气虚体质及CYP2E1基因多态性与抗结核药物性肝损伤的关系

周 敏 毛敏杰 朱 敏 李凫坚 尹良胜 李 锋

杭州市红十字会医院结核科 (浙江杭州，310003)

结核病治疗的特点是疗程长、多种药物联合使用，易造成药物性肝损伤。我国结核病疫情严重，抗结核药物所致肝损伤的发生率高，多篇文献报道，我国抗结核药物性肝损伤的发生率居各类药物性肝损伤的首位［1，2］，严重影响结核病的控制，因此，需积极采取有效的防治措施，减少肝损伤的发生，使治疗得以顺利进行。我们在临床工作中发现，抗结核治疗中是否出现肝损伤，与先天禀赋、体质差异密切相关。另有研究表明CYP2E1基因多态性与抗结核药物性肝损伤密切相关，其中CI/CI基因型是其独立危险因素［3］。因此，本研究拟分析抗结核药物性肝损伤患者常见体质状况及其CYP 2E1基因多态性分布频率，以探讨该病的早期防治措施。

1 资料与方法

1.1 一般资料 研究对象均为杭州市红十字会医院结核科住院患者，以其中抗结核治疗出现药物性肝损伤的100例患者为肝损伤组，以该院同期抗结核病治疗无肝损伤的100例患者为对照组。诊断及纳入标准：依据药物性肝病的诊断标准［4］及国际会议 (RUCAM)提供的评价方法［5］，明确诊断抗结核药物性肝损伤的患者。结核病诊断依据1999年我国制定的结核病分类诊断标准［6］。

1.2 研究方法 ①中医体质学分型 采用目前较为公认的王琦教授中医体质辨识量表，划分为平和质、特禀质、气虚质、阳虚质、阴虚质、痰湿质、湿热质、瘀血质和气郁质9型进行研究。②CYP 2E1基因多态性检测 DNA提取：分别取外周血标本1ml，采用血基因组DNA小量提取试剂盒 (AXYGEN生物技术有限公司)提取 DNA，按试剂盒说明书操作，-20℃保存。PCR扩展：P450-2E1 Rsa I目的片段上游 引 物 CYP2E1-F1：5'-AGCTGACTCTGCTGCTCTCAA-3'，下游引物CYP2E1-R1：5'-GAGCTCCACATTGACTAGCTTCT-3'。PCR 反应体系 20μl：Taq EX TM(5U/μl)1.25U，模板 200ng，10 × EX Taq Buffer 2μl，dNTP(2.5mM)2μl，上 游 引 物 CYP2E1-F1(20μM)0.15μl，下 游 引 物 CYP2E1-R1(20μM)0.15μl，双蒸水补足至 20μl。PCR 扩展条件：94℃预变性5分钟，94℃变性30秒，54℃退火30秒，72℃延伸45秒，30个循环，最后72℃延伸5分钟。酶切及电泳：PCR产物经PCR清洁试剂盒 (AXYGEN生物技术有限公司)纯化后采用Rsa I酶切，酶切体系20μl(10 ×Buffer T 2μl，0.1%BSA 2μl，PCR产物1μg，Rsa I酶 1μl及双蒸水)，37℃酶切 4小时。酶切样品经2%琼脂糖凝胶电泳，5V/cm电压，EB染色，在凝胶成像系统下观察。

1.3 统计学方法 数据采用SPSS 16.0统计软件进行处理。组间比较采用单因素方差分析;组间频率的比较采用χ2检验。

2 结果

2.1 体质类型分布频率比较 肝损伤组患者气虚质分布频率明显高于对照组 (P＜0.05)，结果见表1。

表1 两组患者体质类型分布频率比较

2.2 CYP 2E1基因型在两组间分布频率比较 见表2。肝损伤组患者中Rsa I cl/cl基因型65例 (65%)，c1/c2基因型 32例 (32%)，c2/c2基因型 3例(3%)，c1和c2等位基因频率分别为0.81和0.19;对照组患者Rsa I cl/cl基因型51例 (51%)，c1/c2基因型45例 (45%)，c2/c2基因型4例 (4%)，cl和c2等位基因频率分别为0.735和0.265。肝损伤组 cl/cl基因型分布频率明显高于对照组 (χ2值7.686，P＜0.05);cl/c2和c2/c2基因型的分布频率在两组中差异无统计学意义 (P＞0.05)。

表2 两组患者CYP2E1基因型分布频率比较［n(%)］

2.3 气虚体质类型患者CYP 2E1基因型分布频率比较 见表3。由于9种类型中医体质在肝损伤组及对照组患者中均有体现，影响不同体质患者样本量分布，气虚体质标本量少，与CYP 2E1基因型分布的关联及其差异不能进行有意义的比较。

