淫羊藿提取物自乳化软胶囊的制备工艺研究Δ

姚慧娟，姚慧敏，卜书红，陆晓彤，张健#（.上海交通大学医学院附属新华医院药剂科，上海0009；.通化师范学院制药与食品科学系，吉林通化 3400）

淫羊藿提取物为小檗科植物淫羊藿的提取物，其主要成分为淫羊藿苷等黄酮类化合物，具有促进雄性激素分泌、降血压、扩张血管、增加冠脉流量、增强免疫功能和抗肿瘤等多种药理作用[1]。但黄酮类化合物难溶于水，生物利用度低[2]。为解决这一问题，笔者研制了淫羊藿提取物自乳化软胶囊[3]，由淫羊藿提取物、油相、非离子表面活性剂和助乳化剂组成，在环境温度和轻微搅动下，形成自乳化药物溶液，药物活性成分被包裹于这些细小的油滴中，能快速分布于胃肠道，可提高淫羊藿活性成分的溶出度。

1 仪器与试药

1100高效液相色谱仪，包括四元梯度泵、在线脱气机、自动进样器、柱温箱、紫外检测器、Chemstation色谱工作站（美国Agilent公司）；Nicomp-380/ZLS粒度测定仪（美国PSS公司）；ZRS24智能溶出试验仪（天津大学无线电厂）。

淫羊藿提取物（淫羊藿苷含量：60.47 mg·g－1）、淫羊藿提取物软胶囊（以下简称普通软胶囊，批号：101011、101012、101011，规格：0.5 g/粒）、淫羊藿提取物自乳化软胶囊（批号：101001、101002、101001，规格：0.5 g/粒）均由上海交通大学医学院附属新华医院药剂科自制；淫羊藿苷标准品（成都瑞芬思生物科技有限公司，批号：10051121，纯度：99.1%）；吐温80（北京益利精细化学品有限公司，批号：101201）；油酸乙酯（北京长城化学试剂厂，批号：101106）；聚乙二醇-8-甘油辛酸/葵酸酯（Labrasol）、乙二醇单乙基醚（Transcutol）（法国Gattefosse公司，批号分别为：100501、100302）；丙二醇、聚乙二醇（PEG）400（北京精求化工有限公司，批号分别为100911、100708）；大豆油（山东鲁花集团有限公司，批号：20100308）；甲醇、乙腈均为色谱级，水为纯净水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 自乳化软胶囊的制备

称取淫羊藿提取物适量，按照处方量加入油相、乳化剂和助乳化剂至具塞容器中，40℃恒温超声（功率：500 W，频率：50 kHz）处理30 min，机械搅拌10 min，使其充分溶解，离心（4 000 r·min－1）5 min，弃去沉淀，所得自乳化药液与明胶经自动旋转轧囊机（温度：25℃，相对湿度：45%）压制成软胶囊（0.5 g/粒），即得。

2.2 淫羊藿苷的含量测定

2.2.1 色谱条件色谱柱：Agilent Ecilpse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水（26∶74）；流速：1.0 mL·min－1；检测波长：270 nm；柱温：30 ℃；进样量：20 μL。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于2 000。

2.2.2 标准品溶液的制备 取淫羊藿苷标准品适量，精密称定，加无水乙醇溶解，制成每1 mL中含0.248 mg的溶液，作为标准品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备 取本品20粒的内容物，混匀，精密称定0.5 g，置25 mL量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，超声处理（功率：500 W，频率：50 kHz）30 min，滤过，精密吸取续滤液1.0 mL，置10 mL量瓶中，用无水乙醇定容，摇匀，即得。

2.2.4 专属性试验 分别精密吸取标准品溶液、供试品溶液和空白辅料溶液20 μL，注入液相色谱仪中，按“2.2.1”项下色谱条件测定，记录色谱图。结果，供试品溶液在与标准品溶液相同位置处有吸收峰，而空白辅料无干扰。色谱见图1。

图1 高效液相色谱图A.标准品；B.供试品；C.空白辅料；1.淫羊藿苷Fig 1 HPLC chromatogramsA.standard substance；B.test sample；C.blank excipients；1.icraiin

2.2.5 标准曲线的制备 精密吸取标准品溶液0.2、0.5、0.8、1.0、1.2、1.5 mL，置于10 mL量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，分别制成系列浓度溶液，摇匀。精密吸取20 μL，注入液相色谱仪，按“2.2.1”项下色谱条件测定。以淫羊藿苷峰面积积分值（A）为纵坐标，淫羊藿苷检测浓度（c）为横坐标，制备标准曲线，得回归方程为A＝35.336c－9.773 8（r＝0.999 9）。结果表明，淫羊藿苷检测浓度在4.96～49.60 μg·mL－1范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.2.6 精密度试验 精密吸取标准品溶液适量，注入液相色谱仪，按“2.2.1”项下色谱条件测定，于同日和隔日连续进样6次。结果，日间RSD＝0.25%（n＝6），日内RSD＝0.36%（n＝6），表明仪器的日内、日间精密度均良好。

