兔vx2声门上喉癌动物模型的建立及双颈部转移淋巴结规律的观察

张 品

（辽宁省锦州市中心医院耳鼻咽喉科，辽宁 锦州 121001）

声门上型喉癌是指癌肿发生于声带以上部位，包括会厌癌、室带癌、会厌室带癌等[1]。由于声门上区有丰富的淋巴网，因而易发生颈部淋巴结转移。声门上型喉癌治疗失败的主要原因是颈淋巴结的转移及复发，也是喉癌致死的主要原因[2]。对颈部隐匿性淋巴结转移的诊

断和治疗现已成为声门上癌治疗成败的关键。如何术前、术中确定颈部转移灶，尽可能减少过度手术治疗给患者造成的损伤是目前研究的热点[3]。要想对颈淋巴转移的诊治有进一步的了解，就要对肿瘤的进展和相伴随的淋巴转移的特点做进一步的研究，即建立动物模型进行研究。兔VX2肿瘤广泛应用于各种器官的肿瘤模型，其特点是肿瘤易于生长，生长速度快。本实验主要研究出现颈淋巴转移与时间的关系以及出现转移的部位。及不同部位的癌肿双颈淋巴结转移特点。

1 材料与方法

1.1 实验对象

Vx2瘤珠，60只新西兰大白兔。

1.2 实验方法

1.2.1 vx2瘤的种植传代

VX2瘤细胞株，调配1640培养液至1×107/mL活细胞浓度，取1mL瘤细胞液注射于兔后腿外侧肌肉内，2周左右可形成实质性包块，即制成传种兔。

1.2.2 制备组织块悬液

无菌条件下切取传种兔后腿实体瘤，放置于盛有20ml1640液的玻璃皿中，取瘤体边缘生长旺盛的组织，剪切成泥，离心沉淀后，加1640培养液配制成组织块悬液20mL。

1.2.3 麻醉方法

实验兔60只，雌雄不限，体重2.0～30.kg。每只以10%水合氯醛（5mg/kg）进行腹腔注射。

1.2.4 vx2肿瘤组织悬液接种

实验兔以小儿支撑喉镜暴漏会厌，上颌窦穿刺针于会厌舌面接种0.3mL瘤液。

1.3 组织病理学检查

在接种后第1、2、3、4周分4次处死动物，（在时间观察选择点上，本次研究检测第1、2、3、4周的情况，是由于既往预实验中及参考其他类似实验的选择[4]）肉眼观察喉部肿瘤生长情况，解剖双侧颈部淋巴结。行病理学检查 。结果：①模型一般情况：种植瘤兔60只，随机数字法分成4组，每组15只，分别在接种VX2瘤珠后，于第一、二、三、四周分4批处死动物，原位接种成功了60个。接种成功率100%。观察结果：在第1周15只瘤兔中未出现颈内静脉旁淋巴结转移。在第2周15只瘤兔中有9只瘤兔出现患侧颈内静脉旁淋巴结转移，对侧颈内静脉旁未见淋巴结转移，第3周15只瘤兔中有9只瘤兔出现患侧内静脉旁淋巴结转移的情况，对侧颈内静脉旁有6只出现淋巴结转移。而在第4周14只瘤兔中患侧颈内静脉旁均出现淋巴结转移的情况。对侧有10只出现淋巴结转移。②原发灶瘤体观察：所有肿瘤经病理证实为V X 2 鳞状细胞癌.

2 原发灶瘤体观察

形态学观察：肿瘤部位明显隆起，表面粘膜糜烂，形成溃疡。病理学检查：光镜下观察：癌细胞排列紧密呈实体巢状，间质结缔组织少， 高倍镜下见癌细胞大小和形态不一，胞浆丰富，淡红染色，未见角化珠;核大而畸形，核膜清楚，核仁明显，核分裂相多见。

3 颈部淋巴结解剖及病理学检查

形态学观察：淋巴结较硬，无明显包膜，切面呈灰白色鱼肉状。

光镜下观察：细胞以多边形为主。HE染色见细胞轻度嗜碱，核大，核质比例异常，细胞呈异型性明显，可见较多核分裂象，镜下显示正常淋巴结结构消失，大量肿瘤细胞浸润。

4 讨 论

4.1 本次实验瘤珠种植部位偏于一侧目的在于观察不同时间段同侧淋巴结及对侧淋巴结转移出现的先后次序。本次实验表明成瘤部位最先在患侧出现淋巴结转移，随着瘤体的不断生长、浸润，对侧也出现淋巴结的转移。这也符合我们临床上声门上喉癌淋巴结的转移规律，声门上喉癌最先在同侧出现淋巴结转移，到中晚期双侧均出现淋巴结转移。

4.2 肿瘤动物模型的建立在肿瘤研究中具有重要价值，理想的动物模型要求在发生部位、组织学类型、生物学行为等方面尽量与所对应的人类肿瘤相似。目前喉癌裸鼠动物模型研究较多，但由于所移植的肿瘤均表现为血源性转移，所以裸鼠中移植的喉癌模型对于研究颈淋巴转移意义不大。兔 VX2肿瘤是一种来源于 Shope病毒致乳头瘤恶变形成的鳞状上皮细胞恶性肿瘤，属于鳞状细胞癌。1940年建株保存 经 72次传代培养后建立起来的仍可在兔体内种植的肿瘤细胞株。它可接种在兔的肝脏、肾脏、肌肉等处[5]。兔VX2模型具有：①其特点是性质稳定，移植成瘤率时间短，成瘤率高。②实验成本低于细胞培养方法，操作简单，易推广。③啮齿类动物颈外动脉管径小，为动脉给药等局部治疗实验带来操作困难。较大的动物有其无法比拟的优势，如取血量大等。④ Dunne[6]等专门对兔颈部淋巴结区域引流进行了系统研究，证实其与人类颈部淋巴结分布极其相似。因此兔vx2声门上喉癌动物模型是研究肿瘤侵袭及淋巴结转移的良好模型。

[1]黄选兆,汪吉宝.实用耳鼻咽喉科学[M].北京:人民卫生出版社,1998: 204-206.

[2]刘学忠,萧世强.影响喉癌预后的因素[J].国外医耳鼻咽喉科学分册,1990,14(1):28-30.

[3]徐世影,杨蓓蓓.头颈部鳞状细胞癌颈部淋巴结微转移灶的研究进展[J].临床耳鼻咽喉科杂志,2006,20(8):378–381.

[4]刘险峰,任乐荣,苏广彦,等.兔VX2肿瘤细胞系的建立及其生物学特性的观察[J].中华病理学杂志,2005,34(10): 661-663.

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[6]Dunne AA,Plehn S,Schulz S,et al.Lymph node topography of the head and neck in New Zealand White rabbits[J].Lab Anim,2003,37(1):37-43.