中药复合剂AFF-Ⅰ口服液对小鼠急性肝损伤血液生化指标的影响

曹授俊，雷莉辉，王金秋，马建民，孙 健

（北京农业职业学院，102442 北京）

肝脏具有生物转化糖、脂类、蛋白质、维生素、激素的功能和生成、分泌胆汁及摄取、转化、排泄胆红素的作用［1］。病原微生物侵袭、药物的不合理应用、过量酒精等都能引起肝脏损伤。对于肝脏损伤的预防和治疗许多学者进行了大量的研究［2-3］，为临床用药提供了理论依据。中药复合剂AFF-Ⅰ口服液由天然中草药提取而成，主要用于治疗和预防肝损伤。本实验研究中药复合剂AFF-Ⅰ口服液配方含量，测定中药复合剂AFF-Ⅰ口服液对小鼠急性肝损伤的保护作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药物与试剂盒 中药复合剂AFF-Ⅰ口服液，北京农业职业学院中兽医实验室提供；联苯双酯滴丸（BPD），1.5mg／丸，购自北京同仁堂药店；CCl4，分析纯，使用时用花生油配制成1mL／L的浓度使用；AST、ALT、SOD、MDA 试剂盒，批号为20110620，购自南京建成生物工程研究所。

1.1.2 实验动物 清洁级昆明种小鼠60只，18g～22g，雌雄各半，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。

1.1.3 主要仪器 高速冷冻台式离心机，北京时代北利离心机有限公司产品，型号为GTE22-1。

1.2 方法

1.2.1 动物分组 小鼠购买后在实验室适应性饲养2d，用于正式试验。饲养条件：室温22℃～25℃，相对湿度65%，12h明暗交替照明，自由进食、饮水。将60只小鼠随机分为6组，即正常对照组、造模组、阳性药物对照组（联苯双酯组）、中药复合剂AFF-Ⅰ口服液高、中、低剂量组。试验开始后正常对照组、造模组分别灌服等量的生理盐水；阳性药物对照组按150mg／kg灌胃联苯双酯溶液；中药复合剂AFF-Ⅰ口服液高、中、低剂量组分别按45、30、15mL／kg灌胃，2次／d；各给药组连续给药7d。末次给药后1h，正常对照组腹腔注射花生油20mL／kg，其余组腹腔注射1mL／L CCl4花生油溶液20mL／kg。全部小鼠于末次操作后禁食不禁水，16h后小鼠眼眶取血制备血清，处死，取肝脏制备肝组织匀浆。

1.2.2 检测指标

1.2.2.1 血清中AST、ALT含量的测定 小鼠眼眶取血，放入1.5mL的Eppendorf管中，水浴30min～50min，l 000r／min离心10min，取血清，按试剂盒要求，分别测定血清中AST、ALT的含量。

1.2.2.2 肝组织中SOD、MDA含量的测定 取小鼠肝0.5g，用冷生理盐水洗去血污，加9g／L冷生理盐水5mL制成100g／L肝匀浆，3 000r／min离心10min，取上清液2mL备用。按试剂盒的方法分别检测肝组织中SOD、MDA含量。

2 结果

2.1 中药复合剂AFF-Ⅰ口服液对血清中AST、ALT含量的影响

由表1可以看出，四氯化碳模型组与各组相比，血清中AST、ALT含量显著提高，差异极显著（P＜0.01），说明本次实验造模成功；与正常对照组和联苯双酯相比，中药复合剂AFF-Ⅰ口服液低、中、高剂量组ALT、AST含量无显著差异，中药复合剂AFF-Ⅰ口服液低、中、高剂量组3组之间比较，AST、ALT含量差异不显著（P＞0.05）。

2.2 中药复合剂AFF-Ⅰ口服液对肝组织中SOD、MDA含量的影响

表2表明，四氯化碳模型组与各组相比，血清中SOD活力显著下降、MDA含量显著提高，差异极显著（P＜0.01），说明本次试验造模成功；与正常对照组和联苯双酯相比，中药复合剂AFF-Ⅰ口服液低、中、高剂量组SOD活力、MDA含量无显著差异，且中药复合剂AFF-Ⅰ口服液低、中、高剂量组3组之间比较，SOD活力、MDA含量差异不显著。

表1 中药复合剂AFF-Ⅰ口服液对血清中AST、ALT含量的影响（±sD n=10）Table 1 Effect of AFF-Ⅰon serum content of AST and ALT

表1 中药复合剂AFF-Ⅰ口服液对血清中AST、ALT含量的影响（±sD n=10）Table 1 Effect of AFF-Ⅰon serum content of AST and ALT

注：表中肩标相同者为差异不显著，肩背不相同者为差异极显著（P＜0.01）。Note：In the table，it indicates that it has insignificant difference with the same marks and very significant difference with different marks（P＜0.01）.

