道地与非道地远志水溶性组分特征分析

房敏峰，吴 洋，王启林，岳 明，赵桂仿

(西部资源生物与现代生物教育部重点实验室，西北大学生命科学学院，陕西西安 710069)

远志主流商品为远志科植物远志(Polygala tenuifolia Willd.)的干燥根，分布于我国沙漠以南和长江以北，主产于山西、陕西、河南和河北，传统认为“山西量大，陕西质优”［1］。远志具有安神益智、交通心肾、祛痰和消肿作用，用于心肾不交引起的失眠多梦、健忘惊悸、神志恍惚、咳痰不爽、疮疡肿毒和乳房肿痛［2］。现代药理研究表明，远志具有抗氧化、抗衰老、降压、抗痴呆和脑保护作用，具有抑菌抗炎、调节血脂及抗突变、抗癌等多种药理活性。远志的药理活性主要与其水溶性成分即皂苷、酮和寡糖酯等有关［3］。前人对不同产地远志指标成分含量、指纹图谱及成分与环境因子的关系进行了较系统研究［4－8］，但远志道地与非道地产区的有效组分有何特征尚未见报道。因此，本文以50%甲醇为溶剂，分析远志道地与非道地产区药材的组分特征，为道地远志质量控制及评价提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪 器

岛津LC－10AT vp高效液相色谱仪(SPD－10A vp紫外检测器，SHIMADZU CBM－102色谱工作站)，FA2004万分之一电子天平(中国上海良平仪器仪表有限公司)，Autoscience AS5150A型超声波清洗仪。

1.2 试 药

样品2007～2009年8月采自陕西(合阳、商州和长安)、山西(平遥、平顺和永济)、河北(涞源和围场)、河南(卢氏和辉县)、内蒙古(呼和浩特和包头)、山东(费县)、辽宁(锦州和北票)、黑龙江(肇东)、四川(茂县)和安徽(萧县)，共10个省区18个县市，野生，按中国药典方法加工成远志药材。经西安市药品监督检验所谢志民研究员鉴定，远志为远志科植物远志(Polygala tenuifolia Willd.)的干燥根。

2 方法与方法

2.1 方法

2.1.1 色谱条件

色谱柱:SHIMADZU VP－ODS(150 mm ×4.6 mm，5μm);流动相:乙腈－0.05%磷酸溶液，梯度洗脱(0.00、10.01、20.01 、52.01、57.01、65.01、85.01 min，乙腈依次为 15%、20%、23%、27%、32%、35%、40%);检测波长:310nm;柱温:25℃;流速:1 mL·min－1;进样量:20 μL;记录时间:120 min。参比峰为3，6'－二芥子酰基蔗糖酯［7］(见图1)。

图1 陕西合阳野生远志HPLC色谱图

2.1.2 对照药材溶液的制备

精密称取已恒重的远志对照药材约0.4 g，加50%甲醇10 mL，超声30 min，过滤，滤液用50%甲醇定容至10 mL量瓶中，备用。

2.1.3 供试品溶液的制备

精密称取已恒重的远志药材粉末(20～40目)约1.0000 g，加 50% 甲醇 25 mL，超声 30 min，过滤，滤液用50%甲醇定容至25 mL量瓶中，临用前过0.45 μm滤膜，即为供试品溶液。

2.1.4 测定方法

分别精密吸取对照药材溶液和18批野生远志药材的供试液各 20 μL，注入液相色谱仪，记录120 min内的色谱图。

2.1.5 数据处理

指纹图谱结果分析在药典委员会颁布的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版”软件下完成;聚类分析在 STATISTICA 6.0 for Windows软件下完成。

2.2 结 果

2.2.1 精密度试验

取陕西合阳远志药材(s1)粉末，按1.3.1项方法制备供试液，重复进样5次，记录指纹图谱。结果表明各主要色谱峰相对保留时间和相对保留峰面积无明显变化，其 RSD分别为 0.02% ～2.49和0.24% ～2.05%，符合指纹图谱要求，仪器精密度良好。

2.2.2 稳定性试验

取陕西合阳远志药材(s1)粉末，按1.3.1项方法制备供试液，分别于 0，2，4，6，8，12h 检测指纹图谱。结果表明各主要色谱峰相对保留时间和相对保留峰面积无明显变化，其 RSD分别为0.12% ～2.73%和 0.32% ～2.19%，符合指纹图谱要求，样品稳定性良好。

2.2.3 重现性试验

取陕西合阳远志药材(s1)粉末5份，按2.1.3项方法制备供试液，记录指纹图谱。结果表明各主要色谱峰相对保留时间和相对保留峰面积无明显变化，其RSD 分别为0.40% ～2.49%和 0.84% ～2.21%，符合指纹图谱要求，方法重现性良好。

2.2.4 远志HPLC指纹图谱检测结果

采用梯度洗脱法得到远志道地与非道地产区18个居群药材的HPLC指纹图谱，通过多点校正取得共有模式(图2)，共有色谱峰24个。不同产地与合阳远志(s1)的相似度依此为:合阳(s1)1、商州(s2)0.775、长安(s3)0.773、平遥(s4)0.698、平顺(s5)0.856、永济(s6)0.722、涞源(s7)0.588、围场(s8)0.624、卢氏(s9)0.560、辉县(s10)0.672、呼和浩特(s11)0.752、包头(s12)0.661、费县(s13)0.671、锦州(s14)0.647、北票(s15)0.603、肇东(s16)0.600、茂县(s17)0.566 和萧县(s18)0.740。其中山西平顺与合阳相似度最高为0.856，其次为商州(0.775)和长安(0.773)。s1－s18与共有模式的相似度依此为:0.807、0.942、0.967、0.860、0.850、0.808、0.796、0.792、0.763、0.884、0.930、0.888、0.906、0.800、0.86、0.832、0.781、0.930。

