正交试验法优选健肝颗粒提取工艺

于海斌，郑海云*，龚卫红

（1.中国中医科学院中医药科技合作中心，北京 100700；2.北京中医药大学中药学院制药系，北京 100102）

正交试验法优选健肝颗粒提取工艺

于海斌1，郑海云1*，龚卫红2

（1.中国中医科学院中医药科技合作中心，北京 100700；2.北京中医药大学中药学院制药系，北京 100102）

目的：通过正交试验，优选处方的最佳提取工艺。方法：采用水提取方式，以水为溶剂进行提取，选择加水倍数、提取时间、提取次数3个因素，每个因素设计3个水平，按照正交试验L9（34）表进行试验。以总黄酮作为指标，综合考虑，选定最优提取工艺。结果：提取的最佳工艺条件为加8倍量水，提取3次，每次2 h。结论：优选得到的提取工艺简单、稳定、可行。

正交试验；总黄酮；健肝颗粒

健肝颗粒含有葛根、枳椇子、积雪草、绿茶，主要针对酒精性肝损伤人群所设。方中葛根开胃下食，利尿解酒毒；枳椇子除烦渴，消湿热，解酒毒，利小便；积雪草清热利湿，解毒消肿［1］。绿茶有帮助消化，去油腻，解酒的作用。诸品合用，共奏健脾、利湿、解酒毒之效。绿茶不提取。葛根、枳椇子、积雪草均含有黄酮类物质，且具有良好的水溶性。研究发现，葛根、枳椇子、积雪草健肝保肝作用的主要有效成分为总黄酮。为了保证制剂质量，以总黄酮含量为指标，用正交设计法研究葛根、枳椇子、积雪草的最佳提取工艺，分析加水倍数、提取时间、提取次数对总黄酮的含量的影响，优选出最佳提取条件。

1 仪器和材料

1.1 仪器

UV-2800H型紫外可见分光光度计［尤尼柯（上海）仪器有限公司］，BP-211D型十万分之一分析天平（德国Sartorius公司），KQ5200DA型超声波清洗机（张家港市海纳超声电气有限公司）。

1.2 材料

所有饮片均购于北京本草方源药业有限公司。芦丁（中国食品药品检定研究院，批号：100080-200707）；所用试剂均为分析纯。

2 方法和结果

2.1 样品的制备

按处方投料，加规定量的水，煎煮规定的时间和次数，滤过，滤液浓缩至稠膏，放入真空干燥箱，干燥得干膏作为样品，进行测定。

2.2 总黄酮含量的测定方法［2］

本文所用的总黄酮测定方法按照卫生部卫生法制与监督司编印的 《保健食品检验与评价技术规范》2003年版中保健食品中总黄酮的测定方法进行。

2.2.1 对照品溶液制备 精密称取芦丁对照品4.9 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液，浓度49μg·mL-1。

2.2.2 标准曲线的制备 精密吸取芦丁对照品溶液0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL分别置于10 mL比色管中，加甲醇至刻度，摇匀，以甲醇为空白，照紫外-可见分光光度法（《中国药典》2010年版一部附录V A），在360 nm波长处测定吸光度，计算。求得回归方程Y＝0.031X+0.009 9，r＝0.999 4，用于计算试样中总黄酮的含量。

2.2.3 供试品溶液的制备及测定 取试样约0.8 g，精密称定，置25 mL量瓶中，加乙醇至刻度，超声处理（功率200W，频率40 kHZ）20 min，放冷，补足乙醇至刻度，精密吸取上清液1.0 mL，置蒸发皿中，加1 g聚酰胺粉吸附15 min，于水浴上挥去乙醇，然后转入层析柱。先用甲苯20 mL洗脱，甲苯液弃去，然后用甲醇洗脱黄酮，定容至25 mL。照紫外-可见分光光度法（《中国药典》2010年版一部附录VA），在360 nm波长处测定吸光度。计算试样中总黄酮含量。

2.2.4 精密度试验 取供试品溶液适量，按2.2.3项下方法重复进行5次，结果RSD＝0.43%，表明本方法精密度良好。

2.2.5 稳定性试验 取供试品溶液适量，按2.2.3项下方法，分别在0，2，4，6，8 h测定吸光度。结果RSD＝1.21%，表明供试品在8 h内稳定性良好。

2.2.6 重复性试验 取供试品，按2.2.3项下方法制备供试品溶液并测定吸光度，重复5次，结果RSD＝0.96%，表明方法重复性良好。

2.2.7 加样回收率试验 取供试品0.4 g，精密称定，分别精密加入芦丁对照品溶液适量，按2.2.3项下方法制备供试品溶液和测定吸光度，结果见表1。

表1 健肝颗粒中芦丁加样回收试验

2.3 正交试验设计

选用L9（34）正交试验，结合影响饮片提取效率的主要因素，考察加水量、提取时间、提取次数对总黄酮含量的影响，同时考虑生产实际，选取3个水平，因素水平见表2，正交试验结果见表3，方差分析见表4。

