高效液相色谱法测定止痛清晕胶囊中芍药苷含量

郑美善，徐莲花，崔永学

(吉林省延边朝鲜族自治州食品药品检验所，吉林 延边 133000)

止痛清晕胶囊是由白芍、甘草、桂枝、姜黄、红花、威灵仙等9味药组成的复方制剂，主要功效为通络活血、止痛清晕，用于颈椎病引起的颈部疼痛、肢体麻木、头晕、视物昏花，亦可用于脑动脉硬化引起的供血不足。本制剂的原质量标准无含量测定方法，为有效控制该制剂的质量，笔者采用高效液相色谱法对白芍中的芍药苷进行了含量测定，报道如下。

1 仪器与试药

Younglin高效液相色谱仪，Younglin Autochro－2000工作站;KQ－200KDE型超声波清洗器(上海必能信超声有限公司)。止痛清晕胶囊(吉林省汪清县中医院制剂室);芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号为110736－200526);乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[1]

色谱柱:Kromasil C18柱(200 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈－水(17∶83);流速:0.8 mL/min;检测波长为230 nm;进样量:10 μL;柱温:40℃。理论板数按芍药苷峰计算应不低于2500。在此色谱条件下，色谱图见图1。

2.2 溶液制备[1]

精密称取芍药苷对照品适量，加乙醇制成每1 mL含40μg的溶液，即得对照品贮备液。精密量取对照品贮备液(0.201 g/L)0.4，0.6，0.8，1.0，1.5，2.0 mL，分别置5 mL容量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。取装量差异项下的本品内容物10粒，研细，取2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇50 mL，密塞，称定质量，超声处理30 min，放冷，再称定质量，用乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.3 方法学考察

图1 高效液相色谱图

阴性对照试验:取按处方比例及工艺配制缺白芍的阴性样品，按供试品溶液制备的方法制备阴性对照品溶液，按上述条件依法测定。结果表明，在芍药苷峰位处，阴性对照品溶液无干扰(图 1)。线性关系考察:精密吸取各对照品溶液10 μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，以芍药苷进样量(μg)为横坐标、峰面积值为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y=0.0003 X+0.0056，r=0.9997(n=6)。结果表明，芍药苷进样量在 0.1608 ～ 0.8040μg 范围内与峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验:取同一对照品溶液10 μL进样，重复操作6次。结果芍药苷峰面积积分值的 RSD=0.9%，表明方法精密度良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液适量，分别于 0，2，4，6，8 h时测定，记录色谱图。结果的 RSD=0.8%(n=5)，表明供试品溶液在8 h内基本稳定。

重复性试验:取同一批样品6份(批号为20090101)，分别精密称定，按供试品溶液制备方法和色谱条件测定。结果的 RSD=0.8%，表明方法重复性良好。

加样回收试验:精密称取已知含量的样品(批号为20100101，含量为0.275 mg/粒)1 g，精密称定，共取6份，分别精密加入芍药苷对照品(0.0181 g/L)适量，照供试品溶液制备的方法制备，依法测定，计算回收率。结果见表1。

表1 芍药苷加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取3个批号的样品，依法测定。结果批号为 20100101，20100102，20100103的3批样品中芍药苷的含量分别为0.275，0.274 ，0.276 mg/粒。

3 讨论

取样品2 g，对不同超声时间(20，30，40 min)的提取效果进行了考察，结果超声提取时间影响不大，故选择超声提取30 min。参照2005年版《中国药典(一部)》方法，分别用甲醇和乙醇提取，根据过滤时的难易程度和所得色谱峰的情况以及回收率测定结果，确认用乙醇提取的效果更好。

白芍为止痛清晕胶囊中的主要药材之一。用高效液相色谱法测定止痛清晕胶囊中白芍主要成分芍药苷的含量，出峰时间适宜，阴性对照无干扰，样品峰形和分离效果好。因此，高效液相色谱法简便、灵敏、重现性好，测定结果准确、可靠，可用于该制剂的含量测定和质量控制。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，2005:312.