2.2.7 加样回收率试验 精密吸取已知淫羊藿苷含量（含量：12.08 mg·g－1）的淫羊藿提取物自乳化软胶囊样品0.125 g，共6份，分别精密加入1.57 mg的淫羊藿苷标准品，按“2.2.1”项下色谱条件测定，分别进样3次，计算加样回收率。结果，淫羊藿苷的平均回收率为99.8%，RSD＝0.38%（n＝6）。

2.3 溶解度试验

精密量取表1中各辅料2 mL，分别加入过量的淫羊藿提取物细粉，置10 mL具塞刻度试管中，密封，涡旋震荡混匀，于40℃、150 r·min－1恒温水浴摇床中机械振荡使其充分溶解，于不同时间点精密吸取溶液适量，离心（4 000 r·min－1）5 min，取上清液或下清液用无水乙醇稀释，定容至50 mL，作为供试品溶液。注入液相色谱仪，按“2.2.1”项下色谱条件测定，用外标一点法计算各辅料中淫羊藿苷的含量。如此反复直至淫羊藿苷浓度不变，同法重复操作2次，取其平均值，即得淫羊藿苷的饱和溶解度。淫羊藿苷在不同辅料中的饱和溶解度见表2。

表1 淫羊藿苷在不同辅料中的饱和溶解度Tab 1 Solubility of icariin in various excipients

由表1可知，淫羊藿苷在油相中溶解度较好的为油酸乙酯，在乳化剂中溶解度较好的为吐温80，在助乳化剂中溶解度较好的为Transcutol。故选择油酸乙酯、吐温80、Transcutol分别为淫羊藿提取物自乳化软胶囊的油相、乳化剂和助乳化剂，进行配伍筛选试验。

2.4 处方筛选

自乳化制剂处方中，油相比例一般为25%～70%，乳化剂比例为25%以上，助乳化剂比例为0%～25%[4]。参照上述比例范围，精密称取定量的淫羊藿提取物细粉，分别加入不同比例的油相、乳化剂和助乳化剂，按“2.1”项下方法制备自乳化药液，取此乳化药液0.1 g，加入到200 mL 37℃的浓度为0.1 mol·L－1HCl溶液中，用磁力搅拌器以50 r·min－1的速度温和搅拌，以自乳化时间、色泽、澄清度为指标，判断是否形成自乳化给药系统（即自乳化时间在2 min之内，能形成具有乳光的澄清透明自乳化溶液）。绘制伪三元相图，以选定的油相、乳化剂和助乳化剂各为一角，将能形成乳液的处方确定为相图中可自乳化的点，绘制自乳化效果较好的区域，详见图2。

图2 淫羊藿提取物自乳化伪三元相图Fig 2 Pseudo ternary phase diagram of Epinmedii Folium extract self-emulsifying soft capsule

由图2可知，淫羊藿提取物自乳化区域中油酸乙酯含量（含药）在25%～45%，吐温80在40%～75%，Transcutol在0%～30%范围内，自乳化效果较好。考虑到用药的安全性和软胶囊的剂型特点，在保证制剂稳定的前提下，尽量降低乳化剂和助乳化剂用量，故确定淫羊藿提取物自乳化软胶囊的最优处方为淫羊藿提取物∶油酸乙酯∶吐温80∶Transcutol＝10∶33.75 ∶45∶11.25。

2.5 处方评价

2.5.1 稳定性试验 按最优处方制备淫羊藿提取物自乳化软胶囊，分别置于4℃冷藏柜中、室温（25℃）和冷（4℃）、热（37℃）4种温度条件下交替循环，12 h改变1次，进行稳定性考察。结果，20 d后溶液仍保持均一、透明，无沉淀析出，未出现分层现象。

