HPLC法测定活络镇痛片中淫羊藿苷的含量

刘晓燕

(江苏省泗洪县人民医院药剂科 223900)

HPLC法测定活络镇痛片中淫羊藿苷的含量

刘晓燕

(江苏省泗洪县人民医院药剂科 223900)

目的建立高效液相色谱法测定活络镇痛片中淫羊藿苷的含量测定方法。方法KromasilC18(5μm，250x4.6mm);流动相:甲醇 －0.4%磷酸溶液(55:45);检测波长:270nm，柱温:35℃。结果 淫羊藿苷在0.072～0.36μg范围内线性关系良好(r=0.9999)，平均回收率为99.18%(n=5)，RSD为1.89%。结论结果准确，重复性好，可用于该制剂的质量控制。

活络镇痛片;淫羊藿苷;含量测定;HPLC

活络镇痛片是由淫羊藿、天南星、红花、防风、白芷、当归等多味中药组成的复方制剂。具有舒筋活血，消瘀止痛。主要用于闪腰岔气，瘀血作痛，筋骨疼痛，腰痛、腿痛之功效。为控制该产品质量，保证疗效，我们参考相关文献［1－4］，用 HPLC法对其中的淫羊藿进行含量测定。

1 仪器与试药

UNICO UV－2102型紫外分析仪;JASCO 2000液相色谱仪，JASCO UV－1575紫外检测器，N2000色谱工作站;BRANSON SB3200超声波清洗器;Satorius BS 110S型电子天平。

淫羊藿苷对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用)，甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。

活络镇痛片样品与阴性样品均由江苏省洪州医药有限公司提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 KromasilC －18柱(4.6mmx250mm，5μm);流动相:甲醇 －0.4%磷酸(55:45);流速:1.0ml/min;柱温:35℃;检测波长:270nm;进样20μl。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于2500。

2.2 对照品溶液与供试品溶液的制备精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含淫羊藿苷8μg的溶液，摇匀，作为对照品溶液。取本品10片，除去糖衣，研细，混匀。取0.5g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷适量，加热回流提取至无色，药渣挥干，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率120W，频率50KHz)40分钟，放冷，称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液1ml，用稀乙醇定容至5ml，摇匀，作为供试品溶液。

2.3 阴性试验取缺淫羊藿药材的阴性样品适量。按“2.2”供试品溶液的制备项下制得阴性对照溶液，并分别精密吸取供试品溶液、阴性溶液与对照品溶液，注入色谱仪，结果阴性样品色谱在淫羊藿苷相应保留时间上没有干扰峰。

2.4 线性关系的考察淫羊藿苷的标准曲线的绘制精密称取淫羊藿苷对照品适量，置于50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，制成淫羊藿苷标准贮备液(36μg/ml)。精密吸取上述对照品溶液 1、2、3、4、5ml，分别用流动相稀释至10ml，摇匀，制成浓度分别为3.6、7.2、10.8、14.4、18.0μg/ml的对照品溶液。精密吸取上述对照品溶液各20μl注入液相色谱仪，测定，记录色谱图。以进样量(μg)为横坐标(X)，以峰面积积分值A为纵坐标(Y)，进行线性回归绘制标准曲线，计算得回归方程:Y=1883324.167X+289.84，R=0.99995，结果表明淫羊藿苷在0.072－0.36μg范围内呈良好的线性关系。

表1 对照品的标准曲线

2.5 进样精密度试验精密吸取同一浓度对照品溶液，依法测定，连续进样5次，测定峰面积，RSD为1.28%。

2.6 稳定性试验 同一样品供试液(批号040501)，每隔2小时测定一次，共测6次，其峰面积RSD为0.82%，表明样品在10小时内具有良好的稳定性。

2.7 重复性试验 分别精密量取同一批号(批号040501)样品5份，依法处理，测定，样品含量为2.587、2.592、2.596、2.582、2.584mg/g，RSD 为 0.22%。

2.8 回收率测定精密量取已知含量的样品(批号040501，含量为 2.588mg/g)5 份约 0.25g，各加入0.36mg/ml淫羊藿苷对照品溶液 1.5ml，依法处理，得供试品溶液。依法测定，并计算淫羊藿苷回收率为99.18%，RSD为1.89%，结果见表2

表2 加样回收率试验结果(n=5)

2.9 样品测定分别精密量取不同批号的活络镇痛片样品，按供试品溶液制备方法制备，如法测定，结果见表3

表3 样品含量测定结果

3 讨论

3.1 样品提取条件的选择在研究过程中分别进行了不同溶剂(稀乙醇、70%乙醇、95%乙醇、甲醇)、不同提取方法(加热回流、超声提取)和不同提取时间(20、30、40、50min)的比较，最后确定以稀乙醇超声40min。

3.2 由于该品种为中药复方制剂，样品所含成分较多，因此先将样品用三氯甲烷回流提取后取药渣进行样品的制备，以减少干扰。

［1］中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典(2002年增补本).北京:化学工业出版社，2000.8.

［2］张林，杨瑞琪.HPLC法测定复方蛾公口服液中淫羊藿含量［J］.黑龙江医学，2001:25(4):258－259.

［3］王树松，王晓风，徐铎等，HPLC法测定益肾口服液中淫羊藿含量［J］.解放军药学学报，2001，17(5):282－283.

［4］中华人民共和国药典委员会.中国药典(一部).北京:化学工业出版社，2000.

ObjectiveTo establish a HPLC method for the determination

of Icariin in Huoluo zhentong pian.MethodsHPLC was used to quantitative analysis.The kromasil C18 column(5?m，250x4.6mm)was used，and mobile phase was composed of methanol－0.4%H3PO4/Water(55:45).Detection wavelength was at 270 nm at 35℃.Result The linear range of methods was 0.072 ～0.36ug(r=0.9999)，the average recovery was 99.18%(n=5)with RSD=1.89% .ConclusionThe result is accurate and the reproducibility is good.The method can be used for quality control of Tinctura

Huoluo zhentong pian;Icariin;determination;HPLC

R284

B ［学科分类代码］310.4720

2012－04－05

1001—814X(2012)04—0020—02