大理地区散养户猪伪狂犬病病毒野毒株感染的血清学分析＊

杨尚斌，高 洪，黄 慧，严玉霖，陈 冈，蒋 欢，高利波，赵 汝，李健含，李翠华

（1.云南省大理农业学校，云南大理 671003；2.云南农业大学动物科学技术学院，云南昆明 650201；3.云南巍山县动物疫病预防控制中心，云南巍山 672400）

伪狂犬病（Pseudorabie，PR）是由伪狂犬病病毒（Pseudorabie virus，PRV）引起的包括多种家畜和野生动物如猪、牛、羊、犬、猫、家兔、小鼠、水貂、狐等［1-2］发病的一种急性传染病。猪是伪狂犬病病毒的贮存宿主，病猪、带毒猪以及带毒鼠类为本病重要传染源［3］，同时PRV也是引起猪呼吸系统疾病综合征的重要原发性病原之一［4］。猪感染PRV后其症状因感染日龄不同而异。发病仔猪常表现明显的神经症状，病死率100%，断奶仔猪病死率为10%～20%；育肥猪常呈隐形感染，仅表现增重减慢等轻微症状，往往易被忽视；成年猪感染后多耐过，呈隐性感染，长期带毒排毒［5］；母猪则表现为返情、不发情、屡配不孕；妊娠母猪通常表现为流产、产死胎和木乃伊胎；公猪则常发生睾丸肿胀、萎缩等，种用性能降低或丧失。

本病最早于1902年由匈牙利学者Aujeszky发现［6］。我国自1948年首次报道此病以来，目前已有大约31个省市发生和流行此病，严重阻碍了我国养猪业的健康发展和对外贸易。西方发达国家相继制定和启动了该病的根除计划，取得了很好的成效，首先是英国和丹麦于20世纪80年代末宣布取得成功，接着荷兰、比利时等欧洲国家基本实现猪伪狂犬病净化，美国也于1989年开始启动为期10年的全国性净化计划，并取得阶段性成果，现在美国的家猪已经无伪狂犬病病毒野毒感染。该病在我国广泛存在并引发巨大损失，我国一些省区和部分高级别大型猪场正积极启动猪伪狂犬病根除计划。想在短时间内净化伪狂犬病不现实，但可以在一定时间内以“猪场”为单位，配合现有的高效猪伪狂犬病gE基因缺失苗，通过检测gE抗体逐步淘汰阳性猪只，直至净化猪伪狂犬病。

为了解大理地区散养户中猪伪狂犬病病毒野毒感染情况，对大理地区30多个散养户的112只不同年龄阶段的生猪进行了PRV血清学调查，以期为猪伪狂犬病的防控和净化提供理论依据，以保障养猪业的健康发展。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 血清样本 2010年从大理及周边地区的32个散养户随机采集猪血清样品112份，其中11份来自庙街镇，85份来自南诏镇，16份来自弥城镇，置-20℃冰柜中保存备用。

1.1.2 检测试剂 猪伪狂犬gE鉴别ELISA检测试剂盒，购自深圳市康百得生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 检测方法 间接ELISA方法，按照检测试剂盒的说明书进行操作，通过配制洗涤液，稀释样品，加样，温育，洗板，加酶结合底物，显色，终止等操作步骤，最后于450nm处测定各孔的A值。

1.2.2 结果判定 以空白孔调零，当阳性对照孔平均值A450≥0.4，阴性对照孔平均值A450≤0.1时试验成立。被检血清样品A450≥0.2时判为阳性，A450＜0.2时判为阴性。

1.2.3 统计分析 不同时间或不同分组间抗体阳性率的比较采用Pearsonχ2检验，以P＜0.05时差异显著，P＜0.01差异极显著，统计分析使用SPSS10.0。

2 结果

2010年从大理地区散养户猪群中共采集的112份血清样本，通过间接ELISA方法检测，检出阳性血清9份，阳性率8.04%。

2.1 不同品种猪群PRV野毒感染情况

采集的112份血清样本，其中杜杂猪血清55份，长白猪血清57份。检出杜杂猪PRVgE抗体阳性血清2份，阳性率为3.63%，长白猪PRVgE抗体阳性血清7份，阳性率12.28%（表1）。

