胃癌组织中Cyr 61、VEGF表达的意义

史飞涛，秦守杰，孔武明

(焦作市人民医院消化内科，河南 焦作 454002)

富含半胱氨酸61(cysteine-rich 61，Cry 61)是CCN家族成员，是一种分泌型的细胞外基质蛋白，属即刻早期反应基因产物，具有促进细胞粘附、迁移、增殖及血管生成的功能。近年研究发现Cyr 61与肿瘤发生密切相关［1-2］。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是重要的促血管生成因子，在肿瘤血管形成中起重要作用。笔者采用免疫组织化学技术对胃癌患者组织标本进行Cry 61和VEGF检测，探讨Cyr 61和VEGF与胃癌的关系，对两者的相关性进行分析，从而为胃癌的临床治疗及预后判断提供理论依据。

1 材料和方法

1.1 材料 收集焦作市人民医院病理科2009～2010年手术切除的胃癌组织标本70例，其中男49例，女21例，年龄35～76岁，平均62.4岁。所有病例术前均未进行任何抗肿瘤治疗，术后均经病理检查确诊。另取20例距离肿瘤边缘不小于5 cm的正常组织作为对照。

1.2 主要试剂 兔抗人Cyr 61多克隆抗体、鼠抗人VEGF单克隆抗体购自Santa Cruze Biotech公司，免疫组化试剂盒及DAB显色剂购自武汉博士德公司。

1.3 实验方法 组织经甲醛固定，常规石蜡包埋，做4 μm厚连续切片，采用免疫组化SABC法检测Cyr 61、VEGF的表达情况。实验步骤严格按试剂盒说明书操作。石蜡切片脱蜡，以微波枸橼酸盐进行抗原修复，抗Cyr 61浓度为1∶200，VEGF抗体工作浓度为1∶100，DAB显色，苏木精复染，脱水，透明封片，显微镜下观察，用已知标准的Cyr 61和VEGF表达阳性的胃癌组织切片作为阳性对照;用磷酸盐缓冲液(PBS)代替I抗，作为阴性对照。

1.4 结果判定 采用双盲法，由两位有经验的病理科医师在不知道病理分级和临床资料的情况下读片。Cyr 61和VEGF均以胞质呈现棕黄色颗粒为阳性。根据染色阳性细胞占计数细胞总数的百分比分为：＜5%为阴性(-)，5% ～25%为弱阳性(+)，25% ～50%为阳性(++)，＞50%为强阳性(+++)，强阳性和阳性为高表达，弱阳性和阴性为低表达。

1.5 统计学处理 应用SPSS 17.0统计分析软件包进行统计学处理，计数资料采用t验，分类资料采用χ2检验和单因素方差分析，Cyr 61和VEGF的相关性用 spearman等级相关分析，检验水准 a=0.05。

2 结果

2.1 胃癌组织和癌旁正常胃组织中Cyr 61、VEGF蛋白的表达 20例癌旁正常胃黏膜组织中有6例Cyr 61蛋白染色，表达率为30%;70例胃癌组织中，52例Cyr 61蛋白染色阳性，表达率为74.3%，二者相比，差别有统计学意义(P＜0.01);而VEGF在癌旁正常胃黏膜组织和胃癌组织中分别有7例和53例阳性，表达率分别为35.0%和75.7%。Cyr 61和VEGF阳性染色主要定位于胃癌癌细胞的胞质，细胞核无染色;间质细胞散在着色，表达阳性的肿瘤细胞多位于浸润前沿。

2.2 Cyr 61和VEGF的表达与胃癌临床病理特征的关系 Cyr 61和VEGF在胃癌组织中的表达与患者年龄、性别、病理类型、肿瘤直径大小及位置无关(P＞0.05)，Cyr 61与胃癌组织的浸润深度、淋巴结转移及Dukes’分期密切相关(P＜0.05)。随着肿瘤浸润深度的增加，Cyr 61表达呈上升趋势，其差异有统计学意义(P＜0.01);淋巴结转移组的Cyr 61阳性表达率显著高于无淋巴结转移组的阳性率(P＜0.01);Dukes’C、D 期 Cyr 61 阳性表达率明显高于A、B期，差异有统计学意义(P＜0.01)。VEGF与胃癌组织的浸润深度、淋巴结转移及Dukes’分期也密切相关(P＜0.05)。随着肿瘤浸润深度的增加，VEGF表达呈上升趋势，差异有统计学意义(P＜0.01);淋巴结转移组的VEGF阳性表达率显著高于无淋巴结转移组(P ＜0.01)，Dukes’C、D 期 VEGF表达明显高于 A、B期，差异有统计学意义(P＜0.01)，见表1。

表1 Cyr 61和VEGF的表达与胃癌临床病理特征的关系

2.3 Cyr 61和VEGF表达的相关性 70例胃癌组织中Cyr 61和VEGF表达共阳性者39例，Cyr 61和VEGF表达共阴性者16例，Cyr 61表达阳性而VEGF表达阴性者11例，Cyr 61表达阴性而VEGF表达阳性者14例，表达一致率为78.6%(55/70)，Spearman等级相关分析表明二者之间表达呈正相关(P ＜0.05)。

