影响皮肤鳞状细胞癌和基底细胞癌转移潜能的相关因素＊

马 娜，郭瑞珍

(遵义医学院珠海校区病理学教研室，广东 珠海 )

同源于皮肤表皮的恶性肿瘤鳞状细胞癌(skin squamous cell carcinoma.SCC)和基底细胞癌(skin basal cell carcinoma.BCC)是两种常见肿瘤，它们同属于非黑素性瘤。临床上，两种肿瘤的生物学行为大不相同，就肿瘤的侵袭转移能力而言，SCC浸袭转移能力很强，而BCC却几乎不发生转移。本研究拟通过检测两组肿瘤组织中Survivin、Kai1、Cx43的表达，探讨这些细胞因子对皮肤SCC和BCC特有生物学行为的影响。

1 材料与方法

1.1 实验标本 收集2003～2007年遵义医学院第一、第五附属医院病理确诊的SCC和BCC标本。其中35例为BCC，男性22例，女性13例，中位年龄56岁，头面部30例，胸腹部5例。18例为SCC，男性12例，女性6例;中位年龄57岁;头面部10例，四肢6例，躯干2例。所有标本均经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，HE染色，光镜观察确诊。

1.2 主要试剂 Cx43 mRNA寡核苷酸探针原位杂交试剂盒，Kai1、Cx43多克隆抗体，购自武汉博士德公司，Survivin多克隆抗体，购自福州迈新公司。

1.3 实验方法 采用核酸分子原位杂交法检测Cx43 mRNA的表达，采用免疫组织化学方法(S－P法)分别检测Survivin、Kai1、Cx43蛋白的表达。

1.4 阳性结果判断标准 Cx43 mRNA以及Survivin、Cx43、Kai1三种蛋白阳性信号均呈棕黄色、颗粒状，Kai1蛋白阳性信号出现在细胞质和细胞膜中，其它检测指标阳性信号出现在细胞质中。阳性结果判定采用半定量积分法，根据每张切片的阳性细胞百分数及着色深浅计分。在400倍视野下，每张切片随机选取5个不同的视野，每视野计数100个细胞，分别记录每个视野的阳性细胞数量并计算其算术平均值。

1.5 统计学分析 全部资料运用SPSS 13.0软件包进行统计学分析。图像分析所得实验数据用均数±标准差(±s)表示，采用单因素方差分析和相关分析，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 Survivin、Kai1蛋白的表达 Survivin在 SCC组呈强阳性或阳性表达，在BCC组呈弱阳性表达(图1A～1B)，其表达水平(阳性面积)、表达强度(光密度)SCC组明显高于BCC组，差异有统计学意义(FPA=73.797，P=0.000 ＜ 0.05;FOD=25.638，P=0.000 ﹤ 0.05)。Kai1 蛋白在 SCC 中呈弱阳性或阴性表达，在BCC组织中呈阳性或弱阳性表达(图1C～1D)，SCC中的表达水平、表达强度明显低于BCC组，差异均有统计学意义(FPA=234.327，P=0.000 ＜ 0.05;FOD=131.407，P=0.000 ﹤0.05)(见表1)。

表1 SCC和BCC中Survivin和Kail蛋白的表达(±s)

表1 SCC和BCC中Survivin和Kail蛋白的表达(±s)

注:PA代表阳性面积/分析区面积，OD代表光密度，*P＜0.01 VS BCC组;#P＜0.01 VS BCC组。

组 别 n Survivin蛋白的表达Kai1蛋白的表达PA OD BCC 组 35 0.134 ±0.038 0.36 ±0.030 0.176 ±0.073 0.30 ±PA OD 0.026 SCC 组 18 0.595 ±0.194* 0.42 ±0.042* 0.049 ±0.061# 0.19 ±0.043#

2.2 Cx43蛋白、Cx43 mRNA的表达 Cx43蛋白在SCC组中呈弱阳性或阴性表达，在BCC组中呈阳性或弱阳性表达(图2A～2B)，其表达水平(阳性面积)、表达强度(光密度)SCC组均明显低于BCC组，差异有统计学意义(FPA=1 181.358，P=0.000 ﹤ 0.05;FOD=155.479，P=0.000 ＜0.05)。Cx43 mRNA在SCC组呈阴性或弱阳性表达，在BCC组呈阳性或弱阳性表达，SCC中的阳性细胞主要位于癌巢角化珠中，而癌巢周边癌细胞及低分化的细胞呈阴性表达(图2C～2D)。两组间的表达表达水平、表达强度差异有统计学意义(FPA=1727.692，P=0.000 ﹤ 0.05;FOD=92.204，P=0.000＜0.05)(见表2)。

表2 SCC和BCC中Cx43蛋白、Cx43 mRNA的表达(±s)

表2 SCC和BCC中Cx43蛋白、Cx43 mRNA的表达(±s)