2.5.2 体外溶出度试验 照溶出度测定法[5]，以900 mL 0.1 mol·L－1HCl溶液为溶出介质，转速为 100 r·min－1，温度为37℃，将6个大小、形状相同，内含2 mL溶出介质的透析袋完全浸入溶出介质中，平衡12 h。取淫羊藿提取物自乳化软胶囊和普通软胶囊各6粒，放于转篮中，分别于10、30、60、90、120 min各取出一个透析袋，倒出袋内溶液，以微孔滤膜（0.22 μm）滤过，取适量续滤液，按“2.2”项下方法测定袋内介质中淫羊藿苷的浓度。其中一透析袋在溶出介质中保留12 h后测定，作为药物从乳剂中完全释放后介质中药物的总浓度。根据各时间点淫羊藿苷的含量绘制2种制剂的溶出曲线。结果，淫羊藿提取物自乳化软胶囊的溶出度明显高于普通软胶囊。2种制剂中淫羊藿苷的溶出曲线见图3。

图3 2种制剂中淫羊藿苷的溶出曲线Fig 3 Dissolution curves of icriin in 2 preparation

2.5.3 粒径的测定 将最佳处方的自乳化药液用0.1 mol·L－1HCl溶液稀释2 000倍，放入样品池内，将光强度调节至300左右，光源为HeNe激光（λ0＝633 nm），介质为0.1 mol·L－1HCl溶液（n＝1.33），温度为20℃，维持20 min，测定粒径。结果，平均粒径为275.1 nm，粒径较小且分布较窄，呈单峰。粒径测定结果见图4。

图4 粒径测定结果Fig 4 Results of determination of particle size distribution

3 讨论

2010年版《中国药典》中淫羊藿药材中淫羊藿苷含量测定采用的稀释溶剂为稀乙醇[6]。本试验曾考察稀乙醇、50%乙醇、70%乙醇作为溶剂，结果发现含水溶剂会干扰自乳化制剂，造成制剂溶液呈现乳化状态，可能会损坏色谱柱，降低其使用寿命。选用无水乙醇作为溶剂，则可排除表面活性剂的干扰，而且淫羊藿苷等总黄酮类成分在无水乙醇中的溶解度较大，回收率较高，符合含量测定的要求。

自乳化制剂中油相的比例一般占处方的25%～70%，要求能以较少的用量溶解处方量的药物，并在低温贮藏条件下也不会有药物析出，同时遇水后容易被处方中的乳化剂乳化[4]。最早使用的油是天然植物油，但这些油溶解脂溶性药物的能力有限，自乳化性能不强。中长链脂肪酸甘油酯具有良好的流动性、溶解性能和自乳化性能，常在自乳化系统中被优先使用，故本文选用油酸乙酯作为油相。

目前，自乳化制剂还未得到充分的利用[7]，主要是由于其使用了大量的表面活性剂，长期服用可能对机体产生毒性[8]。自乳化制剂的处方筛选和质量控制是设计优良自乳化制剂的首要因素。因此，本试验在处方筛选时，首选毒性低的表面活性剂作为乳化剂和助乳化剂，认真考虑表面活性剂的用量，严格将其控制在人的安全剂量范围内，通过绘制伪三元相图来确定最优处方。

药物的释放行为是微粒给药系统的一项重要评价指标。通过查阅文献及试验对比，本文选用总体液平衡反向透析法来研究淫羊藿提取物自乳化软胶囊的释药过程，此法不仅方便、快捷，而且能准确模拟自乳化制剂的释药行为。用此方法测出制得的淫羊藿提取物自乳化软胶囊在相同条件下溶出度较普通软胶囊高，表明自乳化释药系统能有效提高淫羊藿苷等黄酮类水难溶性成分的溶出速度和溶出量。

[1]Ma H，He X，Yang Y，et al.The genusEpimedium：an ethnopharmacological and phytochemical review[J].J Ethnopharmacol，2011，134（3）：519.

[2]Chen Y，Zhao YH，Jia XB，et al.Intestinal absorption mechanisms of prenylated flavonoids present in the heat-processedEpimedium koreanumNakai（Yinyanghuo）[J].Pharm Res，2008，25（9）：2 190.

[3]杨 蕊，苏乐群，黄 欣，等.齐墩果酸自微乳化给药系统的制备及其体外溶出度考察[J].中国药房，2010，21（33）：3 128.

[4]Yoo JH，Shanmugam S，Thapa P，et al.Novel self-nanoemulsifying drug delivery system for enhanced solubility and dissolution of lutein[J].Arch Pharm Res，2010，33（3）：417.

[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：附录85.

[6]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：207.

[7]张 娜，康虞玲，刘智勤，等.自微乳化药物传递系统的应用与进展[J].中国医院药学杂志，2010，30（11）：960.

[8]Singh B，Bandopadhyay S，Kapil R，et al.Self-emulsifying drug delivery systems（SEDDS）：formulation development，characterization，and applications[J].Crit Rev Ther Drug Carrier Syst，2009，26（5）：427.