表1 不同品种猪群PRV野毒感染情况Table 1 The PRV wild virus infection in different pigs

2.2 不同年龄段猪群PRV野毒感染情况

采集的112份血清，其中6月龄～8月龄猪血清63份，9月龄～10月龄猪血清40份，10月龄以上猪血清9份。检出6月龄～8月龄猪PRVgE抗体阳性血清7份，阳性率为11.11%，9月龄～10月龄猪PRVgE抗体阳性血清2份，阳性率5%，10月龄以上猪PRVgE抗体阳性血清0份（表2）。

表2 不同年龄段猪群PRV野毒感染情况Table 2 The PRV wild virus infection in different age pigs

2.3 不同性别猪群PRV野毒感染情况

采集的112份血清，其中公猪血清62份，母猪血清50份。检出公猪PRVgE抗体阳性血清6份，阳性率9.68%，母猪PRVgE抗体阳性血清3份，阳性率6%（表3）。

表3 不同性别猪群PRV野毒感染情况Table 3 The PRV wild virus infection in different gender pigs

3 讨论

此次调查的采样方式为随机采样，采样猪只的年龄、性别和品种等均是根据该地区散养户的情况随机选取，没有特别要求。结果显示，大理地区散养户猪群伪狂犬病病毒野毒阳性率为8.04%，与王政等［7］对广东惠州的6个县（区）的67个猪场的1 419份猪血清中，伪狂犬病病毒野毒抗体阳性检出率5.43%接近，但低于冼琼珍等［8］报道的广东省9个地区猪场中的平均阳性率为46.4%，卫秀余等［9］对300多个猪场调查的阳性率30.6%，这说明该地区散养户猪伪狂犬病净化效果良好。另外，结果还显示长白猪的阳性率高于杜杂猪，6月龄～8月龄猪阳性率稍高于9月龄以上猪，公猪阳性率略高于母猪，此结果在某种程度上说明了该地区不同品种、不同年龄以及不同性别猪只对猪伪狂犬病病毒野毒易感情况的差异。然而，散养户猪群和规模化猪场猪群之间，在养殖规模、饲养模式、饲养环境等方面都存在着较多差异，而且该地区散养户猪只的年龄一般都在6月龄以上，因此，此次调查与分析只显示了大理地区散养户猪群中猪伪狂犬病病毒野毒感染情况，但此调查对了解、监测和指导该地区散养户的养殖仍有一定的现实意义，做好猪伪狂犬病的防控和净化工作是最终的目标。

目前，我国已有多个省市先后报道该病，给我国养殖业造成了巨大的经济损失［10-11］。并且，猪感染伪狂犬病病毒后，免疫系统受到损害［12］，容易继发感染其他疾病，如猪瘟［13］、猪繁殖与呼吸综合征［14］等，给猪伪狂犬病的防控增加了难度，也给猪病防控提出了新的课题。伪狂犬病病毒属于疱疹病毒，一旦感染就会终身带毒，注射疫苗虽能减少其发病，但是不能完全阻止其感染和排毒，在应激条件下（如密度过大、混群、转栏、分娩等），潜伏的病毒就会被激活，反过来影响其他正常猪。猪病学第九版［15］指出PR控制的最终目标是根除，标记疫苗的应用是免疫根除方案的一部分。参照国外应用基因缺失苗来净化猪伪狂犬病的成功经验，对下属的种猪场应用荧光抗体、PCR、ELISA检测技术和伪狂犬病病毒基因缺失弱毒苗及其他配套技术［16-17］，实施了猪伪狂犬病净化计划，经过3年的工作，已取得初步效果。

根据此次调查结果，了解到该地区猪伪狂犬病净化要采取一些特异性的措施：①最好做到自繁自养；②养种猪的散养户，每头种猪要进行伪狂犬病病毒野毒抗体检测，逐一淘汰带毒种猪。同时跟踪采用抗体检测和经过净化后猪群生长性能和繁殖性能的变化情况；③育肥散养户，确保引进阴性猪；④加强饲养管理，做好生物安全措施，做好重要疫病（猪瘟、猪繁殖和呼吸综合征、日本脑炎、细小病毒病等）的免疫接种工作。

然而，该病还会通过老鼠、运输车辆等途径传播［16］。经验证明，在实施伪狂犬病净化时，除应用基因缺失苗以及配套检测技术外，生产管理中的全进全出单向流动和严格的消毒隔离、灭鼠工作等生物安全措施可有效地阻止病原在不同生产阶段的猪群间传播，再结合淘汰阳性猪的措施，才能达到净化的目的。

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