脂多糖对正常人皮肤成纤维细胞胶原合成的影响

纪少军，万立，李凤玉，贾国洪，闫永宏，石军

(解放军第二五一医院急诊科，河北张家口 075000)

创面愈合是一个复杂的生物学过程，包括炎症反 应、细胞增殖、创面收缩和胶原代谢等基本环节。成纤维细胞作为创面修复的主要细胞之一［1］，其增殖和胶原合成的变化直接影响创面修复的结局。我们既往研究证实，细菌脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)可以刺激正常人皮肤成纤维细胞增殖［2］。为了探讨LPS在创面修复中的作用，我们研究LPS对正常人皮肤成纤维细胞胶原合成的影响。

1 材料与方法

1.1 标本来源

标本来源于我科收治的整形患者20例，其中男11例，女9例，年龄2～56岁，平均(20±15)岁。

1.2 主要试剂及仪器

Dulbecco改良的培养基;LPS E．coli 055:B5;胎牛血清;L-脯氨酸;3H-脯氨酸;酶联免疫标记仪。

1.3 成纤维细胞培养

原代培养采用组织块法［3］。

1.4 LPS作用浓度

用4%基础培养基稀释LPS，参照既往研究报告确定 LPS 的实验浓度［2，4］，作用浓度为 0.005、0.01、0.05、0.1、0.5 和 1.0 μg·ml-1。

1.5 成纤维细胞胶原合成的检测

取对数生长期的成纤维细胞，以含10%FCS的DMEM培养基制成1×104个·ml-1的细胞悬液，接种于96孔平底培养板中，每孔200 μl，在相同培养条件下，细胞贴壁后，各组正常成纤维细胞更换预先配置的LPS工作液，每个LPS浓度设4个平行孔。以加LPS工作液时间为准，第2天将24 h标记期的3H-脯氨酸掺入(掺入量0.5 μCi·孔-1)稳态、融合的单层培养成纤维细胞中［5］，第3天采用胃蛋白酶消化法检测培养液中胶原量，实验结果以dpm·(1 000细胞)-1表示。

1.6 统计学处理

采用SPSS 11.0统计软件进行单因素方差分析，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

LPS对正常人皮肤成纤维细胞胶原合成的影响:LPS刺激浓度在0.005～0.5 μg·ml-1时，促进正常皮肤成纤维细胞的胶原合成。LPS浓度在0.005～0.1 μg·ml-1时，LPS刺激浓度和成纤维细胞胶原合成之间存在量效依赖关系;当LPS浓度为0.5 μg·ml-1时，促成纤维细胞胶原合成作用开始降低，当LPS浓度达到1 μg·ml-1时，成纤维细胞胶原合成受到抑制。其中，LPS 浓度为 0.05 μg·ml-1和 0.1 μg·ml-1时，胶原合成量分别为(391.75±14.198)和(435.00±17.473)dpm·(1000细胞)-1，显著高于正常皮肤成纤维细胞［(281.50±17.540)dpm·(1 000细胞)-1］(P ＜0.01)。当 LPS 浓度达到1.0 μg·ml-1时，已明显抑制成纤维细胞胶原合成［(215.00±19.148)dpm·(1 000细胞)-1］(P ＜0.01)。

3 讨 论

成纤维细胞作为创面修复的主要细胞，它能分泌胶原蛋白等细胞外基质，可以通过分泌一氧化氮合酶和角质化细胞生长因子等细胞因子对创伤修复过程起调节作用。创伤环境及创面外用药物都在一定程度上含有LPS。我们既往研究证实，细菌LPS可以刺激正常人皮肤成纤维细胞增殖［2，6］。而通过刺激成纤维细胞增殖和胶原合成是许多药物促进创面修复的主要机制之一。因此，研究LPS对成纤维细胞增殖和胶原合成的影响，对阐明LPS对创伤愈合的影响具有重要意义。

3H-脯氨酸掺入实验结果显示，LPS对成纤维细胞胶原合成也具有双重作用，低浓度时促进成纤维细胞胶原合成，高浓度时抑制成纤维细胞胶原合成;其原因可能是:(1)通过刺激或抑制成纤维细胞的增殖，使成纤维细胞数量改变，影响胶原合成;(2)LPS改变了成纤维细胞的生物学特性，使单个成纤维细胞的胶原合成量增加。李从青等［7］研究也证实了LPS通过与单核细胞表面CD14分子或可溶性CD14分子作用，将细胞信号传导到胞核而刺激多种细胞合成和释放细胞因子。徐荔等［8］的研究也证实了LPS对细胞因子的合成和释放具有促进作用。LPS对成纤维细胞胶原合成的作用可能与其对细胞因子的影响有关。

综上所述，LPS改变了正常人皮肤成纤维细胞的某些生物学特性，通过促进胶原蛋白合成而促进创面愈合，并且不同浓度LPS在创面愈合中的作用不同。

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