3 讨论

研究发现，在不同的组织细胞及肿瘤中，Cyr 61的表达水平不同，其功能也不相同。Cyr 61在乳腺癌、神经胶质瘤、骨肉瘤中高表达，促进肿瘤细胞的增殖和肿瘤组织血管形成［3-4］，但Cyr 61在前列腺癌、非小细胞肺癌、子宫内膜癌、子宫平滑肌瘤中低表达，起到类似抑癌基因的作用［3-6］。Lin等用免疫组织化学染色方法检测Cyr 61在胃癌的表达水平，结果发现Cyr 61的表达与淋巴结转移及肿瘤分期相关;Cyr 61高表达组的5 a无病生存率低于低表达组，且更易早期复发［7］。Hong等研究发现，Cyr 61在非家族性腺瘤性息肉病或非其他遗传性的早期结直肠癌黏膜内的表达水平较正常对照组明显上调，且互相独立表达［8］，表明黏膜内Cyr 61等基因的表达上调可能预示了早期结直肠癌的发生。该研究发现，Cyr 61在胃癌组织中呈高表达，明显高于癌旁正常黏膜组织，同时发现，Cyr 61蛋白的表达与胃癌的浸润深度、淋巴结转移及Dukes’分期呈正相关，这与Lin等的研究结果一致［9］。

大量研究证明，血管生成是肿瘤生长、侵袭、转移的基本要素，新生血管的形成在肿瘤发生、发展的过程中起重要作用。VEGF是促进血管生成的重要因子，是一种具有肝素结合性的同源二聚体糖蛋白，由多种细胞分泌，以旁分泌的方式通过酪氨酸激酶受体特异性地作用于内皮细胞，对内皮细胞产生促分裂、增生和趋化作用，并能增强血管通透性，有利于血浆、纤维蛋白外渗，促进血管形成［9］。

VEGF与胃癌的浸润深度、淋巴结转移及临床分期也存在相关性。目前，大多数研究认为MVD(multivessel coronary artery disease)值高是肿瘤预后不佳的指标。张宏图等研究也发现胃癌患者血清VEGF浓度高于健康对照者，与胃癌浸润深度、淋巴结转移、远处转移、肿瘤分期密切相关［11］。本研究结果表明VEGF的表达与患者年龄、性别、病理类型、肿瘤直径大小及位置无关(P＞0.05)，VEGF与胃癌组织的浸润深度、淋巴结转移及Dukes’分期密切相关(P＜0.05)。随着胃癌浸润深度的加深、淋巴结的转移和临床病理分期的增加，VEGF阳性表达率增加，因此认为VEGF与肿瘤恶性程度呈正相关，可以作为评价胃癌增殖、判断肿瘤侵袭力的重要标志。

Cyr 61表达阳性率高的胃癌组织切片中，VEGF表达阳性率也增高，表达一致率为78.6%(55/70)，并且表达部位基本一致，提示在胃癌组织中，Cyr 61可能上调VEGF的表达参与肿瘤血管的生成，结果显示Cyr 61作为胃癌恶性指标在临床上有一定价值;同时提示肿瘤细胞可能通过调节Cyr 61蛋白表达水平对下游VEGF的表达进行调控，以促进肿瘤血管的生成。临床上联合检测Cyr 61、VEGF的表达可能有助于判断胃癌的预后。

［1］孙世俊，司维柯，丁 伟，等.Cyr 61与 β-catenin在肝癌组织和细胞株中表达的相关性研究［J］.第三军医大学学报，2008，30(6)：485-488.

［2］Huang X，Xiao DW，Xu LY，et al.Prognostic significance of altered expression of SDC2 and Cyr 61 in esophageal squamous cell carcinoma［J］.Oncol Rep，2009，21(4)：1 123-1 129.

［3］Chien W，Kumagai T，Miller CW，et al.Cyr 61 suppresses growth of human endometrial cancer cells［J］.J Biol Chem，2004，279(51) ：53 087-53 096.

［4］Tong X，O’Kelly J，Xie D，et al.Cyr 61 suppresses the growth of non-small-cell lung cancer cells via the beta-catenin-c-myc-p53 pathway［J］.Oncogene，2004，23(28) ：4 847-4 855.

［5］崔玲玲，孙锦峰，王旗，等.肺癌组织中Cyr 61基因表达及临床意义［J］.肿瘤，2007，27(4) ：286-289.

［6］Chen PP，Li WJ，Wang Y，et al.Expression of Cyr 61，CTGF and WISP-1 Correlates with Clinical Features of Lung Cancer［J］.PLoS One，2007，20，2(6)：e534.

［7］Lin MT，Zuon CY，Chang CC，et al.Cyr 61 induces gastric cancer cell motility/invasion via activation of the integrin/nuclear factorkappaB/cyclooxygenase-2 signaling pathway［J］.Clin Cancer Res，2005，11(16)：5 809-5 820.

［8］Hong Y，HoK S，Eu KW，et al.A susceptibility gene set forearly onset colorectal cancer that integrates diverse signaling pathways：implication for tumorigenesis［J］.Clin Cancer Res，2007，13(4)：1 107-1 114.

［9］Lin MT，Chang CC，Lin BR，et al.Elevated expression of Cyr 61 enhances peritoneal dissemination of gastric cancer cells through integrin alpha-betal［J］.J Biol Chem，2007，282(47)：34 594-34 604.

［10］Ferrara N.Vascular endothelial growth factor：basic science and clinical progress［J］.Endocr Rev，2004，25(4)：581-611.

［11］张宏图，胡 祥.血清中血管内皮生长因子与胃癌侵袭和转移的关系［J］.世界华人消化杂志，2003，11(3)：344-345.