以总黄酮含量为考察指标，各因素作用的主次为：C＞A＞B，方差分析结果表明：A（倍数）、B（提取时间）、C（提取次数）影响具有统计学意义（P＜0.01）；在A因素中，A2＞ A3＞A1，选择A2；在B因素中B3＞B2＞B1，故选择B3；在C因素中，C3＞ C2＞ C1，故选择 C3。最佳工艺为A2B3C3，即加8倍量水，提取3次，每次2 h。

表2 健肝颗粒提取工艺因素水平表

表3 健肝颗粒提取工艺正交试验/mg·g-1

表4 健肝颗粒提取工艺方差分析表

2.4 验证实验

根据筛选得到最佳提取工艺A2B3C3提取3次，进行验证，结果总黄酮含量分别为2.815 7，2.894 0，2.884 9 mg·g-1。

3 讨论

中草药提取对于提高中药制剂的内在质量和临床疗效最为重要，并且可以有效降低日服用量，便于制剂成型。在正交试验中以提取物干膏中所含总黄酮的量为指标优选工艺，选择可能影响提取的3个因素进行优化，确定了健肝颗粒的最佳提取工艺。本配方中，葛根、枳椇子、积雪草均主要含有黄酮类物质，并具有良好的水溶性，故可以水进行提取，提取后的稠膏与粉碎后的绿茶制备颗粒，工艺简单可行，损耗低，适合工业化生产。

［1］国家药典委员会.中国药典［S］.一部.北京：中国医药科技出版社，2010：267.

［2］卫生部卫生法制与监督司.保健食品检验与评价技术规范［S］.2003.

中药产业年规模已达4 100亿元出口23.32亿美元

卫生部副部长、国家中医药管理局局长王国强日前表示，随着我国中医药事业快速发展，服务能力明显增强，中药产业规模明显扩大。目前，我国中药产业年规模已达4 100亿元以上，占国内医药市场的3成，中药出口已达23.32亿美元，全国中药生产企业已近1 500家。

在全民医保制度建设方面，由于中医药价格相对低廉，国家通过提高基本医保报销比例，将102种中成药和符合标准的中药饮片纳入了基本药物目录，鼓励中医药服务的提供和利用，在更大程度上满足基层群众的用药需求，使全民医保的效用得到放大的同时，推动了中药产业的发展。

目前，我国中药产业规模和技术水平大幅度提高，全国中药生产企业已近1 500家，中药已从丸、散、膏、丹等传统剂型，发展到现在的滴丸、片剂、膜剂、胶囊等40多种剂型，9 000余个品种，中药产品种类、数量、生产工艺水平有了很大提高。

由于中药材使用量急剧增加，许多地方将中药材的种植和加工纳入地区发展战略，作为推动地方经济发展、促进农民增收和调整产业结构的重要途径。

与此同时，中药企业走向国际市场的步伐加快，中药产品和服务贸易稳步发展，显示出巨大的市场发展潜力。目前中医药已传播到160多个国家和地区，成为我国服务贸易的重要组成部分。

（信息来源：经济日报）

To Select Extraction of Jiangan Granules by Orthogonal Test

YU Hai-bin1，ZHENG Hai-yun1，GONGWei-hong2
（1.Collaborating Center for TCM and Scientific Technology，China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing100700，China；2.School of Chinese Materia Medica，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing100102，China）

Objective：To experiment the bestextraction optimization prescription.Methods：Selectwater as solvent extraction，multiple choicewith water，extraction time and number as three factors，each of the three levels of design，in accordance with the orthogonal L9（34）Table experiment，the composition of total flavonoids as a symbol selected the optimal extraction.Results：The optimum extraction conditions for 8 times the amount of water，2 h as the extraction time and extracted three times.Conclusion：The optimized extraction process is simple，stable and feasible.

Orthogonal extraction；Total flavonoids；Jiangan Granule

*［通讯作者］郑海云，E-mail：jenny0113＠126.com