TRH静脉注射对兔周围神经再生的促进作用观察

王 磊，吕 刚，曹 阳，智晓东，于德水，范中凯，严 鹏，贾志强，刘 超

(1辽宁医学院，辽宁锦州 121001;2辽宁医学院第一附属医院)

周围神经损伤临床常见［1］。如何促使损伤的周围神经功能恢复和神经再生达到术前水平，目前尚无确切、有效的方法［2，3］。促甲状腺激素释放激素(TRH)是由下丘脑合成和分泌的一种三肽［4］，具有使呼吸加深加快、血压升高、中枢神经系统兴奋等生理作用。2011年11月～2012年3月，本研究通过静注TRH治疗兔周围神经损伤，观察其促进周围神经再生的效果。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物及试剂 雄性健康新西兰兔12只，清洁级，体质量4～4.5 kg。TRH由上海生物制品药厂生产，剂型为粉末状，500 μg/支。

1.2 坐骨神经损伤神经再生室模型的制作及分组12只新西兰白兔腹腔麻醉后，俯卧位，无菌条件下分离右侧坐骨神经，在距梨状肌下缘0.5 cm处剪断。取一段硅胶管，显微镜下用9-0无创尼龙线将神经远近端外膜与硅胶管壁缝合，神经远近端分别引入管中，保持断端间隙5 mm。建立坐骨神经损伤神经再生室模型。12只动物随机分为对照组和实验组，各6只。对照组、实验组分别于耳缘静脉注射生理盐水TRH 40 μg各40 mL，1次/d。1个月为1个疗程，间隔1个月进行下个疗程，共2个疗程。

1.3 观察指标 ①大体观察:伤口组织的愈合状态、有无肌肉萎缩、足底溃疡、有无炎症及周围组织与神经粘连情况。②组织学观察:术后4、12周，两组分别取2只兔再生神经横切干中段及桥接体远端5 mm处的神经段。HE染色和Loyez苏木素染色，观察再生神经内部结构，并于1 000倍光镜下记录单位视野内的有髓纤维数。再分别取2只兔术侧再生神经制作超薄切片，透射电镜下观察轴突和髓鞘等超微结构。③电生理检查:术后4、12周每组各取2只动物在麻醉下行神经电生理检查，用MEB-2200肌电图/诱发电位仪检测伤侧坐骨神经传导速度(MCV)以及复合肌肉动作电位波幅(MAP)。

1.4 统计学方法 采用SPSS11.5统计学软件。数据以±s表示，组间比较采用方差分析。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组动物一般情况 动物伤口均一期愈合。用药第6周，实验组发生轻度足底溃疡2只，余有局部红肿，轻度厌食2只;对照组无厌食情况，3只轻度足底溃疡，余均呈局部红肿。

2.2 两组有髓纤维生成情况 ①光镜观察结果:术后4周，两组均有一定数量的有髓纤维及少量结缔组织生长，实验组一定数量再生纤维轴突及雪旺细胞，其排列规则、致密整齐、结构均匀;对照组则排列紊乱、稀疏，并可见淋巴细胞浸润。术后12周，两组有髓纤维数量均有所增加，实验组桥接体中段及远端均可见再生纤维排列规则、分布均匀、髓鞘较厚;对照组则数量较少，分布不均，髓鞘较薄。②电镜观察结果:术后4周实验组再生纤维髓鞘规则，并可见增殖的雪旺细胞;对照组再生纤维髓鞘形态极不规则，排列紊乱。术后12周，实验组再生纤维髓鞘形态规则、较厚、内表层完整;对照组则形态不规则、较薄、内表层部分解离。

2.3 两组术后4、12周再生有髓纤维数比较 见表1。

表1 两组术后4、12周再生有髓纤维数比较(±s)

表1 两组术后4、12周再生有髓纤维数比较(±s)

注:与术后同一时间对照组相比，*P＜0.05

组别 再生有髓纤维(条)桥接体远端 桥接体中段实验组术后4 周 70.67 ± 6.34* 68.82 ± 5.89*术后12 周 113.47 ±12.03* 84.24 ± 5.91*对照组术后4 周 62.24 ± 8.31 59.36 ±10.21术后12周82.32 ±14.57 73.36 ± 4.47

2.4 两组术后4、12周伤侧坐骨神经MAP、MCV比较 见表2。

表2 两组术后4、12周伤侧坐骨神经MAP、MCV 比较( ±s)

表2 两组术后4、12周伤侧坐骨神经MAP、MCV 比较( ±s)

