高危型HPV与Survivin基因在CIN和SCC诊断预测中的临床意义

张桂荣，何 凯，毛慧玲

（齐齐哈尔医学院第五附属医院（大庆龙南医院），黑龙江 大庆 163453）

高危型HPV与Survivin基因在CIN和SCC诊断预测中的临床意义

张桂荣，何 凯，毛慧玲

（齐齐哈尔医学院第五附属医院（大庆龙南医院），黑龙江 大庆 163453）

宫颈癌（squamous cervical cancer，SCC）的发生、发展与人乳头瘤病毒（human papilloma virus，HPV）感染和细胞凋亡的调控有密切的关系［1］。许多研究表明，高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）是导致宫颈癌的主要原因［2］为了进一步提高早期诊断率，有必要寻找更为客观、可靠的指标。大量研究表明，Survivin在宫颈癌组织中表达升高，并且与宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）的等级有明显的相关性，因此，Survivin对宫颈癌的预测有重要临床价值，然而，癌细胞中Survivin的表达受几条信号传导途径的调节，其中的某些细胞与HPV共用的［3］，我们认为Survivin也可作为HR-HPV和CIN标记物诊断及预测宫颈癌，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2008年1月-2011年1月因CIN或SCC在我院就诊的患者102例，年龄在21-68岁，平均（42.6±9.3）岁，临床资料和随访记录完整。其中宫颈鳞癌46例，宫颈上皮内瘤变56例。对照组58例，为非宫颈病变手术切除正常宫颈组织标本。

1.2 检测方法

1.2.1 HPV检测 石蜡常规包埋切片，水化，枸橼酸盐缓冲液微波修复抗原15min，免疫组化采用EnVision法，操作步骤按说明书进行。HPV阳性标准为细胞膜和（或）细胞质出现棕色颗粒。

1.2.2 原位杂交法检测Survivin mRNA表达：采用免疫组化方法。均按照标准的程序操作。地高辛标记的Survivin mRNA寡核苷酸探针检测石蜡包埋组织的Survivin mRNA序列：切片脱蜡，0.5%H2O2室温处理30min，加3%柠檬酸稀释的胃蛋白酶，37℃消化，暴露Survivin mRNA核酸片段，滴加预杂交液，42℃恒温4h，滴加杂交液，42℃恒温箱过夜，梯度SSC洗涤，依次滴加封闭液，生物素化鼠抗地高辛，SABC，DAB显色，复染，透明，封片镜检。以不加Survivin探针只加预杂交液作为阴性对照。

1.2.3 结果判定 所有切片采用双盲法，由有经验的病理科医师阅片。根据显色结果进行半定量积分法判断。将结果分为四个级别：阴性为光镜下看不到明显的染色结果；轻度表达为染色散在单个细胞内或者鳞状上皮弱的扩散染色，染色为淡黄色者；中度表达为染色呈黄色，阳性结果主要在胞浆和细胞核；重度表达染色呈棕黄色者。

1.3 统计学处理方法

采用SPSS13.0统计学软件进行处理，率的比较采用χ2检验或Fisher精确概率法，相关性检验采用Spearman等级相关分析。

2 结果

2.1 HPV与Survivin表达的相关性102份标本中检出 HR-HPV 70例（68.6%），Survivin的阳性率及阳性细胞的分布、着色的强度在HPV感染的不同病变中均有不同，并随着细胞数量的增加，着色增强，与宫颈病变程度相关。HPV与Survivin在CIN及SCC组织中的表达呈显著相关（χ2＝20.21，P＜0.05）。

表1 HR-HPV与Survivin在宫颈上皮内瘤变中表达的相关性

2.2 在CIN和SCC中的表达的相关性见表2。从表中可以看出，HPV与Survivin在CIN和SCC组织中均有较高的表达，病变级别越高则阳性率越高，着色越强，说明了Survivin增生指数与病变进展有关。经等级相关性分析，HPV与Survivin在宫颈鳞癌和宫颈上皮内瘤变组织中的表达呈显著相关性（χ2＝17.34，P＜0.05）

3 讨论

Survivin基因是1997年由AMBROSINI等［4］发现的凋亡抑制基因家族的新成员，是目前发现的最强的凋亡抑制因子。Survivin在人类几乎所有肿瘤组织中呈阳性表达。研究表明在CIN和SCC中的阳性表达与其分级有关［5］。Survivin的高表达可以促进细胞增殖，因此认为Survivin可能是一种癌基因，与肿瘤的发生、发展和预后密切相关［6］。本研究表明CIN至SCC的发展，Survivin阳性率逐渐上升，CIN I级阳性率为55.6%，CINII级阳性率为83.3%，CIN III级阳性率为93.1%，CIN 组阳性率为85.7%，SCC组阳性率为97.8%，差异具有统计学意义（P＜0.05）。

表2 二组的Survivin表达情【例（%）】

HPV持续性感染是引起CIN的主要病毒治病因子，尤其是高危型HPV［7］几乎在所有的宫颈癌中均有发现，而且HR-HPV的持续表达常导致治疗的失败。本研究发现SCC组HR-HPV的阳性率高于CIN组，提示HR-HPV与Survivin基因具有一定的相关性。

总之，Survivin和高危型HPV，可作为有价值指标应用于宫颈癌高危人群筛查，以利于宫颈癌的防治和早期诊断。

［1］Demaria S，Pikarsky E，Karin M，et al.Cancer and inflammation：promise for biologic therapy［J］.J Immunother，2010，33（4）：335.

［2］何惠仪，卢丽娜，杜 洪，等.Ki-67、Survivin、p16表达在宫颈癌和宫颈癌前病变诊断中的意义［J］.中国妇幼保健，2006，21（13）：1825.

［3］Lee JP，Chang KH，Han JH，et al Survivin，a novel antiapoptosis inhibitor，expression in uterine cervical cancer and relationship with prognostic factors［J］.Int J Gynecol Cancer，2005，（1）：113.

［4］Ambrosini G，Adida C，Alteri D C.A novel anti-apoptosis gene，survirin expressed in cancer and lymphoma［J］.NAT Med，1997，3（8）：917.

［5］Branca M，Giorgi C，Santini D，et al.Survirin as a marker of cervical intraepithelial neoplasia and high-risk human papilloma virus clearance and prognosis in cervical cancer［J］.Am J Clin Pathol，2005，124（1）：113.

［6］Bulk S，Visser O，Rozendaal L，et al.Cervical cancer in the NETHERLANDS 1980-1998：Decrease of squamous cervical cancer in older women，increase of adenocarcinoma in younger women［J］.Int J Cancer，2005，113（6）：1005.

［7］车雅敏，王家璧.HPV在宫颈癌发病中的作用机制研究［J］.国外医学·肿瘤学分册，2004，31（4）：306.

1007－4287（2012）07－1293－02

2012－03－21）