAACT－3′23bp

Reverse： 5′－TCTGAGGTCTTCTCTCTGAAACATC－3′25bp

产物大小为：328bp［4］。PCR扩增循环参数：95℃预变性5min，接着进入循环，首先95℃变性30 s；然后按53℃复性40s；接着72℃延伸45s，循环33次后72℃延伸10min。产物通过软件Chromas处理。经测序公司测序在＋723位点发现T／G单核苷酸基因多态性。

1．3 统计学分析

本实验数据采用SPSS17．0软件包进行统计学处理，组间样本均数比较采用方差分析，以P＜0．05作为有无显著性差异的判断标准。通过Kaplan–Meier方法以存活时间为非独立变量，来检验当控制某一层因素后对其他研究因素不同水平的生存时间比较的影响分别进行分析，存活率的组间比较应用差异显著性log－rank检验（生存期为患者第一次手术为起始）。

2 结果

2．1 JWA基因序列分析

近年来有关肿瘤进展机制的分子生物学研究提示：人群中不同个体之间的基因存在差异性或多态性，这种多态性可能与多种疾病的发生发展有密切的关系。在52例膀胱癌患者中，检测JWA基因第3号外显子 ＋723位点的多态性，25例患者（48．1%）为 ＋723T／G 基因型，氨基酸改变为L62M，比一些文献报道的要更高一些；27例患者（51．9%）为 ＋723G／G型。并未检测出＋723T／T基因型。（各组测序结果详见表1）

表1 T／G单核甘酸多态性测序结果

2．2 JWA＋723T／G基因状态对表浅性膀胱癌患者生存期的影响

52例膀胱癌患者的平均生存期为20．6月。接受手术治疗的患者（n＝16）的平均生存期为11．7月，接受顺铂和手术联合治疗的患者（n＝36）的平均生存期为22．5月（P＜0．05）。手术联合顺铂治疗的患者预后效果较好，这与文献结果一致［5］。检测JWA＋723T／G基因型患者的平均生存期为23．6月，JWA＋723G／G基因型患者的平均生存期为15．7月（P＝0．057）。JWA＋723位点T／G基因型似乎对表浅性膀胱癌患者的生存期影响更大。

2．3 JWA＋723T／G基因状态对经顺铂治疗的表浅性膀胱癌患者生存期的影响

在36例经顺铂治疗的患者的样本中，有18例为JWA＋723T／G基因型，18例是JWA＋723G／G基因型，其平均生存期分别为26．2月和19．3月（P＝0．036）。数据显示JWA＋723位点TG基因型对顺铂用药患者的生存期有显著的影响。

3 讨论

膀胱癌是成人最常见的恶性肿瘤，是具侵袭性的肿瘤，诊断为浅表性膀胱癌者，病人的平均生存期少于五年［6］。

膀胱癌的发生和发展是一个多因素的结果，具体发病机制不完全清楚［7］，膀胱细胞向瘤细胞的转变也是一个复杂的过程。实验表明有很多基因和蛋白参与了这一过程，导致细胞周期发生变化、信号传导通路异常，从而导致细胞增殖和血管增生的异常，在膀胱癌的发生和发展中起到一定作用［8］。

手术治疗是膀胱肿瘤最有效方法，化疗是重要的辅助治疗手段对放疗敏感的患者，化疗也是很好的联合方法［9］。顺铂虽然临床应用后反应良好［10］，同其他化疗药物一样，表浅性膀胱细胞瘤对顺铂也易产生耐药性。目前研究认为XRCC1基因和JWA基因功能在对抗顺铂耐药有一定作用［11］。本研究提示JWA＋723位点T／G基因型似乎对表浅性膀胱癌患者的生存期影响更大。在36例接受顺铂治疗的患者样本中，JWA＋723位点T／G基因型患者（n＝18）与JWA ＋723位点G／G基因型患者（n＝18）两组样本量相对平衡，发现两组生存期统计学有显著差异（P＝0．036）。在52例表浅性膀胱癌患者的研究中，JWA＋723位点T／G基因型患者占48．1%，高于之前的研究［12］，不能排除这种高频性的表型由样本数量较少或种族差异所引起的。

在少量样本中，JWA＋723T／G基因型的作用效果可能不能充分显示，然而相对平衡的数据却有利于对患者生存期的分析。在小样本研究中，JWA＋723位点T／G基因型的影响并没有完全体现在患者的存活上。

由于膀胱癌具有侵袭性生长特性，任何单一的手段都难以达到真正的治愈。因此，提高膀胱癌的治疗效果寄希望于综合治疗。

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