表3 气虚体质患者CYP2E1基因型分布频率比较［n(%)］

3 讨论

3.1 气虚体质研究现状 气虚体质是以体质要素中气的虚弱、机体脏腑功能状态低下为主要特征的一种体质状态。作为常见体质分型的一种，气虚体质在历代医家的论述中可找到诸多依据，叶天士在《临证指南医案》中所谓之“虚人”、 “弱质”、 “体质气弱”、“体质本怯”、“气虚之质”、“元气素亏之体质”皆指的是气虚体质。《灵枢·逆顺肥瘦》认为瘦人有“易脱于气”的体质特点，属于潜在性气虚体质。现代亦有许多学者将气虚体质划为体质类型的一种，如：王琦将中医体质分为正常质、阴虚质、阳虚质、痰湿质、湿热质、气虚质、瘀血质、气郁质、特异质9型［7］。本次研究表明，药物性肝损伤患者气虚体质分布频率明显升高，气虚体质与肝损伤密切相关，此次体质问卷调查表明，该体质主要体现为气虚能量不足，患者在肢体活动上表现为不喜欢运动，在心理上表现为对外界事物缺乏兴趣，对情绪的控制能力不足，情绪容易波动，影响肝疏泄功能而引起病变。另外，抗结核治疗过程中亦可形成气虚体质。《素问·刺志论》云：“谷盛气盛，谷虚气虚。”说明了饮食水谷缺乏，可导致气的生成减少，是形成气虚体质的原因之一。《灵枢·寿夭刚柔论》中言：“忧恐忿怒伤气，气伤脏，乃病脏”。说明精神刺激也可成为气虚体质的成因之一。临床上，抗结核治疗过程中常导致胃肠道副反应，出现恶心呕吐、纳食下降，气血生化不足，且抗结核治疗疗程长，长期忧愁恐惧，超过了脏腑正常的调控能力，就会耗伤脏腑气血，形成气虚体质。本次研究表明，气虚体质是抗结核药物性肝损伤形成的内在因素，且两者相互影响，为抗结核药物导致肝损伤的防治提供了一定的理论依据。

3.2 基因多态性与体质 人类基因组学研究显示，在不同人群中存在着基因多态性差异，并且表现为对疾病的不同易感性。而中医体质学说认为，体质决定着病证种类的倾向性，又是决定病性、病位、病程阶段和病变趋势的重要因素。因此，可从基因表型的定位确定疾病相关基因为切入点，诠释体质与疾病易感性的有关机理。本研究结果表明，肝损伤组CYP 2El RsaI c1/c1基因型明显高于对照组，说明CYP2El基因多态性与抗结核药物性肝损伤密切相关，c1/c1基因型是结核病患者治疗过程中出现肝损伤的高危因素。但因受样本量限制，对气虚体质与CYP 2El基因型的关联性不能进行有意义的比较，进一步研究中需增加标本量及比较两者的差异及关联，利用基因组学的研究结果从微观角度探求体质类型产生的遗传基础。

3.3 抗结核药物性肝损伤的防治 体质具有相对稳定性，在一定范围内通过调治，可使体质状况趋于正常。气虚体质是抗结核药物性肝损伤患者最常见的体质类型，是该疾病形成的内在基础，针对气虚体质，给予恰当的体质调养，对预防肝损伤有重要作用。“劳者温之，损者益之”，为气虚体质的治疗确立了总的原则，医学大家李东垣创立甘温除大热之法及益气补中之方，亦是对气虚体质治疗学的发展，明代薛己指出“劳伤者，过于劳役，损伤元气，脾胃虚衰，不任风寒，故昏冒也，用补中益气汤。”为劳伤日久之气虚体质提供了治法。我们临床上针对气虚体质，重视调理脾胃，运用补气健脾方法，积极改善患者的气虚体质，减少药物性肝损伤的发生率，有利于未病先防，体现“治病求本”的治疗原则。另外，气虚患者情志方面常表现为情绪低沉、抑郁。《素问·上古天真论》云“恬淡虚无，真气从之”，在养生延寿方面非常重视七情调畅，以促进健康体质的形成。因此，对结核病患者应进行心理调节，多给予关心、开导，增强其对结核病的认识，消除其对结核病的恐惧心理，树立积极乐观的治病态度。这有助提高患者接受规范治疗的依从性及治愈率，减少药物副反应发生，有利于结核病疫情的控制。

［1］周世明，贾杰.696例药物性肝损伤药物的临床分析 ［J］.药物与临床，2007，4(6)：442-443.

［2］王继美，张松贞.2942例药物性肝损伤文献分析 ［J］.药物流行病学杂志，2009，12(2)：101-104.

［3］LEE SW，CHUNG LS，HUANG HH，et al.NAT2 and CYP2E1 polymorphisms and susceptibility to first-line anti-tuberculosis drug-induced hepatitis［J］.Int J Tuberc Lung Dis，2010，14(5)：622-626.

［4］中华医学会消化病学分会肝胆疾病协作组.急性药物性肝损伤诊治建议 (草案) ［J］.中华消化杂志，2007，27(11)：765-767.

［5］DANAN G，RENICHOU C.Causality assessment of adverse reactions to drugs-1.A novel method based on the conclusions of international consensus meetings ：application to drug-induced liver in juries［J］.J Clin E pidemiol，1 993，46：1 323-1330.

［6］叶任高.内科学［M］.第六版.北京：人民卫生出版社，2004：39-57.

［7］王琦.9种基本中医体质类型的分类及其诊断表述依据 ［J］.北京中医药大学学报，2005，28(4)：1-8.