植物提取物对草鱼非特异性免疫功能的影响

湖南农业大学动物科技学院 龚向胜 王红权 赵玉蓉＊ 王小娜 金柏涛

植物提取物作为具有增强免疫功能和营养效应的饲料添加剂，在生猪生产中应用已取得较好效果，而在水产养殖中应用仍鲜见报道。本试验研究了植物提取物对草鱼非特异性免疫功能的影响，为草鱼的免疫增强剂开发提供试验依据。

1 材料与方法

1.1 试验饲料 试验采用的植物提取物由粗老茶叶、甜橙皮、桔子皮、马齿苋、野菊花、苦荞等天然植物经提取后的有效成分科学配制而成，主要有效成分为茶多酚、植物多糖、皂甙、类黄酮、植物精油等。由湖南省五季风生物科技有限公司提供。

1.2 试验设计 采用单因子试验设计，将平均体重（89±1.7）g的健康草鱼随机分为4个处理，每个处理3个重复，每个重复放养25尾鱼。各处理分别在基础日粮中添加0%、0.05%、0.10%和0.15%植物提取物，饲养期为68 d。

1.3 日粮组成及营养水平 试验用日粮原料购自湖南安乡正园饲料有限公司，无异味，无杂质，外观符合要求。根据草鱼配合饲料营养标准（SC/T 1024-1997）配制基础日粮，其组成及营养水平见表1。

1.4 试验动物及饲养管理 试验草鱼由湖南省大通湖天泓渔业股份有限公司千亩湖渔场提供，平均体重（89±1.7）g，体质健壮，大小均匀。

表1 基础日粮组成及营养水平 %

为适应试验饲料及环境，试验前对试验草鱼集中驯养2周，试验开始时鱼体称重分组，并将鱼的体重调整至各组间差异不显著（P＞0.05）。网箱置于水深2 m左右面积50亩的湖内。每天的上午 8∶00 ～ 9∶00 和下午 16∶00 ～ 17∶00 进行投喂，日投喂量为鱼体重的3%，考虑草鱼生长因素每7 d调整投喂量。饲养期间水温24～29℃。养殖试验在湖南省益阳市大通湖区天泓渔业股份有限公司养殖基地进行。

1.5 测定指标与方法 饲养结束，每口网箱取鱼3尾，麻醉尾静脉处采血，3000 r/min，离心10 min，取血清冷冻备用。测定血清总超氧化物歧化酶（SOD）、溶菌酶（LSZ）、过氧化氢酶（CAT）和丙二醛（MDA）含量，采用南京建成生物工程研究中心提供的试剂盒测定，试验过程严格按照试剂使用要求进行。

1.6 数据统计与分析 试验数据采用SPSS 16统计软件进行单因素方差分析，并进行LSD多重比较，P＜0.05表示差异显著。

2 结果

2.1 植物提取物对草鱼血清总SOD的影响 由表2可知，日粮中添加植物提取物可显著提高草鱼血清总SOD活力 （P＜0.05），与对照组相比，0.05%、0.10%和0.15%植物提取物组SOD活力分别提高31.09%、24.29%和14.55%（P＜0.05）。

表2 不同植物提取物添加水平对草鱼血清生化指标的影响

2.2 植物提取物对草鱼血清LSZ的影响 由表2可知，日粮中添加一定剂量植物提取物可提高草鱼血清LSZ活力 （P＜0.05），与基础组相比，0.05%植物提取物组LSZ活力显著提高16.96%，0.10%和0.15%植物提取物组LSZ活力分别降低2.83%和6.36%（P＞0.05）。

2.3 植物提取物对草鱼血清CAT的影响 由表2可知，日粮中添加一定剂量植物提取物可提高草鱼血清CAT活力，与基础组相比，0.05%植物提取物组CAT活力显著提高11.29%（P＜0.05），0.10%和0.15%植物提取物组CAT活力分别降低6.49%和8.59%（P＞0.05）。

2.4 植物提取物对草鱼血清MDA的影响 由表2可知，日粮中添加植物提取物可显著降低草鱼血清MDA含量（P＜0.05），与基础组相比，0.05%、0.10%和0.15%植物提取物组MDA含量分别显著降低5.47%、13.41%和17.16%（P＜0.05）。

3 讨论

从食性上讲，植物提取物作为免疫增强剂，草食性鱼类相对其他食性鱼类饲喂的效果会更好。血清总SOD活性变化可体现动物机体清除自由基能力和抗氧化的能力强弱，对吞噬细胞防御能力和整个机体的免疫能力也具有重要影响作用（牟海津，1999）。SOD是一种机体抗氧化酶，在防御机体衰老和生物分子损伤等方面具有极为重要的作用，其能催化超氧阴离子自由基发生歧化反应，从而清除超氧阴离子自由基，减小超氧阴离子在生物体内的积聚，并阻止其转化为自由基，维持胞内氧自由基处于低量状态（Achuba，2002；Roche 和 Boge，1996；谢巧雄和朱心玲，1996）。 王红权等 （2010）研究表明，壳聚糖对草鱼血清总SOD活性有提高作用。本试验结果表明，与对照组相比，植物提取物具有显著提高草鱼血清总SOD活性作用。最终起作用的可能是其有效成分植物多糖、茶多酚和类黄酮等。冷向军等（2008）研究表明，杜仲叶粉或杜仲叶提取物可不同程度地提高草鱼血清总SOD活性，增强机体非特异免疫功能。可见，杜仲叶提取物与本试验中的植物提取物对草鱼血清总SOD活性有一致影响效果。本试验结果表明，植物提取物能提高草鱼血清SOD活性，说明其有效成分具有清除自由基和抗氧化、保护机体的作用。

LSZ是破坏细菌细胞壁的酶，其活性大小可以在一定程度上反映鱼体抵抗细菌侵袭的能力。LSZ是存在于鱼类的吞噬细胞、血清中的一种水解酶，对各种微生物病原体均具有重要的防御作用（王玲等，2008）。本试验结果表明，与对照组相比，饲料中添加一定剂量的植物提取物能够提高草鱼血清LSZ活性，这是植物提取物中有效成分作用的结果。而日粮中添加植物提取物的剂量有一定范围，超过一定界值时就表现出LSZ的活性开始下降。本试验选择的三个梯度剂量中，0.05%添加量为最佳。

CAT是清除鱼机体氧自由基的重要抗氧化物酶。在正常的鱼体内，其内环境中自由基的产生与消除处于动态平衡中。当CAT活性降低时，鱼体内自由基过多可破坏体内一些重要的生化过程，导致正常生理功能失调、体内免疫水平下降，潜在的病原被激活，使鱼体发病（李婵等，2008；周进等，2003）。本试验中，添加一定剂量的植物提取物对草鱼血清CAT活性有提高作用。

血清MDA是动物脂质过氧化物的主要分解产物。MDA含量升高实际上是氧自由基产生过多，使体内脂质过氧化物增加。脂质过氧化物进一步分解，可产生大量的醛类、醇类和烃类，其中MDA是具有很强生物毒性的物质，会对机体造成伤害（刘波等，2008）。目前，有关植物提取物对水产动物血清MDA量影响的报道较少。本试验结果表明，饲料中添加三种不同剂量植物提取物均可使MDA含量显著降低，分别较对照组降低5.47%、13.41%、17.16%，可见三个剂量中随剂量的增加，下降幅度增大。说明在饲粮中添加植物提取物，可增强草鱼血清的抗氧化能力，减少体内氧自由基，降低MDA含量。

4 结论

本试验结果表明，植物提取物具有调节和提高草鱼的非特异性免疫能力的作用，其最适添加水平为0.05%。

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