壶瓶枣总黄酮抗氧化性研究

王迎进，闫瑾璠，赵雅琴，张书书，芦婧

（忻州师范学院生化分析技术研究所，山西忻州 034000）

壶瓶枣（Zizyphus jujuba cv.Huping）为鼠李科（Rhamnaceae）枣属植物果实。主要产于山西太谷、榆次、平遥、交城、清徐等地。壶瓶枣含有大量的黄酮类、有机酸、三萜类、环磷酸腺苷、维生素、微量元素等[1-2]。研究发现黄酮类化合物有抗炎、抗病毒、利胆、强心、镇静、镇痛、抗氧化、抗衰老、免疫调节和抗肿瘤等作用[3-4]。因而，黄酮类化合物以其营养及保健作用引人瞩目。近年来，有关枣类黄酮提取工艺和抗氧化性的研究屡见报道[4-5]，然而关于壶瓶枣黄酮抗氧化性方面的研究却鲜见报道。本研究采用超声强化提取的方法，提取了壶瓶枣黄酮，研究了壶瓶枣黄酮对羟基、超氧阴离子、DPPH 3种不同自由基的清除能力，旨在为壶瓶枣黄酮的进一步研究和开发奠定一些基础。

1 材料与仪器

1.1 材料

芦丁标准品：中国药品生物制品检定所，批号：100080-200707；壶瓶枣：产地山西省，太谷县；实验用水为蒸馏水，其它试剂均为分析纯。

1.2 仪器

752型紫外光栅分光光度计：上海精密科学仪器有限公司；RE-52AA旋转蒸发器：上海亚荣生化仪器厂；KQ3200DB型数控超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司；SHZ-D（III）型循环水式真空泵：河南豫华仪器有限公司；HH-S型恒温水浴锅：陕西太康生物科技有限公司。

2 方法

2.1 黄酮含量的测定方法

2.1.1 对照品溶液的制备

精确称取芦丁标准品适量，用甲醇溶解，定容于50mL容量瓶中，制得浓度为0.20mg/mL的对照品溶液。

2.1.2 最大吸收峰的确定

精确吸取芦丁对照品溶液2 mL，加5%亚硝酸钠溶液0.3 mL，摇匀后静置6 min，加10%硝酸铝溶液0.3 mL，摇匀后静置6 min，加10%氢氧化钠溶液4.0 mL，用蒸馏水定容至10 mL，摇匀，放置15 min，于400 nm～600 nm波长处扫描，结果在510 nm处有最大吸收。

2.1.3 标准曲线的绘制

精确吸取0.20 mg/mL芦丁对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，按照 2.1.2 实验方法在 510 nm 处测定其吸光度值。以吸收度为纵坐标，对照品溶液的浓度（mg/mL）为横坐标，得线性回归方程：Y=11.357X－0.002 9，r2=0.999 4。

2.1.4 黄酮的提取

壶瓶枣经去核，干燥，粉碎，过筛（60目）后得壶瓶枣粉。准确称取壶瓶枣粉50 g，加入250 mL石油醚于70℃回流脱脂两次，每次3 h，真空干燥。称取脱脂后枣粉20.00g，按料液比1∶20加入70%乙醇浸泡30min，超声功率105 W，提取温度70℃下超声提取0.5 h，过滤后得滤液和滤渣。滤渣再按上述方法提取2次，浓缩，定容至100 mL容量瓶，作为试样液。

2.1.5 黄酮含量测定

取试样液2.5 mL于10 mL容量瓶中，用蒸馏水稀释到刻度，分别移取1 mL稀释后试液于5个比色管中，按照2.1.2所述方法在510 nm处测定其吸光度值。根据标准曲线计算得壶瓶枣黄酮含量为0.264%。

2.2 自由基的生成及清除率的测定

2.2.1 羟自由基的生成及清除率的测定

按文献[6]方法测定。

2.2.2 超氧阴离子自由基的生成及清除率的测定

按文献[7]方法测定。

2.2.3 DPPH·自由基的生成及清除率的测定

按文献[8]方法测定。

3 结果与讨论

3.1 壶瓶枣黄酮对羟自由基的清除作用

壶瓶枣黄酮对羟自由基的清除效果见图1。

由图1可知，随着壶瓶枣黄酮浓度的增加，其对·OH自由基的清除率从19.85%逐渐增加到94.91%，说明壶瓶枣黄酮具有很强的·OH清除能力，并且量效关系明显。壶瓶枣黄酮试液和VC的IC50值分别为0.0072mg/mL和0.051mg/mL，当样品浓度为0.04mg/mL时，羟基自由基的清除率达到了88.98%。远高于同浓度VC的38.63%。

图1 壶瓶枣黄酮对羟自由基的清除作用Fig.1 The hydroxyl radical scavenging capacity of flavonoids from Zizyphus jujuba cv.Huping

3.2 壶瓶枣黄酮对超氧阴离子自由基的清除作用

壶瓶枣黄酮对超氧阴离子自由基的清除效果见图2（反应4 min时）。

图2 壶瓶枣黄酮对超氧阴离子自由基的清除作用Fig.2 The O2-·free radical scavenging capacity of flavonoids from Zizyphus jujuba cv.Huping

由图2可知，壶瓶枣黄酮对O2－·有较强的清除能力，当样品浓度为0.02 mg/mL时，羟基自由基的清除率达到了84.94%。在较低浓度0.002 5 mg/mL～0.03 mg/mL范围内，壶瓶枣黄酮对O2－·的清除率从20.05%增加到96.44%。壶瓶枣黄酮试液和VC的IC50分别为0.009 1 mg/mL和0.006 4 mg/mL，壶瓶枣黄酮试液清除能力略小于VC。

3.3 壶瓶枣黄酮对DPPH·自由基的清除作用

壶瓶枣黄酮对DPPH·自由基的清除效果见图3。

由图3可知，壶瓶枣黄酮对DPPH·具有很明显的清除作用，清除率随着浓度的增加而增大。清除能力与同浓度下的VC相当。壶瓶枣黄酮试液和VC的IC50分别为0.001 6 mg/mL和0.001 4 mg/mL。

4 结论

图3 壶瓶枣黄酮对DPPH·自由基的清除作用Fig.3 The DPPH·free radical scavenging capacity of flavonoids from Zizyphus jujuba cv.Huping

研究表明，壶瓶枣黄酮对·OH、O2－·和 DPPH·均具有明显的清除作用，而且对3种自由基的清除率与黄酮提取液的浓度存在明显的量效关系。壶瓶枣黄酮提取液对·OH、O2－·和 DPPH·3 种自由基 IC50值分别为0.007 2、0.009 1、0.001 6 mg/mL。对 3 种自由基清除能力总体强弱趋势是 DPPH·＞·OH＞O2－·。

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