注:PA代表阳性面积/分析区面积 ，OD代表光密度，*P＜0.01 VS BCC组;#P＜0.01 VS BCC组。

组 别 n Cx43蛋白的表达Cx43 mRNA 的表达PA OD BCC 组 35 0.101 ±0.024 0.31 ±0.031 0.121 ±0.026 0.28 ±PA OD 0.031 SCC 组 18 0.036 ±0.032* 0.21 ±0.012* 0.048 ±0.024# 0.20 ±0.015#

3 讨论

转移，是恶性肿瘤特有的生物学行为，只有恶性肿瘤才能发生转移，然而在临床上，多数恶性肿瘤的转移率很高，而个别肿瘤如皮肤基底细胞癌却几乎不发生转移。本组所检测的Survivin、Kai1、Cx43几项指标，其目的是探讨这些指标在SCC和BCC中的表达与肿瘤转移的关系。

Survivin是凋亡抑制基因，它的高表达，即凋亡抑制功能的发挥与肿瘤发生发展有关，近年施文荣等研究报道，Survivin mRNA转录水平在食管癌早期病变阶段即显著升高，且在癌变过程中持续维持较高转录水平［1］，这进一步说明Survivin与肿瘤发生的关系已是一个不争的事实。除此以外，还认为Survivin在肿瘤组织中的异常表达与肿瘤的浸润、转移及预后密切相关。在消化道的胃癌、大肠癌的研究中表明，Survivin呈现异常高表达，这种高表达与消化道多种肿瘤的转移呈正相关［2，3］。另外，贺荣芳等报道在惰性、侵袭性及高侵袭性T细胞淋巴瘤中，Survivin蛋白的阳性表达率依次增高，且三组之间比较差异具有统计学意义［4］。本组SCC和BCC两种肿瘤，SCC中Survivin的表达水平、表达强度比BCC明显增高，提示了:与BCC相比，SCC中Survivin的高表达可能与其侵袭转移能力较强的生物学特性有关。从理论上讲，Survivin的高水平表达，显示了其凋亡抑制功能的增强，从而使肿瘤细胞的凋亡受到抑制，而得以继续增殖并形成转移。另外，肿瘤血管的形成也与Survivin的高表达、促进肿瘤血管形成有关，血管的增生会提供更多的养分给肿瘤细胞，从而加速肿瘤细胞的生长和发挥其生物学行为。

Kai1基因属于肿瘤转移抑制基因，它的正常表达提示肿瘤转移特异性受到抑制，反之，它的低表达则肿瘤转移抑制解除，肿瘤发生转移。从机制上讲，当Kail表达降低时，调节肿瘤细胞间的同质性黏附作用减弱，解除了肿瘤细胞与细胞外基质的粘附，使肿瘤细胞易脱离原发灶，从而引起肿瘤转移。另外，Kail低表达时，肿瘤细胞的增殖反应和肿瘤生长速度加快，致使肿瘤细胞表现出生长快和易转移扩散的生物学特性。1998年有研究报道，Kail的低表达与多种肿瘤的转移密切相关［5］。之后，Tsutsumi等报道Kail的低表达可视为肿瘤转移发生的指征［6］，Liu等报道Kail表达水平与肿瘤转移潜能呈负相关［7］。本组研究结果提示，在SCC中Kai1蛋白的表达水平、表达强度均明显低于BCC，与BCC组织相比较，Kai1的低表达可能与SCC生长快和易转移扩散的生物学特性有关。

细胞间隙连接通讯(gap junction intercellular communication，GJIC)是细胞间的一种重要连接方式，基本结构单位是连接蛋白(connexin，Cx)，连接蛋白43(Cx43)是人体内一种主要的细胞间隙连接蛋白。研究认为，Cx43基因表达异常及其导致的GJIC功能改变与多种肿瘤的发生关系密切［8，9］。之后的研究还认为与肿瘤的转移有关。2012年蒋艳霞等报道Cx43在肝癌组织中呈现低表达，同时作者提出，检测肝癌组织中Cx43的表达情况可以预测肝癌的浸润和转移情况［10］。另有田志华等报道在正常胃细胞及低、中、高恶化胃腺癌细胞中，Cx43的mRNA和蛋白水平的表达量随恶化程度的增高而下调或缺失，并论述其下调或缺失可导致肿瘤的转移［11］。本组研究的两组肿瘤中，Cx43蛋白、Cx43 mRNA的表达水平、表达强度，表达差异有统计学意义(P＜0.01)。显示，Cx43低表达可能与SCC的发生有关，与SCC生长快，易转移扩散的生物学特性有关。分析其机制，Cx43表达降低直接影响到GJIC的结构以及功能的降低，从而使肿瘤细胞间的结合力下降，丧失了正常生长控制及免疫监视功能，使肿瘤细胞易于生长扩散和转移。

综上所述，SCC中Survivin呈现高表达，Kai1、Cx43呈现低表达，而BCC中Survivin呈现低表达，Kai1、Cx43呈现高表达，提示凋亡抑制功能，转移抑制功能和细胞间隙连接通讯功能在两种恶性肿瘤的生物学特性方面发挥的作用不尽相同，各种细胞因子相互作用，影响着两种同源性恶性肿瘤表现出不同转移潜能。

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