图2 道地与非道地产区野生远志药材HPLC指纹图谱及其共有模式

由图2可见，色谱峰2、7、16和22为18个产地共有成分，峰面积相对较大，较稳定，为主要特征成分，依次为酮Ⅲ、3，6'－二芥子酰基蔗糖酯、皂苷A 和皂苷 B［6－8］。

2.2.5 远志水溶性组分特征分析

以3，6'－二芥子酰基蔗糖酯(色谱峰7)作为参比峰计算4个主要特征成分，即色谱峰2(14.228min，酮Ⅲ)、色谱峰 7(21.688min，3，6'－二芥子酰基蔗糖酯)、色谱峰16(63.109min，远志皂苷 A)和色谱峰22(89.608 min，远志皂苷B)［1，8］的组成比例，结果见表 1。围场和费县 4 个成分的配比变化较大。

表1 不同产地远志4个主成分的组成

将4个特征组分的峰面积按照3，6'－二芥子酰基蔗糖酯升序排列，以产地为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制不同产地4个特征组分的变化曲线，结果见图4。合阳和永济的组分特征最为接近，费县16号峰(tR=63.109)导致的组分特征变化最为明显。

图4 远志4个主要组分变化曲线

2.2.6 远志水溶性特征组分聚类结果

以参比峰为基础，对4个主要特征成分进行峰面积标准化，采用组内全部联结法进行欧氏距离聚类，结果见图5。18个居群聚为4大支，其中合阳－平顺支(Ⅰ)为远志现今道地产区，商州－肇东支(Ⅱ)为非道地产区，费县支(Ⅲ)为远志历史上的道地产区［9］;围场支(Ⅳ)为远志非药用区。在各支中欧氏距离最近的居群生态环境或地理距离最近，如合阳和永济、平遥和萧县均为逸生或半野生状态，采于栽培远志田周边荒地或田埂;长安和茂县2个居群均生于山地灌丛下。山东费县居群的岩石地质背景与黄土高原截然不同，而围场居群生于杏林下砂地，当地中医很少使用。该聚类结果提示，远志有效成分群与居群生态环境密切相关。

图5 道地与非道地远志水溶性特征组分聚类图

3 讨论

3.1 道地药材的质量和临床疗效明显优于其他地区，这是由于药用植物在不同生境下其次生代谢产物的组成或含量发生了变化，如茅苍术的挥发油组分及含量随产地不同而出现变异［10］。目前，研究药材道地与非道地化学变异首选为指纹图谱技术，因为色谱图中所显示的峰数及峰高/峰面积，代表了药材中化学成分的种类及含量。通过指纹图谱的特征性，能有效鉴别样品的真伪或产地;通过指纹图谱主要特征峰的面积或比例的制定，能有效控制样品的质量，确保样品质量的相对稳定，适于有效成分及作用机理尚不完全明确药材的质量控制和鉴别。远志的道地产区市场公认为陕西合阳一带，其道地性必然存在相应的化学物质基础。研究结果显示，HPLC指纹图谱可提供不同产地远志药材的主要组分特征，显示出道地产区药材有别于其它产区药材，可用于远志道地与非道地药材的鉴别。

3.2 按共有色谱峰计算相似度，则山西与陕西产野生远志的相似度较高，陕西商洛、长安和内蒙古呼和浩特产野生远志之间的相似度大于0.940，表明远志药材的化学组分与环境关系密切。不同产地4个主成分变异分析显示，陕西合阳和山西永济的主要成分组成特征最为接近，分别为 0.39∶1∶0.80∶1.03和0.39∶1∶0.72∶1.01，而山东费县变化最大，为0.44∶1∶2.04∶0.34。以化学组分特征为基础的聚类结果和相似度计算结果相一致。

3.3 关于远志道地沿革，《别录》记载“生太山及冤句川谷”。陶弘景:“今此药犹从彭城北兰陵来”。苏颂:“今河、陕、洛西州郡亦有之”。“俗传夷门出者最佳”。“道地夷门”。《药物出产辨》:“产山西曲沃县、河南省禹州府”。现时以山西产量大，陕西质量优［9］。远志道地产区是否沿徐州－开封－合阳纬度线西移并向南北扩散，通过哪些迁移路线和扩散方式形成了现今的分布格局，两地药材是否存在功效差异，需要进行本草考证和进一步实验验证。

3.4 道地药材是中医药临床对质优效佳药材的综合评价指标，是中药资源研究的核心理论之一。远志的活性成分类群较多，包括皂苷、酮、寡糖酯、生物碱、多糖及脂肪油，其药理作用各有侧重，在不同产地或商品规格中含量也存在差异，但远志的临床疗效是上述成分组群综合作用的结果，因此分析远志道地与非道地药材之间是否存在化学型差异，为表征道地远志寻找化学标记。

［1］肖培根.新编中药志:第一卷［M］.北京:化学工业出版社，2002:488.

［2］中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典:一部［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:146－147.

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［4］Teng Hongmei，Fang Minfeng，Cai Xia，et al.The Localization and Dynamic Change of Saponins in Vegetative Organs of Polygala tenuifolia Willd［J］.J Integra Plant Biol，2009，51(6):529－536.

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