药理效应法对藏药熏倒牛不同提取工艺的评价△

景 明 李 炀 王晶晶 蔺兴遥 刘喜平 任 远

(1.甘肃中医学院，甘肃 兰州 730000;2.甘肃省中药药理与毒理学重点实验室，甘肃 兰州 730000)

藏药熏倒牛为蔷薇纲牦牛儿苗亚纲熏倒牛科植物B.iebersteiniacea的干燥地上部分，藏名译音为明见赛保，民间又称臭花椒、狼尾巴。主要分布于甘肃、青海、宁夏和四川(诺尔盖)等地［1］。具有消炎止痛，清热解毒，清血热，祛风毒的作用，用于治疗各种炎症、结核症、丹毒、疟疾、咽喉肿痛、胃痛、全身水肿、中风、虫蛇咬伤等［2］。对熏倒牛化学成分及药理作用的研究已有报道［3－4］，但用药理效应法评价熏倒牛提取工艺的研究尚未见报道。本实验采用药理效应法评价熏倒牛的提取工艺方法，为其开发和利用提供参考依据。

1 材料

1.1 药品与试剂:二甲苯(天津市德恩化学试剂有限公司，批号20070914);戊巴比妥钠(北京化学试剂公司，批号060222);其余试剂均为分析纯;熏倒牛药材经甘肃农业大学药用植物教研室陈垣教授鉴定为熏倒牛B.heterostemon。

1.2 仪器:RB－200智能热板仪(成都泰盟科技有限公司);BT125D电子分析天平(北京赛多利斯仪器有限公司);KQ－100超声波清洗器(昆山市超声技术有限公司);R－200旋转蒸发仪(瑞士BUCHI公司);HH－601恒温水浴锅(金坛市恒丰仪器公司)。

1.3 动物:昆明种小鼠，体质量(20±2)g，雌雄兼用，由甘肃中医学院实验动物中心提供，合格证号SCXK(甘)2011－0001;动物颗粒饲料由北京科奥协力饲料有限公司提供。

2 方法［5－6］与结果

2.1 不同工艺提取物的制备

2.1.1 传统水煎工艺提取物的制备:称取熏倒牛药材粉末200g，加15倍量水煎煮1.5h，滤取药液，药渣再用12倍量水煎煮1.5h，合并两次药液，滤过，滤液浓缩至200mL，备用。

2.1.2 传统水煎醇沉工艺提取物的制备:称取熏倒牛药材粉末200g，加15倍量水煎煮1.5h，滤取药液，药渣再用12倍量水煎煮1.5h，合并两次药液，滤过，滤液浓缩至1:1(g·mL－1)，搅拌下加入乙醇，使含醇度达70%，滤过，滤液回收乙醇后浓缩至200mL，备用。

2.1.3 醇提工艺提取物的制备称取熏倒牛药材粉末200g，加15倍量70%乙醇回流提取1.5h，滤取药液，药渣再用12倍量70%乙醇回流提取1.5h，合并两次药液，滤过，滤液回收乙醇后浓缩至至200mL，备用。

2.2 对小鼠热板法致痛的影响:选择痛阈值合格的雌性小鼠48只，随机分为4组，分别为空白对照组、水煎提取组、水煎醇沉组、乙醇提取组。按热板法测定每只小鼠痛阈值3次，取其平均值作为给药前痛阈值。各组分别灌胃给药，每只0.2 mL(10g原药材/kg)，对照组给予等容量蒸馏水，连续给药7d。末次给药后1h测定各小鼠痛阈值，并计算痛阈提高率。各组痛阈值提高率分别为水煎提取物46.49%、水煎醇沉提取物36.99%、乙醇提取物102.04%，表明70%乙醇提取物镇痛作用最明显。结果见表1。

痛阈提高率(%)=(给药后平均痛阈值－给药前平均痛阈值)/给药前平均痛阈值×100%

表1 熏倒牛提取物对小鼠热板致痛的影响(x±s，n=12)

2.3 对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响:小鼠48只，雌雄各半，随机分为4组，分别为空白对照组、水煎提取组、水煎醇沉组、乙醇提取组。各组小鼠右耳涂药1次，每次0.2mL(10g生药/kg)，空白对照组涂以等容量蒸馏水，连续3d，末次给药30min后，各给药组用蒸馏水洗去耳廓上的药物，并于右耳的内侧均匀涂以二甲苯，每只0.05mL，左耳作为对照。30min后处死动物，用直径8 mm的打孔器于左右耳对称处打下耳片，分别称重，计算各组动物的肿胀度，并计算肿胀抑制率。70%乙醇提取物能够显著抑制小鼠耳肿胀(P＜0.01)，水煎提取物、水煎醇沉提取物能够抑制小鼠耳肿胀(P ＜0.05)。结果见表2。

耳片肿胀度=致炎侧耳片质量(右)－对照侧耳片质量(左耳)

抑制率(%)=(对照组平均肿胀度－给药组平均肿胀度)/对照组平均肿胀度×100%

表2 熏倒牛提取物对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响(x±s，n=12)

3 讨论

熏倒牛植化研究发现其干燥全草含多量鞣质和多糖，在体外抗菌药效的跟踪研究中分离获得了β－谷甾醇、伞形花内脂、槲皮素、木犀草素－7－O－β－葡萄糖苷、山羊豆碱、反式－4－羟基山羊豆碱、甘露糖醇等6个生理活性物质［3］。虽然熏倒牛在民间的药用价值较大，但有关熏倒牛的研究报道并不多，并且多局限于成分分析的研究。我们通过药理效应研究熏倒牛的提取工艺，为其制剂提取工艺的优选及新产品开发提供科学依据。

［1］中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志(第一卷)［M］.北京:科学出版社，2004:415.

［2］杨永昌.藏药志［M］.西宁:青海人民出版社，1991:263.

［3］王维恩，张晓峰，沈建伟等.藏药熏倒牛化学成分研究［J］.天然产物研究与开发，2009，21:199－202.

［4］唐荣江，闵照华，党合群.藏药熏倒牛的实验药理研究［J］.西北药学杂志，1988，3(3):8 －9.

［5］陈奇.中药药理研究方法学［M］.北京:人民卫生出版社，2006:2942－3681.

［6］徐叔云，卞如濂，陈修，等.药理实验方法学［M］.第3版.北京:人民卫生出版社，2002:8821.