注:与术后同一时间对照组相比，*P＜0.05

组别 MAP(mV) MCV(m/s)实验组术后4 周 4.30 ±2.13* 9.25 ±3.01*术后12 周 6.90 ±2.53* 16.82 ±2.94*对照组术后4 周 2.20 ±1.56 4.45 ±2.26术后12周2.51 ±2.31 5.26 ±2.21

3 讨论

周围神经损伤是骨科常见疾病，自体神经移植是常用的治疗方法［5，6］，然而神经移植后再生速度非常慢，治疗效果不理想。TRH可作用于机体很多器官和组织，对其生长、代谢和组织分化等方面有重要影响［7］。TRH的作用由其受体介导，而 TRH受体广泛存在于于大脑、脊髓背角和腹角及外周神经等组织中。TRH对呼吸系统的作用主要表现为呼吸频率增加、潮气量稍减少、肺通气量不变或略增加，微量TRH注入脑室或中枢核团内即可引起明显的呼吸增快效应［8］。TRH对心血管中枢也有明显的兴奋作用，主要表现为血压升高、心率加快［9］。有学者发现TRH在通过增加交感神经活动而引起外周血管收缩、血压升高的同时，对脑血管产生扩张效应，增加脑血流量，并伴有脑代谢增加。但TRH的脑血管扩张作用只在脑血流量减少的情况下才出现，而对清醒动物在正常血压情况下，对脑血管阻力无作用。TRH以神经递质或神经调节物的形式作用于中枢神经，促进麻醉后意识和呼吸的恢复，增强乙酰胆碱诱发的兴奋性反应，对脊髓运动神经元具有类似谷氨酸的兴奋性作用［8，9］。由此认为，TRH可能是脑内一种内源性兴奋性物质，并在脊髓运动功能中起重要的调节作用［10］。

本研究发现，实验兔静注TRH后4、12周，实验组再生纤维排列规整、结构均匀，髓鞘厚，数量多，明显优于对照组。电生理检查结果显示，实验组损伤侧坐骨神经的MAP、MCV均优于对照组，说明静注TRH能够有效促进周围神经的再生。

本研究中实验组一次静注的TRH剂量为40 μg，动物均未出现甲亢的症状。用TRH治疗外周神经损伤时应掌握适当的治疗剂量，这仍需进一步研究。有学者［11］曾用TRH治疗神经系统疾病，取得肯定的疗效，且没有甲亢和心功能障碍发生，这表明TRH有希望在合适浓度及剂量下安全应用于人体。本研究为临床应用TRH静注治疗外周神经损伤患者打下了理论基础。

［1］De Vries M，Cooper HM.Emerging roles for neogenin and itsligands in CNS development［J］.J Neurochem，2008，106(4):1483-1492.

［2］Cole SJ，Bradford D，Cooper HM.Neogenin:A multi-functionalreceptor regulating diverse developmental processes［J］.Int J Biochem Cell Biol，2007，39(9):1569-1575.

［3］Wilson NH，Key B.Neogenin:one receptor，many functions［J］.Int J Biochem Cell Biol，2007，39(5):874-878.

［4］Albin RL，Mink JW.Recent advances in Tourette syndrome research［J］.Trends Neurosci，2006，29(3):175-182.

［5］Pallini R，Vitiani LR，Bez A，et al.Homologous transplantation ofneural stem cells to the injured spinal cord of mice［J］.Neurosurgery，2005，57(5):1014-1025.

［6］Levi AD，Dancausse H，Li X，et al.Peripheral nerve grafts promotingcentral nervous system regeneration after spinal cord injury in the primate［J］.J Neurosurg Spine，2002，96(Suppl 2):197-205.

［7］Zhu XJ，Wang CZ，Dai PG，et al.Myosin X regulates netrin receptors and functions in axonal path-finding［J］.Nat Cell Biol，2007，9(2):184-192.

［8］宁光，叶蕾.基因突变与遗传性内分泌代谢性疾病［J］.国际内分泌代谢杂志，2006，26(6):361-370.

［9］Meek MF，Coert JH.US Food and Drug Administration/Conformit Europe-approved absorbable nerve conduits for clinical repair of peripheral and cranial nerves［J］.Ann Plast Surg，2008，60(6):110-116.

［10］聂振军，张义龙，刘雷.肱骨近端骨折脱位并发臂丛神经损伤的治疗［J］.中华临床医师杂志电子版，2011，5(7):2116-2118.

［11］徐思振，刘芹，付文婷，等.TRH治疗神经系统变性疾病58例临床分析［J］.山东医药，2007，47(16):66-67.