妇健安合剂水提取工艺的研究

龙 宇， 刘 琪

(1.南华大学附属第二医院药剂科，湖南 衡阳421001;2.衡阳市中医院药剂科，湖南衡阳421001)

妇健安合剂是在中医临床验方和现代药理学研究基础上，由白芍、党参、败酱草、萹蓄等8味中药组成，具有健脾疏肝、祛湿止带的功效.临床主要用于治疗肾虚、湿热带下，效果显著.根据传统用药，为群药用水共煎.为客观地评价本制剂的提取工艺，我们以提取物浸膏得率以及君药芍药的有效成分芍药苷作为评价指标，对该方进行水提取工艺考察.

1 仪器与试药

1.1 仪器

Aglient 1100型高效液相色谱仪，Aglient 1100色谱工作站，VWD紫外检测器;光学读数分析天平(型号:TG328A);RE52-99旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂);乙腈(色谱纯，Tiada试剂厂);水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯.

1.2 试药

芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号:110736-200423).

2 方法与结果

2.1 芍药苷含量测定

2.1.1 色谱条件

色谱柱:PhenomenexC18-ODS色谱柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈-水(18∶82);检测波长:230 nm;流速:1.0 mL·min－1;柱温:30℃;灵敏度:2AUFS.理论塔板数以芍药苷计不低于3 500.照高效液相色谱法(《中国药典》附录ⅥD)测定.

2.1.2 对照品溶液的制备

取芍药苷对照品适量，精密称定为10.4 mg，置25 mL容量瓶，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，再吸取1 mL稀释液至10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得 41.6 μg·L－1的对照品液.

2.1.3 供试品溶液的制备与测定

精密量取提取液5 mL，置25 mL容量瓶中，加入甲醇适量超声处理(200 W，40 kHz)10 min，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，取适量溶液离心5 min，取上清液滤过，续滤液作为供试品溶液.

芍药苷对照品、缺白芍空白样品与供试品色谱图见图1.供试品色谱中，在与对照品色谱图相应的位置上有一相同的色谱峰，而阴性对照液未见干扰.结果表明该检测方法准确可行.

图1 HPLC色谱图Fig.1 RP-HPLC chromatogram of Fu Jian'an Mixture

2.2 浸膏得率的测定

精密量取提取液25 mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上浓缩至稠膏状，于105℃干燥至恒重，计算浸膏得率.

2.3 提取工艺的优选

2.3.1 提取溶媒的考察

取白芍、党参、败酱草、萹蓄等药材，按处方比例加水及不同浓度的乙醇浸泡1.0 h，加热回流提取三次，加溶媒为药材的10倍量，提取时间为1.5 h.依次收集各种溶媒下提取液，准确记录提取液体积.按“2.1.3”项下制备供试品溶液并进行测定.结果见表1.芍药苷浸出量(mg)=提取液中芍药苷含量(mg·mL－1)×提取液体积(mL).

表1 不同提取溶媒实验结果Tab.1 Experimental result of different extraction solvent

由表1可知，不同浓度乙醇作为溶媒进行提取，芍药苷浸出量均较水提取时高.但是作为医院制剂生产，水提取成本低且工艺简单，因此选用水作为提取溶媒.

2.3.2 提取次数的考察

取白芍、党参、败酱草、萹蓄等药材，按处方比例加水浸泡1.0 h，加热回流提取三次，加水量分别为药材的 10倍、8倍、8倍量，提取时间分别为1.5 h、1.0 h、0.5 h，分别收集各次提取液，准确量取体积，备用.从上述三份提取液中各取适量，分别按上述方法测定浸膏得率与芍药苷的含量.结果见表2.

表2 水提次数实验结果Tab.2 Experimental result of water extraction times

由表2可知，第三次提取液中，芍药苷浸出量与浸膏得率均比较低(分别占三次总浸出量的5.90%与11.97%).因此，白芍、党参、败酱草、萹蓄等药材以水提2次为宜.

2.3.3 正交试验优选提取工艺条件

1)正交实验设计.在预实验的基础上，确定主要影响因素，即浸泡时间，加水量，回流时间，各设三个水平，选用L9(34)正交表进行实验，因素水平安排见表3.

表3 水提工艺优选因素水平表Tab.3 The water extracting technology for optimal factor level table

2)实验统计处理.采用SPASS12.0统计软件，将上述实验数据进行统计学处理，结果见表4～表6.

表4 水提工艺优选正交试验设计表及结果Tab.4 Extraction process optimization orthogonal design table and results

表5 浸膏得率方差分析表Tab.5 Extract yield table of variance analysis

表6 芍药苷浸出量方差分析表Tab.6 Paeoniflorin leaching volume table of variance analysis

由表5可知，各因素对浸膏得率均无显著影响.由表6可知，B因素对芍药苷浸出量有显著的影响，A、C两因素对芍药苷浸出量无显著的影响，根据制剂大生产的实际需要，拟定为A1B3C1.由于选择方案未在正交试验表中，需进行工艺的验证实验.以A1B3C1重复进行试验(n=3)，浸膏得率为14.78 mg.芍药苷浸出量为 95.49 mg，与正交试验表中浸膏得率和芍药苷浸出量最高的第9号方案A3B3C2相差不大，故确定水提工艺的最优条件为A1B3C1，即提取时加水浸泡0.5 h，提取2次，加水量分别为药材的10倍、8倍，提取时间分别为1.0 h、0.5 h.

3 讨论

1)测定波长的选择.取芍药苷对照品适量，加甲醇制成对照品溶液，置紫外分光光度计记录其紫外吸收光谱，结果显示，芍药苷在230 nm波长处有最大吸收，故选择230作为测定波长，与中国药典2010年版一部中白芍[1]的检测方法一致.

2)笔者根据文献[2～4]采用流动相乙腈∶水=14∶86，发现出峰时间较长，增大乙腈比例，按照本文中流动相乙腈∶水=18∶82，出峰时间短，峰型很好，且基线平稳，阴性无干扰.

3)在供试品的制备中，考虑到提取液直接稀释未能充分溶解，采用超声处理.并对提取时间进行考察，以5 min，10 min，15 min进行对比，超声 10 min即能提取完全.

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].一部.北京:中国医药科技出版社，2010.

[2] 吴巧凤，严云良，楼小红.白芍中芍药苷的提取工艺研究[J].中成药，2006，28(9):1379-1380.

[3] 鲍邢杰，宿树兰.对《中国药典》2010版Ⅰ部中白芍中芍药苷含量测定方法的探讨[J].时珍国医国药，2012，23(5):1309-1310.

[4] 滕 宇，李正言，李铁铭，等.HPLC法测定抗感片中芍药苷的含量[J].辽宁中医药大学学报，2008，10(4):140-141.