正交试验优选暖脐膏醇提工艺

仇 凡 李明梅 火跃芳 陈 俊

1.盐城卫生职业技术学院药学系，江苏 盐城 224001；2.江苏南京中康药物科技有限公司，江苏 南京 210009

暖脐膏（橡胶膏）是一种传统的中药处方，收载于中华人民共和国卫生部部颁标准第15册[WS3-B-3010-98]。它由当归、白芷、乌药、小茴香、八角茴香、木香、香附等13味中药组成，具有温里散寒、行气止痛的功效，常用于寒凝气滞、少腹冷痛、脘腹痞满、大便溏泻等症状。其制法为取处方中除乳香、没药、麝香外，其余当归等10味药材，用75%～85%乙醇回流提取，浓缩得浸膏；将乳香、没药、麝香及上述浸膏加入由橡胶、松香等制成的基质中，制成涂料[1]。笔者在工艺研究中，不拟对其基本工艺进行改变，但拟进一步细化。原暖脐膏标准中提取工艺未明确所用乙醇的浓度、乙醇的用量、提取的时间以及提取次数，本项研究以当归中阿魏酸的提取量为指标，通过实验确定了乙醇的浓度、乙醇的用量、提取时间以及提取次数，完善了提取工艺。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1100液相色谱仪（美国 Agilent公司），Mettler AE240电子天平（10万分之一），SYZ-A石英亚沸高纯水蒸馏器（江苏信达仪器厂），HH-6恒温水浴锅（国华电器有限公司）。

1.2 试药

乙醇（分析纯），甲醇（TEDIA，USA，色谱纯），水（重蒸馏，临用前制备），醋酸（上海化学试剂有限公司，分析纯），阿魏酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0733-9910）；当归、白芷、乌药、小茴香、八角茴香、木香、香附、乳香、母丁香、肉桂、沉香均购于江苏省淮阴药材采购供应站。

2 方法与结果

2.1 正交试验的设计[2-4]

以当归中阿魏酸的提取量为考察指标，选用L9（34）正交试验，考察药材提取所用乙醇的浓度、乙醇的用量、提取的时间以及提取次数，各因素水平见表1。

表1 提取工艺的因素水平

按处方量配比平行称取药材9份（58 g/份），依据表1具体试验参数进行试验。

2.2 暖脐膏醇提取部分得膏率的测定方法

分别精密吸取50 mL醇提取液，置于精密称重的洁净蒸发皿中，水浴挥至近干，加入精密重量的柱层析硅胶，搅匀，低温鼓风干燥至恒重，置干燥器中冷却后迅速称定重量，按下式计算：干浸膏得率＝（W1/W）×100%。式中，W1为 50 mL提取液中干浸膏质量；W为每份药材的质量。

2.3 阿魏酸含量的测定[5-8]

2.3.1 色谱条件 Agilent KR100-5 C18（5μm，4.6 mm×250 mm）；流动相：甲醇-水-醋酸（25.0∶75.0∶0.7）；流速：1 mL/min；检测波长为 280 nm；柱温：30℃；进样量：5 μL；理论塔板数按阿魏酸峰计算不低于2 000。

2.3.2 对照品溶液的制备 精密称取阿魏酸对照品适量，加流动相溶解制成每1 mL含49.8μg阿魏酸的溶液，即得。

2.3.3 供试品溶液的制备 分别将9份醇提液浓缩并定容至200 mL 量瓶中，分别取 25 mL，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。

2.3.4 线性关系的考察 精密称取阿魏酸对照品适量，加甲醇制成浓度分别为 20.02、33.30、48.62、65.77、82.40、95.25μg/mL的溶液，分别精密称取上述各对照品溶液5 μL，注入液相色谱仪，测定色谱峰面积。以对照品溶液进样量（μg）为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线，计算得回归方程为 Y=1.54X×106＋3.32×105（r=0.999 6）。 表明阿魏酸进样量在0.10～0.47μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.3.5 样品含量测定 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各5 μL，注入液相色谱仪，按《中国药典》2010年版一部附录ⅥD法[9]测定。

2.4 正交试验分析

根据得到的阿魏酸含量和得膏率结果，按下式计算综合评分：综合评分=（阿魏酸含量/最高阿魏酸含量）×100×0.7+（得膏率/最高得膏率）×100×0.3。 正交试验结果见表 2，方差分析结果见表3。

表2 醇提正交试验结果分析

表3 方差分析结果

根据数理统计理论，笔者对实验数据进行计算和分析。从表2和表3可知，影响提取效果的因素大小依次为：D＞B＞C＞A，较主要的因素是D，即提取次数对阿魏酸提取量和得膏率有显著影响，其次是 B、C、A。水平优势为 A1＞A3＞A2，B2＞B1＞B3，C3＞C2＞C1，D2＞D1＞D3，因此最优提取工艺为 A1B2C3D2。即加 9 倍量75%乙醇，提取90 min，再加6倍量75%乙醇，提取60 min。

2.5 验证试验

为了验证最佳工艺的合理性，按A1B2C3D2条件制备暖脐膏配方药材3批，测定提取液得膏率以及阿魏酸的含量。结果各项指标RSD均小于7%，表明该工艺较稳定，重现性好。并且该项试验结果较正交试验结果好，表明优化条件可行，故确定最佳工艺为A1B2C3D2。见表4。

表4 最佳工艺条件验证结果

3 讨论

笔者在预实验时按照中药材提取的常规操作，将药材浸泡在溶剂中，为了减小这一操作对实验结果的影响，故将浸泡时间一致定为30 min。综合考虑该剂型的需要，将得膏率作为指标之一，最后以综合评分的形式评价提取工艺。另外该方剂中的有效成分以小分子化合物居多，且有挥发性，所以在操作过程中需要注意实验环境的温度和湿度，以减小实验误差。实验证明，分次提取的效果最好，但是提取的时间均较长，这也是和实验室常规提取小分子物质如挥发油成分的情况是吻合的。

[1]国家药典委员会.卫生部药品标准中药成方制剂[S].中国中药杂志，1998：210-211.

[2]谢秀琼，周淑芳，韩丽，等．现代中药制剂新技术[M].北京：化学工业出版社，2004：348-351.

[3]张晓云，马蓉，王荷，等．复方半夏止咳贴膏剂的工艺研究[J].兰州医学院学报，2001，27（4）：17.

[4]雷黎明，王先教，周家茂，等.正交设计优选活络健骨胶囊的提取工艺[J].中国医药导报，2011，8（3）：64-65.

[5]姚永珍，崔晓光，高玉香.当归浸膏片中阿魏酸含量比较研究[J].药物分析杂志，1994，14（1）：54.

[6]张立坤，陈新旺，邹安庆，等.高效液相色谱法测定复方制剂中阿魏酸和川芎嗪[J].中草药，1996，27（4）：213.

[7]何玲玲.高效液相色谱法测定当归养血丸中阿魏酸含量[J].中国医药导报，2011，8（3）：60-61.

[8]贺云彪，刘军，伍良知.高效液相色谱法测定当归养血丸中阿魏酸含量[J].中国现代药物应用，2010，4（16）：15-17.

[9]国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：附录 37.