组别Groups天冬氨酸氨基转移酶／（U·L-1）AST丙氨酸氨基转移酶／（U·L-1）ALT对照组Control group 169.3±27.97 35.92±6.64四氯化碳组CCl4group 361.93a±64.32 111.98a±17.59联苯双酯组Bifendate group 169.94±72.52 39.10±5.53低剂量组Low dose group 200.05±41.19 40.65±4.41中剂量组Medium dose group 200.50±37.26 42.51±4.67高低剂量组High dose group 195.82±39.22 40.88±9.07

表2 中药复合剂AFF-Ⅰ口服液对肝组织中SOD、MDA含量的影响（±sD n=10）Table 2 Effect of AFF-1on liver content of SOD and MDA

表2 中药复合剂AFF-Ⅰ口服液对肝组织中SOD、MDA含量的影响（±sD n=10）Table 2 Effect of AFF-1on liver content of SOD and MDA

注：表中肩标相同者为差异不显著，肩背不相同者为差异显著（P＜0.01）。Note：In the table，it indicates that it has insignificant difference with the same marks and very significant difference with different marks（P＜0.01）.

超氧化物歧化酶／（IU·mL-1）SOD丙二醛／（μmol·L-1）MDA组别Groups对照组Contro group 28.55±1.21 5.33±0.54四氯化碳组CCl4group 19.58a±4.02 8.82a±1.40联苯双酯组Bifendate group 28.31±2.07 5.12±1.05低剂量组Low dose group 26.58±1.86 6.05±0.67中剂量组Medium dose group 27.21±2.46 5.76±0.94高低剂量组High dose group 27.11±2.65 5.39±1.38

3 讨论

CCl4是经典的实验性肝损伤动物模型所用毒剂，一般认为［4］肝损伤是CCl4进入肝细胞后，由于脂质过氧化使线粒体膜脂质溶解，从而影响线粒体的结构和功能，使酶蛋白质合成减少，致使肝细胞变性、坏死。肝细胞膜的脂质过氧化是CCl4介导的肝细胞损伤的主要机制，目前认为脂质过氧化损伤与自由基生成增多或清除减少有关。SOD是体内清除自由基、抑制自由基反应的物质之一，它能抑制黄嘌呤脱氢酶转化为黄嘌呤氧化酶，减少自由基的产生，减轻肝细胞的损伤，其活性降低则会导致体内氧自由基的积累，引发质膜的过氧化作用，使膜结构与功能受到损伤，最终导致细胞的死亡［5］。不管是急性、亚急性还是慢性CCl4肝损伤，动物肝的SOD活性均明显降低［6］，仇君等［7］在研究茵栀黄口服液对免疫性肝损伤具有保护作用时，认为其作用机制可能与抑制体内氧化应激反应、促进自由基清除、调节免疫功能有关。

本试验利用CCl4导致小鼠急性肝损伤评价中药复合剂AFF-Ⅰ口服液对肝脏保护作用，结果表明，中药复合剂AFF-Ⅰ口服液低、中、高剂量组能显著降低CCl4导致小鼠急性肝损伤血清中AST、ALT含量（P＜0.01），显著降低CCl4所致急性肝损伤小鼠肝组织MDA含量，提高肝组织SOD活力，与联苯双酯组比较无显著差异，说明中药复合剂AFF-Ⅰ口服液对CCl4所致小鼠的急性肝损伤具有保护作用。中药复合剂AFF-Ⅰ口服液对肝损伤保护作用的作用机理有待进一步研究。

［1］ 孙 蓉，杨 倩，黄 伟，等，肝功能相关指标在中药肝毒性损伤中作用与毒性相关程度分析［J］.中国药理与临床，2008，24（6）：82-84.

［2］ Yao D，Vlessidis A G，Gou Y et al.Chemiluminescence detection of superoxide anion release and superoxide dismutase activity：modulation effect of Pulsatilla chinensis［J］.Anal Bioanal Chem ，2004，379（1）：171-177.

［3］ Liu C F，Lin C H，Lin C C，et al.Antioxidative natural product protect against econazole-induced liver injuries［J］.Toxicology，2004，196（1-2）：87-93.

［4］ Henderson N C，Forbes S J.Hepatic fibrogenesis：from within and outwith［J］.Toxicology，2008，254（3）：130.

［5］ Lee A S.The E R chaperone and signaling regulator GRP78PBiP as a monitor of endoplasmic reticulum stress［J］.Methods，2005，35（4）：373-381.

［6］ Moselhy S S，Ali H K.Hepatoprotective effect of cinnamon extracts against carbon tetrachloride induce oxidative stress and liver injury in rats［J］.Biol Res，2009，42（1）：93.

［7］ 仇 君，何荣芬，高 亮，等，茵栀黄口服液在免疫性肝损伤中的作用研究［J］.中国药房，2010，21（27）：2510-2512.